Слайд 2 Обратимое
I связывается с E нековалентными связями → [IE] легко распадается, активность
E при этом восстанавливается
Слайд 3
Конкурентное (изостерическое)
I - структурный аналог S
I связывается с активным центром E
→ между I и S возникает конкуренция за активный центр
Слайд 4Пример конкурентного ингибирования – торможение сукцинатдегидрогеназы малоновой кислотой
Слайд 5 Для устранения действия конкурентного I необходимо увеличить концентрацию S или удалить I
Слайд 6Конкурентное ингибирование (1 – без I, 2 – с I) графически выражается
с помощью кривой Михаэлиса (а) и прямой Лайнуивера-Берка (б):
Слайд 7Т.о.,
в присутствии конкурентного I Vmax реакции не меняется, а Кm увеличивается →
сродство E к S уменьшается.
Слайд 8 На принципе конкурентного ингибирования основано действие многих ЛВ, например, группа ацетилхолинэстеразных препаратов,
являющихся конкурентными I АХЭ по отношению к S ацетилхолину: прозерин, физостигмин, эндофоний, севин и др.
Слайд 9Присоединение конкурентного I прозерина в акт.ц. АХЭ
Слайд 10 Необратимо действуют фосфоорганические препараты: армин, нибуфин, хлорофос, зарин, зоман, фосфорилируя каталитический участок
АХЭ
Слайд 11Сульфаниламид – структурный аналог парааминобензойной кислоты
Слайд 12 Фолиевая кислота образуется в клетках бактерий, если они получают п-аминобензойную кислоту.
Сульфаниламиды
ингибируют Е, у которых при синтезе фолиевой кислоты используется п-аминобензойная кислота
Слайд 13 Эти Е могут использовать в качестве S сульфаниламиды → синтезируется не фолиевая
кислота, а ее аналог, не способный выполнять функции кофермента →
Слайд 14→ в бактериальных клетках возникает недостаток фолиевой кислоты, нарушаются все реакции, в
которых она участвует, и размножение бактерий становится невозможным
Слайд 15Неконкурентное (аллостерическое)
Это такое ингибирование, при котором I взаимодействует с Е не в
активном центре (А), а в аллостерическом (R).
Связывание I с R приводит к изменению конформации А и ↓ способности связываться с S.
Слайд 17Неконкурентное ингибирование (1 – без I, 2 – с I) графически выражается
с помощью кривой Михаэлиса (а) и прямой Лайнуивера-Берка (б):
Слайд 18Т.о.
под действием неконкурентного I Vmax уменьшается, а Кm не изменяется → сродство
E к S остается без изменений
Слайд 19 В роли регуляторов V ферментативных реакций наиболее часто выступают: гормоны, медиаторы, ионы
металлов, коферменты, различные метаболиты и т.д.
Ингибиторами аллостерических ферментов являются часто конечные продукты (Р), а исходные (S) активаторами.
Слайд 21
Активаторы ферментов
1. Ионы
K+, Na+, Mg2+, Mn2+, Co2+, Zn2+, Fe2+, Cl-, SO42-,
PO43- и др.
Механизм их действия:
способствуют стабилизации А;
участвуют в образовании мостика между E и S.
Слайд 22 2. Специфические агенты (н-р, HCl) и другие ферменты
Регуляция сводится к превращению проферментов
(неактивных предшественников Е) в активные Е под влиянием специфических агентов или других ферментов-протеиназ.
Слайд 23Н-р, пепсиноген превращается в пепсин в результате ограниченного протеолиза:
под действием HCl отщепляется
пептид, который затрудняет доступ S к A профермента → E переходит в активную форму - пепсин, к-рый действуя на пепсиноген, делает то же самое, но с большей скоростью (аутокатализ).
Слайд 24Активность некоторых Е может регулироваться с помощью химической модификации, н-р, путем фосфорилирования-дефорилирования:
Слайд 263. Аллостерические активаторы
Связываются с R, в результате чего конформация E изменяется
т.о., что она оптимально соответствует структуре S
Слайд 28 4. Активаторы, способствующие объединению неактивных субъединиц E в активный надмолекулярный комплекс, имеющий
четвертичную структуру
Слайд 29
Изоферменты
Это различные молекулярные формы одного и того же фермента, катализирующие одну и
ту же реакцию, отличающиеся вследствие генетических различий особенностями строения и физико-химическими свойствами (первичной структурой, электрофоретической подвижностью, Кm, локализацией в клетке).
