Слайд 2Флуоресцентная микроскопия — это метод получения увеличенного изображения с использованием люминесценции возбуждённых атомов и молекул
![Флуоресцентная микроскопия — это метод получения увеличенного изображения с использованием люминесценции возбуждённых атомов и молекул образца](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-1.jpg)
образца
Слайд 3Гидромедуза Aequorea victoria
![Гидромедуза Aequorea victoria](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-2.jpg)
Слайд 5Во-первых, в отличие от других флуоресцентных меток, GFP-подобным белкам для свечения не
![Во-первых, в отличие от других флуоресцентных меток, GFP-подобным белкам для свечения не](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-4.jpg)
нужны никакие вспомогательные вещества, кроме молекулярного кислорода, поэтому клетка остаётся живой и неповреждённой.
Во-вторых, в отличие от других красителей, GFP — это белковая молекула, которая синтезируется в клетке по своему генетическому коду. А современные методы генной инженерии позволяют «сшить» ген любого белка с геном флуоресцирующего белка, а затем внести эту генетическую «химеру» в клетку или модельный организм. Такая генетически модифицированная клетка начинает синтезировать сложный «химерный» белок, содержащий светящуюся белковую молекулу.
В-третьих, молекула флуоресцирующего белка достаточно маленькая и поэтому практически не влияет на своего «партнёра». Это означает, что вся сложная белковая конструкция выполняет те же функции, что и сам белок без флуоресцентной метки
Слайд 6 Флуоресцентное «творчество». а — «Рисунок» бактериями, экспрессирующими гены различных флуоресцентных белков,
![Флуоресцентное «творчество». а — «Рисунок» бактериями, экспрессирующими гены различных флуоресцентных белков, на](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-5.jpg)
на чашке петри. б — Мыши, несущие ген зеленого флуоресцентного белка, и обычные мыши.
Слайд 7Зелёный флуоресцентный белок характеризуется двумя пиками поглощения при длинах волн 395 нм (основной) и
![Зелёный флуоресцентный белок характеризуется двумя пиками поглощения при длинах волн 395 нм](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-6.jpg)
475 нм (минорный) и пиком флуоресценции на 498 нм.
Белок состоит из 238 аминокислот с молекулярной массой 26,9 кДа.
Белок представляет собой бета-складчатую структуру формирующую «бочонок» или «цилиндр» из 11 поворотов первичной последовательности, внутри которого располагается альфа-спираль с хромофором
Слайд 8Оболочка цилиндра защищает хромофор от тушения его флуоресценции компонентами микроокружения.
Кроме этого,
![Оболочка цилиндра защищает хромофор от тушения его флуоресценции компонентами микроокружения. Кроме этого,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-7.jpg)
внутренняя структура молекулы вызывает специфические реакции циклизации трипептида Ser65-Tyr66-Gly67, что приводит к образованию хромофора. Этот процесс называется созреванием и включает несколько этапов, каждый из которых формирует промежуточный или конечный продукты с различными спектральными свойствами
Слайд 9Пептидный остов отмечен серым цветом, хромофор (Gln65—Tyr66—Gly67) — красным. Углубление, формирующее канал, показано в виде оранжевой сетки,
![Пептидный остов отмечен серым цветом, хромофор (Gln65—Tyr66—Gly67) — красным. Углубление, формирующее канал,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-8.jpg)
охватывающей молекулы воды (синие сферы).
Слайд 10Анализ экспрессии генов
Прижизненное мечение организмов, тканей, клеток, клеточных структур и белков
![Анализ экспрессии генов Прижизненное мечение организмов, тканей, клеток, клеточных структур и белков](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-9.jpg)
Слайд 18(TagBFP)
(TagCFP)
(TagYFP)
(TagRFP)
(TagFP635)
![(TagBFP) (TagCFP) (TagYFP) (TagRFP) (TagFP635)](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-17.jpg)
Слайд 21Химические структуры и пути
созревания хромофоров
GFP-подобных белков,
встречающихся в природе
![Химические структуры и пути созревания хромофоров GFP-подобных белков, встречающихся в природе](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/895922/slide-20.jpg)