Значение современной иммунодиагностической тест-системы ЕАА (анализ активности эндотоксина) в оценке комплексной интенсивной те

РОЛЬ ЭНДОТОКСИНА В ПАТОГЕНЕЗЕ СЕПСИСА
G.Guadagni et al. Critical Care Neph. Ch.284: 1557-560

Эндотоксин описан в 1892 Ричардом Пфайфером.
Липидная часть А эндотоксина всех видов грамотрицательных бактерий является мишенью при анализе активности эндотоксина.

Метод А. Качественный гель-тромб тест.
Метод В. Количественный гель-тромб тест.
Точность определения содержания эндотоксина этим методом не очень высокая. Поэтому в Европейской фармакопее метод называется полуколичественным анализом. Несмотря на это, количественный гель-тромб тест достаточно широко используется в научно-исследовательских работах.
Метод С. Кинетический турбидиметрический тест.
Метод D. Кинетический хромогенный тест.
Метод Е. Хромогенный тест по конечной точке.
Метод F. Турбидиметрический тест по конечной точке.
«Бактериальные эндотоксины», Европейская фармакопея
.
Модификации методов LAL-теста

ия
Определения уровня эндотоксина в плазме крови проводили при помощи гель-тромб теста
(вариант методики в Техническом Бюллетене BioWhittaker (Cambrex) №12)
Принцип метода:
эндотоксин
Профермент Коагулаза
фермент
Коалулоген Коагулин
В основе лежит реакция взаимодействия эндотоксина и лизата амебоцитов Limulus, полученного из амебоцитов мечехвоста рода Limulus. В ходе реакции эндотоксин вызывает помутнение лизата и образование геля. Концентрация эндотоксина измеряется в единицах эндотоксина на 1 мл (ЕДэ/мл)

ЕАА – определение уровня активности эндотоксина
ЕАА - представляет собой экспресс-анализ цельной крови, позволяющий диагностировать наличие LPS в крови при грамотрицательной бактериальной инфекции, а также прогнозировать риск возникновения тяжелого сепсиса.
ЕАА является единственным количественным лабораторным тестом утвержденным Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA).
В России тест-система зарегистрирована 18 августа 2009 года
(№ФСЗ 2009/04982).

ПРИНЦИП МЕТОДА ЛЮМИНОЛЬНОЙ ХЕМОЛЮМИНИСЦЕНЦИИ
Принцип метода: Присутствующий в крови эндотоксин распознается и связывается антиэндотоксиновыми антителами (иммуноглобулины М), после чего доставляется к нейтрофилам через комплементные рецепторы. В присутствии зимозана нейтрофилы подвергаются респираторному взрыву, который сопровождается излучением света. Количество испускаемого света, определяемого на хемолюминометре пропорционально количеству эндотоксина.

Определение активности эндотоксина (EAA™)
методом хемолюминисценции

Интерпретация результатов
EAA < 0,40 – характеризует низкую концентрацию эндотоксина в крови и невысокий риск развития инфекционно-септических осложнений.
ЕАА 0,40-0,59 – характеризует средний уровень концентрации эндотоксина в крови и представляет повышенный риск развития тяжелого сепсиса
ЕАА > 0,60 – характеризует высокий уровень концентрации эндотоксина в крови и предс-тавляет высокий риск развития тяжелого сепсиса

Зависимость уровня активности эндотоксина (EAA)
от концентрации LPS
John Marshall et al., Journal Infect. Dis., 2004, 190, 527
Пограничная зона
0.6-1.0
высокий EAA
0-0.39
низкий EAA

Зависимость между уровнем активности эндотоксина и
тяжестью состояния пациентов
(Ya.Kakihara, анализ одноцентрового исследования, 2007)
Уровень EAA
Данные представлены на XII Ежегодном конгрессе «Endotoxemia in Critical Care», Фукуока, Япония, 29.02. 2008

Уровень активности эндотоксина- как предиктор летальности
Klein D, Monti G, Bottiroli S et al. Crit Care Med dec. 2009

Характеристика больных
Обследованы 48 взрослых пациентов с инфекционно-септическими осложнениями после операций на сердце. Средний возраст 55,5 (51-61,5) лет.
36 больным выполнена хирургическая коррекция клапанной патологии
7 больным произведено шунтирование коронарных артерий
3 пациентам выполнено хирургическое лечение гипертрофической кардиомиопатии
2 больным проведена ортотопическая трансплантация сердца

Определение активности эндотоксина (ЕАА) (Spectral Diagnostics Inc, Canada)
LAL-тест (BioWhittakker,Сambrex, USA)
Прокальцитонин (PCT B.R.A.H.M.S., Germany)
Бактериологическое исследование
Количество лейкоцитов
Количество тромбоцитов
Лабораторные исследования

Дизайн исследования
Одноцентровое, проспективное исследование
34 пациентам, которые имели повышенные уровни EAA (≥ 0,6) и были в стабильном клиническом состоянии в комплекс интенсивной терапии включена LPS-сорбция, проводимая с использованием селективных сорбентов -применялись сорбционные колонки Toraymyxin – PMX-F (Toray, Japan).
Проводились 2 стандартные процедуры LPS-сорбции для каждого пациента.
Мониторинг лабораторных тестов: до первой процедуры, в течение 24 часов после нее и через 24 часа после второй процедуры

Динамика клинических и лабораторных показателей до и после LPS-сорбции (n=34)

Зависимость между уровнем ЕАА и
28-дневной выживаемостью
3
11
34
Выживаемость, %