Слайд 30 Например, лактатдегидрогеназа (ЛДГ) имеет четвертичную структуру, содержит 2 типа субъединиц М и
H (от heart - сердце). Путем комбинации этих двух субъединиц образуются 5 изоформ ЛДГ:
Слайд 31ЛДГ1 – НННН (Н4)
ЛДГ2 – НННМ (Н3М)
ЛДГ3 – ННММ (Н2М2)
ЛДГ4 – НМММ
(НМ3)
ЛДГ5 – ММММ (М4)
Слайд 33ЛДГ на электрофореграмме в различных органах
Слайд 34Мультиэнзимные комплексы (МЭК) -
надмолекулярные ферментативные системы, состоящие из различных Е, катализирующих последовательные
этапы одного метаболического пути. Отдельные компоненты этих комплексов связаны между собой и функционируют только совместно.
Слайд 35т.е.
МЭК – это группа Е, катализирующая последовательное превращение S:
А → В →
С → D и т.д.
Е1 Е2 Е3
Слайд 36 Существует несколько видов МЭК, в основе организации которых лежит единство:
1 – функциональное
2
– структурно-функциональное
3 – смешанный тип
Слайд 371
Отдельные Е объединены в полиферментную систему. Н-р, гликолиз: S1 → P1(S2) →
P2 (S3) →... → P
Е1 Е2 Е11
Каждая реакция катализируется отдельным Е и каждый из P является S следующего Е
Слайд 382
Е образуют структурные системы с определенной функцией при помощи Е-Е взаимодействий. Н-р,
полиферментный комплекс – пируватдегидрогеназа, состоящий из 3-х E и 5 коферментов, участвующих в окислении ПВК
Слайд 40синтетаза высших жирных кислот, состоящая из 7 структурно связанных Е, в целом
выполняющих общую функцию – синтез жирных кислот.
Слайд 413
Представляет комбинацию обоих типов организации. Н-р, цикл Кребса, в котором часть Е
объединена в α-кетоглутаратдегидрогеназный комплекс (2), а другая часть соединена функционально (1)
Слайд 42Биологическое значение
Образуется «молекулярный конвейер», благодаря которому:
значительно сокращается расстояние, на которое переносятся
субстраты;
Е работают более согласованно;
облегчается регуляция Е;
значительно экономится энергия.
Слайд 43Медицинская энзимология
Энзимопатология
Энзимодиагностика
Энзимотерапия
Слайд 44Энзимопатология изучает наследственные или приобретенные дефекты ферментных систем – энзимопатии. Различают энзимопатии:
1 – первичные (наследственные)
2 – вторичные (приобретенные), наблюдающиеяся при всех болезнях
Слайд 45Н-р, 1:
Фенилкетонурия – заболевание, при котором отсутствует Е гидроксилаза, превращающая фенилаланин в
тирозин. В результате накапливается фен и продукты его метаболизма, повреждающие нервную систему новорожденного ребенка → олигофрения (слабоумие)
Слайд 46Энзимодиагностика заключается в постановке диагноза заболевания на основе определения активности Е в
биологических жидкостях
Слайд 47Например:
При инфаркте миокарда увеличивается содержание ферментов ЛДГ1 и ЛДГ2, аспартатаминотрансферазы.
При вирусном гепатите
увеличивается содержание ЛДГ4 и ЛДГ5
Слайд 48Энзимотерапия – использование ферментов в качестве лекарственных средств.
Имеет много ограничений вследствие
высокой иммуногенности ферментов.
Слайд 49Имеет следующие направления:
Заместительная терапия – использование ферментов в качестве лечебных препаратов в
случае их недостаточности (пепсин, панкреатин)
Слайд 50Использование в качестве дополнительных терапевтических средств
(н-р, различные гидролитические ферменты для ускорения
заживления ран – пепсин, трипсин, ДНК-азы, РНК-азы, гиалуронидазы)
Слайд 51
Трудности в использовании ферментов:
нестабильность
антигенные свойства
практически невозможность доставки к клеткам-мишеням
Слайд 52Для увеличения стабильности Е их связывают с различными инертными носителями (целлюлоза, крахмал).
Для
снижения антигенных свойств используют микрокапсулы (н-р, липосомы), тени эритроцитов (эритроцитарные молекулы без содержимого)
Слайд 53Для направленного действия Е на мишень, на поверхности микрокапсулы прикрепляют векторную молекулу
антитела, которое взаимодействует только со специфическим антигеном на поверхности клетки-мишени
Слайд 54Ферменты широко используются для определения содержания различных веществ в биологических жидкостях
Н-р, с
помощью иммуноферментного анализа (ИФА)