КЛЕБСИЕЛЛЫ

КЛАССИФИКАЦИЯ
5 группа по Берджи – факультативно-анаэробные Грам- палочки
Семейство: Enterobacteriaceae
Род: Klebsiella
Виды:
K. oxytoca
K. planticola
K. terrigena
K. pneumoniae :
Подвиды:
K. pneumoniae
K. rhinoscleromatis
K. ozenae

Морфологические и тинкториальные свойства
Толстые короткие палочки с закругленными концами
Располагаются попарно или поодиночке
Грамотрицательные
Спор не образуют
Неподвижны
Имеют выраженную капсулу

Культуральные свойства
Факультативные анаэробы
Хорошо растут на простых питательных средах
Колонии на агаре круглые, пышные, часто сливающиеся друг с другом, мутные, слизистые
Рост на бульоне в виде диффузного помутнения (иногда – со слизистой плёнкой на поверхности)
Температурный оптимум для роста +37°С (мезофилы), оптимальная рН 7,2 – 7,4

Слизистые колонии клебсиелл

Антигенные свойства
О-АГ – 11 сероваров
К-АГ – 82 серовара
Желатин не разжижают
НЕ образуют индол и H2S

Заболевания, вызываемые клебсиеллами
Первоначально K. pneumoniae была определена, как микроорганизм вызывающий пневмонию (отсюда и ее название). Однако её роль не сводится только к инфекциям респираторной системы.
K. pneumoniae классифицируется как условно-патогенный микроб, находящийся в норме и в определенных органах (например, в кишечнике) в симбиотическом отношении с человеческим организмом, а в иных ситуациях являющийся причиной инфекционных заболеваний.
K. pneumoniae — один из возбудителей внутрибольничных инфекций, чаще всего мочевыводящих путей, мозговых оболочек, суставов, могут вызывать сепсис и гнойные послеоперационные осложнения.
В молочных продуктах клебсиеллы могут размножаться даже при хранении в холодильнике и могут вызывать пищевые токсикоинфекции.
K. ozaenae вызывает озену - хронический атрофический ринит (зловонный насморк).
K. rhinoscleromatis вызывает риносклерому - хроническое гранулематозное заболевание дыхательных путей, поражает глотку, гортань, трахею.

Факторы патогенности клебсиелл
Факторы адгезии и колонизации:
пили
белки наружной мембраны
полисахариды капсулы
Защита клебсиелл от фагоцитоза (агрессины)
полисахариды капсулы – К-АГ
Эндотоксин
ЛПС
Экзотоксин
энтеротоксин стимулирует активность аденилатциклазы и отвечает за развитие диареи

Эпидемиология клебсиеллёзных инфекций
Источник
при внутрибольничных инфекциях – человек больной или бактерионоситель. Может быть экзо- и эндогенное заражение
Пути передачи:
1. воздушно-капельный
2. алиментарный (пищевой)
3. контактный
Восприимчивый коллектив
– любой человек. При внутрибольничных инфекциях – человек со сниженным иммунитетом

Лабораторная диагностика
Исследуемый материал: зависит от клиники и локализации: мокрота, слизь из носа, испражнения, моча, ликвор, гнойное отделяемое, кровь и т.д.
Методы диагностики:
Микроскопический
Бактериологический
Серологический

1. Микроскопический метод
(окраска по Бурри-Гинсу)

2. Бактериологический метод - основной
Посев производят на:
дифференциально-диагностическую среду К-2 (с мочевиной, рафинозой и бромтимоловым синим)
Колонии K. pneumoniae, выделяющей уреазу и расщепляющей мочевину, - голубые, а клебсиелл, не имеющих уреазы, - желтые.
2. дифференциально-диагностическую среду с лактозой и бромтимоловым синим
Колонии сочные и блестящие, цвет колоний клебсиелл, не расщепляющих лактозу, - голубой, а лактозопозитивные колонии K. pneumoniae желтого цвета.
3. среду Эндо – лактозонегативные колонии – бесцветные, лактозопозитивные – красные с металлическим блеском.
Из подозрительных колоний делают мазки, окрашивают их по Граму и Бури-Гинсу и пересевают на скошенный агар или среду Ресселя для получения чистой культуры.
Идентификацию чистой культуры проводят по:
Биохимическим свойствам
Антигенным свойствам:
используют РА с агглютинирующими К-сыворотками

