Микроскопический метод исследования. Морфология микроорганизмов. Занятие №4

Занятие№4
Тема: Микроскопический метод исследования.
Морфология микроорганизмов.

План занятия:

ИСТОРИЧЕСКАЯ СПРАВКА:
Основоположником вирусологии является русский ученый профессор ботаники Дмитрий Иосифович Ивановский (1864-1920), установивший в 1892 г., что мозаичная болезнь табака (МБТ) вызывается инфекционным агентом, фильтрующимся через фарфоровые фильтры (свечи Пастера-Шамберлана) с такими мелкими порами, которые задерживали известные в то время микроорганизмы.
Более того, он гениально предположил, что мельчайший агент фильтрата листьев МБТ, вызывавший при заражении здоровых листьев табака такую же мозаику, имеет корпускулярную структуру, т. е. состоит из дискретных частиц-телец, а не является contagium vivum fluidum (жидким живым началом), как утверждал в 1899 г. повторивший его исследование знаменитый голландский микробиолог Мартин Бейеринк. К его чести, он отметил в своей статье: «Подтверждаю, что приоритет с фильтрованием через бактериальные свечи сока зараженных листьев МБТ принадлежит господину Ивановскому».
В клетках листьев МБТ растения Д. И. Ивановский сумел в световом микроскопе увидеть к тому же кристаллы, представляющие скопления вируса табачной мозаики, которые в 1935 г. получил в чистом виде выдающийся американский ученый-биохимик - первый лауреат Нобелевской премии по вирусологии Уэнделл Стенли. Вирусами основатель микробиологии Луи Пастер называл всех известных ему микробов. В вирусологию этот термин ввел Мартин Бейеринк.

ВИРУСЫ:
Относятся к царству «VIRA». Это мельчайшие микроорганизмы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие один тип нуклеиновой кислоты(ДНК или РНК). Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, размножаются в цитоплазме или ядре. Отличаются особым дизъюнктивным (разобщенным) способом размножения. Сформированная вирусная частица- вирион.

В основу современной классификации вирусов положены следующие основные критерии:
1.Тип нуклеиновой кислоты.
2.Наличие липопротеидной оболочки.
3.Размер и морфология вириона, тип симметрии, число капсомеров.
4.Круг восприимчивых хозяев.
5.Патогенность.
6.Географическое распространение.
7.Способ передачи.
8.Антигенные свойства.
Вирусы делятся на семейства, подсемейства, роды и типы. Семейство – viridae, подсемейство – virinae, род – virus.
Современная классификация вирусов человека и животных распределяет на 19 семейств, из них 7 – ДНК содержащие и 12 – РНК содержащие вирусы.
КЛАССИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ:

СТРУКТУРА И ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ ВИРУСОВ:

Просто устроенные вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и капсида. Сложно устроенные вирусы состоят из нуклеиновой кислоты, капсида и липопротеиновой оболочки.

ТИПЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ВИРУСА С КЛЕТКОЙ:

ЭТАПЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ВИРУСА С КЛЕТКОЙ:
Адсорбция
Проникновение
Раздевание
Синтез вирусных компонентов, формирование вирионов.
Выход вирионов из клетки

В нейронах головного мозга зараженных вирусом бешенства животных (кроликов, белых мышей, крыс, морских свинок и др.) образуются цитоплазматические включения, содержащие РНК и антигены вируса. Эти включения впервые были описаны Бабешем (1892) и Негри (1903) и названы тельцами Бабеша-Негри (представляют собой эозинофильные включения вируса овальной формы размером 1-15 мкм, состоящие из вирусного РНП). Бактериоскопическая диагностика бешенства включает обнаружение телец Бабеша-Негри в мазках-отпечатках или срезах из ткани мозга с помощью окраски по Ром-Гимзе и др.

ТЕЛЬЦА БАБЕША-НЕГРИ:
цитоплазматические эозинофильные включения, обнаруживаемые в клетках гиппокампа при бешенстве.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ. МЕТОДЫ ОБОРУДОВАНИЕ:
1.Прокаливание:
Осуществляется в пламени спиртовой или газовой горелки. Прокаливаются: бактериологические петли, препаровальные иглы, пинцеты и т.д – до «белого», «красного» каления.

2. Стерилизация кипячением:
Шприцы, мелкий хирургический инструмент, предметные и покровные стекла.
Все помещается в стерилизаторы с водой. Для устранения жесткости добавляют 1-2% р-р бикарбоната натрия. Кипятят не менее 30минут. Гарантии полного уничтожения спор и вирусов нет( вирус гепатита остается жизнеспособным)

3. Стерилизация сухим жаром:
(печи Пастера)
Основано на бактерицидном действии нагретого до 165-1800С. Такой стерилизации подвергается: стеклянная посуда – Чашки Петри, пробирки, пипетки.

4.Стерилизаци паром под давлением: ( автоклав)
Один из самых эффективных методов стерилизации. Стерилизации подвергаются – простые питательные среды, перевязочный материал, белье. Стерилизацию производят под разной величиной давления: обеззараживание инфицированного материала – 1,5-2 атм. 20-25 мин.

5.Стерилизация текучим паром в аппарате Коха или автоклаве:
Применяется в том случае, если стерилизуемый материал не выдерживает высоких температур. Для полного обеспложивания используют метод дробной стерилизации. Заключается он в том, что материал стерилизуется, при 1000С в течение 20-30мин 3 дня подряд. При этом вегетативные клетки погибают, а споры прорастают. Дальнейшее двукратное прогревание обеспечивает надежную стерильность материала

6.Тиндализация:
Дробная стерилизация материалов при 56-580С в течение часа 5-6 дней подряд.
Применяется для легко разрушающихся материалов: сыворотка крови, витамины.
Тиндализация
7.Пастеризация:
антибактериальное действие температуры в отношении вегетативных клеток, но не бактериальных спор. Температура воздействия 50-600С 15-30 мин. Или 70-80С 5-10мин, с быстрым охлаждением. Пастеризуется( вино, молоко, соки, пиво и т.д)

8.Стерилизация УФ-лучами:
Длина волны 260-300мкм. Стерилизация воздуха в боксах, операционных и т.д

ДЕЗИНФЕКЦИЯ:
= хлорамин (0,5-5%р-р)
= хлорная известь (0,1-10% р-р)
= фенол или карболовая кислота (3-5%р-р)
= лизол(3-5%)
=ДТСГК(0,1-10%)

ДЕЙСТВИЕ КАРБОЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА КУЛЬТУРУ E. COLI.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ.
№1:
E.coli
Контроль
№2:
E.coli
Карболовая кислота
Опыт