Разработка иммуноаналитических систем для определения ЛФ в сыворотке человека.

НИИ Биоорганической химии СО РАН
Лаборатория нуклеиновых кислот.
Мануйлов Н.Л.
с.н.с. к.б.н. Лактионов П.П.

Цель Работы:
Освоить основные биохимические методы.
Освоить иммунохимические методы и различные типы иммуноанализа.
Разработать способ точного определения ЛФ в сыворотке человека.

Характеристика ЛФ
Белок м.r.78 кДа.
Белок острой фазы.
Выявлен в секретах экзокринных желёз, и вторичных гранулах нейтрофилов.
Высвобождается из секреторных гранул нейтрофилов после стимуляции патогенными микроорганизмами
Способен обратимо связывать ионы Fe, и тем самым подавлять рост микроорганизмов и опухолей.

Характеристика ЛФ
ЛФ участвует в неспецифической иммунной защите, является фактором созревания и активатором клеток лимфоидного ряда
Является внеклеточным транскрипционным фактором.
Способен регулировать выделение ФНО‑α, интерлейкинов 1 и 6 и усиливать фагоцитоз .
Играет важную роль в нарушениях метаболизма железа при воспалении.

Применение в клинике.
1 Уточнение степени активности патологического процесса и оценка эффективности противовоспалительной терапии.
2 Оценка тяжести инфекционного поражения и прогнозирование развития послеродовых гнойно-септических осложнений как до их клинической манифестации, так и в ходе развития процесса.
3 Оценка состояния иммунной системы для назначения соответствующих иммуномодуляторов при инфекционных, аутоиммуных и других заболеваниях.

Применение в клинике
4 Диагностика и мониторинг злокачественных новообразований (лимфогранулематоз, лимфо-саркома, лейкозы, рак молочной железы, яичников, пищевода, желудка, кишечника).
5 Дифференциальная диагностика рака простаты.
6 Оценка эффективности хирургического лечения или химиотерапии, выявление рецидивов опухолей.

Имммунохимический спот анализ конъюгата АТ с пероксидазой хрена
1:100
1:500
1:2500
1:5000
1:10000
К

лактоферрин
пероксидаза хрена
Механизм сэндвич иммуноанализа.

Калибровочная кривая

Характеристики системы
Чувствительность -15 нг./мл.
Точность-10-12%
Диапазон определения 15-400нг./мл.
Специфичность-высокая.

Лактоферрин
Перксидаза хрена
Механизм конкурентного иммуноанализа.

Калибровочная кривая

Характеристика системы
Чувствительность 30нг./мл.
Диапазон определения 80-5000нг./мл.
Точность 10-12%
Специфичность-высокая

Результаты
Выделен и очищен иммунологически активный препарат ЛФ.
Проиммунизированны животные и получены антисыворотки к ЛФ.
Приготовлен аффинный сорбент с ЛФ и выделены АТ к ЛФ.
Приготовлен конъюгат АТ против ЛФ и пероксидазы хрена.
Отработаны и оптимизированны иммуноаналитические системы для определения ЛФ.