Лактозопозитивные колонии
на среде Эндо

3. Серологический метод.
РСК с О-антигеном клебсиелл (с химическим склеромным диагностикумом)
РА с бактериальным диагностикумом
Диагностически значимо четырехкратное увеличение титра АТ в динамике

Специфическое лечение
Бактериофаг клебсиеллёзный поливалетный
Пиобактериофаг

ПРОТЕЙ

КЛАССИФИКАЦИЯ
5 группа по Берджи – факультативно-анаэробные Грам- палочки
Семейство: Enterobacteriaceae
Род: Proteus
Виды:
P. vulgaris
P. mirabilis
Ранее относящиеся к роду Proteus бактерии вида Proteus morganii перенесены в род Morganella morganii семейства энтеробактерий, а Proteus rettgeri классифицированы в Providencia rettgeri.

Морфологические и тинкториальные свойства
Мелкие палочки с закруглёнными концами
Грамотрицательные
Спор не образуют
Капсулы не имеют
Имеют жгутики (перитрихи)
Встречаются неподвижные формы (О-формы)

Культуральные свойства
Факультативные анаэробы
Хорошо растут на простых питательных средах
На плотных питательных средах дают феномен роения – ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета
Для выявления ползучего роста используют посев по Шукевичу (в конденсационную воду у основания скошенного агара)
Рост на бульоне в виде диффузного помутнения с густым белым осадком на дне
Температурный оптимум для роста 37°С (мезофилы), оптимальная рН 7,2 – 7,4

Ползучий рост протея

Антигенные свойства
О-АГ – 49 сероваров
Н-АГ – 19 сероваров
Биохимические свойства
Протеи продуцируют фермент фенилаланиндезаминазу и дезаминируют фенилаланин до фенил-пировиноградной кислоты

Заболевания, вызываемые протеем
Являются условно-патогенными микро-организмами.
Могут вызывать пищевые токсикоинфекции
Наиболее часто острые кишечные инфекции, вызываемые протеем, встречаются у детей раннего возраста: ослабленных или с пониженным иммунитетом.
Являются возбудителями внутрибольничных (госпитальных) инфекций: вызывают инфекции мочевыводящих путей, вторичные септические поражения у пациентов с ожогами и после хирургических вмешательств, пневмонию, менингит и др.

Факторы патогенности протея
Факторы адгезии и колонизации:
пили
белки наружной мембраны
Ферменты патогенности:
Уреаза
Протеазы, разрушающие IgA
Эндотоксин
- ЛПС

Лабораторная диагностика
Исследуемый материал: зависит от клиники и локализации: моча, гнойное отделяемое, кровь, ликвор, промывные воды желудка, мокрота и т.д.
Метод диагностики: бактериологический

Бактериологический метод
Посев производят на:
1. Среду Плоскирева
Протей образует лактозонегативные колонии
2. Скошенный агар с фенилаланином
к культуре на среде с фенилаланином добавляют 10 - 12 капель 10% раствора хлорного железа (FеСl3 х 6Н2О).
При положительной реакции на фенилаланиндезаминазу через 2-3 мин. культура окрашивается в зелено-синий цвет, при отрицательной реакции цвет культуры не изменяется.
Для выявления ползучего роста используют посев по Шукевичу (в конденсационную воду у основания скошенного агара).
Идентификацию чистой культуры проводят по:
1. Культуральным свойствам
2. Биохимическим свойствам
3. Антигенным свойствам:
используют РА с агглютинирующими О-сыворотками и Н-сыворотками

Специфическое лечение
Бактериофаг коли-протейный
Бактериофаг протейный
Интестибактериофаг

Санитарная микробиология

Санитарная микробиология – направление медицинской микробиологии, изучающее микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и на состояние среды его обитания.
Задачи санитарной микробиологии:
Исследование объектов внешней среды (воздух, почва, вода) для оценки их воздействия на здоровье человека.
Обследование здоровых лиц (работников пищевых, детских, лечебных учреждений) на носительство патогенных микроорганизмов.
Исследование пищевых продуктов с целью их гигиенической характеристики и эпидемиологической оценки; проведение специальных анализов на наличие патогенных микробов при пищевых отравлениях.
Контроль за дезинфекционными мероприятиями.

