Преаналитический этап подготовки материала для ИГХ

Основные этапы гистологического исследования
Взятие материала в оперблоке
Транспортировка в лабораторию
Вырезка и фиксация
Проводка
Заливка
Микротомия
Окраска ГЭ

Взятие материала в операционном блоке
Максимально быстрое погружение в фиксатор
Фиксация в 10% нейтральном забуференном формалине
* Фиксация отдельного образца в 70% этаноле или Карнуа для молекулярного тестирования
* Сохранение в холоде и упаковка материала в вакуумные пакеты с соблюдением температурного режима.

Транспортировка материала в лабораторию
Максимально быстрая доставка (формалин не проникает глубже 1 см от поверхности)
При упаковке в вакууме соблюдение температурного режима (максимум +4oС)
Четко и правильно заполненный бланк направления и маркировка контейнера с образцом

Вырезка и фиксация
Выполняется только патологом
Отсчет времени фиксации начинается с момента вырезки
Кассету не заполнять более 75% объема
До 2 мм в диаметре – мелкие образцы
До 2.5 х 2.5 х 0.3 см – обычные образцы – лимитируются объемом кассеты (не более 75% объема)

Разделение потоков
Эндоскопические и любые мелкие биоптаты до 2 мм – короткое расписание
Мелкие биоптаты должны быть информативными
Хирургические образцы до 3 мм – длинное расписание
Любые трудные образцы должны проводиться по обычному расписанию с отличным результатом

Правила адекватной фиксации

Уровни пропитывания и связывания формалина

Фиксация кусочка ткани толщиной 3 мм

Почему важна фиксация?
Формалин образует очень прочные перекрестные связи между молекулами белков
Эти связи помогают сохранить ткани в постоянных переходах от неполярных к полярным жидкостям и наоборот
Перекрестные связи разрываются при высокотемпературной демаскировке и антигены становятся доступными для ИГХ

Проводка ткани
Лучше щадящие и мягкие реактивы, дающие срезы толщиной 3-4 мкм без складок и затруднений
Не передерживать ткани в реагентах
Не перегревать ткани во время проводки
Отсрочку проводки делать в первом спирте
Малые образцы проводить по короткому расписанию
Неверно проведенные и исправленные образцы могут дать ложноположительные или ложноотрицательные результаты
Не использовать для декальцинации кислотные декальцинаторы и электролиз, ультразвук, термостаты; не передерживать в растворах.

Заливка
Образцы заливаются в твердый парафин – он позволяет сделать более тонкие срезы
Нагрев заливочного парафина в термостате или заливочном центре должен быть выше точки плавления парафина на 4-5оС
Залитый образец должен представлять единое целое с парафином, а не отделяться от него
Правила для ориентировки образцов – общие. Конкретные указания может дать патолог, вырезавший материал.

Контрольные образцы
Желательно использовать внутренние положительные контрольные структуры, поскольку фиксация разных объектов отличается
Контроль можно и нужно располагать на одном и том же стекле, так как реактивы покрывают всю площадь стекла, кроме лейбла

Микротомия
Микротомия по общим правилам приготовления препаратов
Вода – чистая дистиллированная или деионизированная, с добавкой ПАВ (tween20)
Срезы должны быть ровные, толщиной 3-4 мкм, без складок и пузырей под ними
Стекла: с поли-L-лизином, Super frost, +, подходящие для Ventana.
Сушить стекла: вертикально, термостат, 60 мин, 60оС.

Окраска ГЭ
Обязательная обзорная окраска перед ИГХ исследованием.
Отдельное стекло ГЭ должно быть сделано, если ИГХ-архив хранится отдельно от основных случаев.

Кто ответственный за выполнение этапа?
Взятие – хирург
Подготовка к транспортировке – м/с оперблока
Транспортировка – санитарка оперблока/курьер
Прием материала – лаборант/медрегистратор
Вырезка – вырезающий патолог
Проводка, микротомия, окраска – лаборант/медицинский лаб техник, отвечающий за работу с ИГХ-тестами и аппаратурой
Архивирование – лаборант/медрегистратор
Ответ – патолог/зав отделением

Пример СОП для подготовки к ИГХ
ЧЕК-ЛИСТ КОМПЕТЕНЦИЙ.
ГЛАВНАЯ ЗАДАЧА: ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕДУРЫ.
1 – Получить запросы, распечатанные на компьютере для всех ИГХ-случаев за прошедший день
2 – извлечь из термостата высушенные стекла (сушить минимум с 7 часов прошлого вечера)
3 – Проверить, чтобы все срезы были на +стеклах
4 – При наличии некоторых «дополнительных стекол» из случаев для стекол, используемых для ИГХ, проверить наличие положительных контролей
5 – Сверить тип иммуноглобулина для каждого случая с типом имммуноглобулина, используемого в стеклах для отрицательного контроля
6 – Проверить, чтобы все требуемые стекла были срезаны
7 – Если пропущены какие-то запрошенные стекла, обратиться к старшему технику за причиной и дать заказ на их резку до 4 утра ночной смене
8 – Рассортировать стекла по случаям пока заполняются стейнеры (48 стекол/запуск)
9 – Подготовить рабочие программы, а также количества реагентов (мкл)
10- Запустить программу, распечатать все нужные лейблы
11 –Приклеить лейблы к стеклам и разместить стекла в пластиковые стойки