Принципы проведения санитарно- микробиологических исследований
Пробы отбирают с соблюдением всех условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта.
Исследования проводят быстро; допускается хранение материала в холодильнике не дольше 6 - 8 часов.
Для получения объективных результатов отбирают несколько проб из разных участков объекта, а также проводят повторные отборы и анализы проб.
Используют только стандартные и унифицированные методы исследования.
В работе используют комплекс тестов:
а) прямые – выявляют патогенные микроорганизмы,
б) косвенные – указывают на загрязнение объектов окружающей среды выделениями человека и животных.
Интерпретацию результатов санитарно- микробиологических исследований проводят с учетом других гигиенических показателей (химических, физических, органолептических и др.).

Методы санитарной микробиологии
Прямая и люминесцентная микроскопия
Бактериологический метод
Биологический метод (в основном для определения токсинов)
Микологические методы
Вирусологические методы

Проведение санитарно- микробиологических исследований направлено на:
Определение общего микробного числа (ОМЧ) исследуемого объекта;
Определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) в исследуемом объекте;
Выявление в исследуемых объектах патогенных микроорганизмов

Общее микробное число (ОМЧ) – это общее количество микроорганизмов в единице объема или массы исследуемого объекта (в 1 мл или в 1 г).
Чем выше ОМЧ объекта, тем выше возможность присутствия в нём патогенных микроорганизмов.
Методы определения ОМЧ:
- прямой подсчет бактерий в счетных камерах с помощью обычного или фазово-контрастного микроскопа,
- количественный посев на плотные питательные среды.

Определение ОМЧ воздуха
Проводится в закрытых помещениях
Используют:
седиментационный метод
открытые чашки Петри со стерильной питательной средой расставляют в помещении.
Бактерии из воздуха оседают на поверхность среды, затем чашки закрывают, инкубируют и подсчитывают количество выросших колоний.

аспирационный метод
Используют специальные аппараты, например, аппарат Кротова.
ОМЧ определяют в 100 л воздуха.
Посев воздуха осуществляется через отверстие в отсеке на чашку Петри с питательной средой, закрепленную на вращающемся столике прибора.
Прокачка воздуха осуществляется с помощью встроенного в прибор пневмонасоса. Скорость протягивания воздуха 25 л/мин.
Затем инкубируют посевы и подсчитывают число колоний.
Нормы ОМЧ регламентированы для воздуха различных помещений.

Аппарат Кротова

Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ)
- это микроорганизмы, указывающие на загрязнение внешней среды выделениями человека или животных.
Присутствие СПМ в объекте внешней среды указывает на возможность наличия в этом объекте других, в т.ч. патогенных для человека, микроорганизмов, непосредственное обнаружение которых затруднено.
СПМ являются постоянные обитатели естественных полостей человека или животных, которые постоянно выделяются в окружающую среду.

СПМ делят на 3 группы:
группа А
включает обитателей кишечника человека и животных, их расценивают как индикаторы фекального загрязнения (эшерихии, энтерококки, протеи, клостридии и др.),
группа В
включает обитателей верхних дыхательных путей, их расценивают как индикаторы орального загрязнения (стрептококки, стафилококки),
группа С
включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения (бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы и др.).

СПМ различных объектов внешней среды

При количественном определении СПМ результаты исследований выражаются в 2 величинах:
1. Индекс СПМ (например, коли-индекс)
- это количество СПМ, обнаруженное в единице объема или массы исследуемого объекта.
Для определения индекса СПМ используют:
1) метод мембранных фильтров
2) метод бродильных проб
2. Титр СПМ (например, коли-титр)
- это наименьшее количество исследуемого объекта, в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.

Сущность метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры, на которых задерживаются бактерии.
Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируют при + 37°.
Подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и проводят перерасчет на 1 л, 1 кг или 1 г в зависимости от исследуемого материала.
Сущность метода бродильных проб заключается в посеве определенных объемов исследуемого субстрата на глюкозопептонную среду с индикатором и поплавком (для определения ферментации глюкозы), которые выдерживают при + 37°. Из всех помутневших пробирок делают высевы на среду Эндо с последующей идентификацией и подсчётом выросших колоний.
Коли-титр — величина, обратная коли-индексу.