Возбудитель сибирской язвы

КЛАССИФИКАЦИЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ:
Сем. BACILLACEAE
Род BACILLUS
Вид B. ANTHRACIS
1876 Г- Р.КОХ ВЫДЕЛИЛ МИКРОБ
(ANTHRAX- КАРБУНКУЛ)

МОРФОЛОГИЯ:
- ГРАМ (+) КРУПНАЯ ПАЛОЧКА В ЦЕПОЧКУ ИЛИ ЕДИНИЧНО
- ВНЕ ОРГАНИЗМА - ОВАЛЬНЫЕ СПОРЫ, РАСПОЛОГАЮЩИЕСЯ ЦЕНТРАЛЬНО, РАЗМЕР НЕ ПРЕВЫШАЕТ ДИАМЕТРА МИКРОБНОЙ КЛЕТКИ
- В ОРГАНИЗМЕ ХОЗЯИНА ИЛИ НА СРЕДАХ С КРОВЬЮ ОБРАЗУЮТ КАПСУЛУ
-ЖГУТИКОВ НЕТ
КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА:
-АЭРОБ ИЛИ ФАКУЛЬТАТИВНЫЙ АНАЭРОБ
-РАСТЕТ НА ПРОСТЫХ СРЕДАХ (мпа, мпб)
- КОЛОНИИ –R –ФОРМЫ –«ГОЛОВА МЕДУЗЫ», «ЛЬВИНАЯ ГРИВА».
- НА ЖЕЛАТИНЕ – РОСТ В ВИДЕ «ПЕРЕВЕРНУТОЙ ЕЛОЧКИ»

Фактор,обспечивающий высокую устойчивость возбудителя во внешней среде:
Способность образовывать споры; в воде споры сохраняются до 10 лет, в почве – до 30 лет и более
Фактор, обеспечивающий защиту возбудителя от иммунных механизмов хозяина ( от поглощения бактерий фагоцитами, вне- и внутриклеточных продуктов фагоцитоза) –
капсула

Особенность химического состава капсулы B. ANTHRACIS-
Белок,
в то время как у большинства других бактерий - полисахарид

Рис. Микроскопическая картина клеток В. anthracis в окрашенных мазках
культур, выращенных на агаре Хоттингера в течение 24 ч (а, 6) и хранившихся при 0-4 ос 96 ч (в).
а - штамм Ч-7; 6, в - штамм 14/41.
Окраска кристаллическим фиолетовым (а) и по Граму (6, в). х1150.
Микробы расположены поодиночке, попарно или соедине­ны в нити и цепочки.
Свобод­ные полюса клеток закруглен­ные, а внутри цепочек прямые.
Целые клетки грамположительные, окрашены в фиолетовый или черно-фиолетовый цвет.
Лизированные микробы грам­отрицательные и выглядят розовыми.

Рис. Клетки В. anthracis в мазках-отпечатках селезен­ки белой мыши, павшей от сибирской язвы.
Окраска по Романовскому- Гимзе. х 1150.
а - бациллы расположены поодиночке или попарно, могут иметь капсулу;
б, в - исчезновение капсулы при хранении трупного ма­териала или разрушении в процессе приготовления препарата.

Рис. Прижизненная микроскопическая картина клеток возбудителя сибирской язвы, выращенных на агаре Хоттингера в течение 24 ч.
а - штамм Ч-7; б - штамм 14/41. Иммобилизация клеток агаровым гелем. Фазовый контраст. х 1350.
Споры светлые и овальные. Бациллы темные, имеют форму удлиненных цилиндров, расположены поодиночке, попарно или соединены в цепочки. Полюса бацилл закруглены. Внутри клеток мелкие светлые гранулы липидов и крупные, ярко блестящие споры. Лизирующиеся бациллы отличаются пониженной оптической плотностью цитоплазмы.

Рис. Капсула клеток В. anthracis в окрашенных мазках культур, выращенных на бикарбонатном агаре в атмосфере углекислого газа в течение 48 ч.
Штамм 14/41. x1150.
а - окраска по Романовскому-Гимзе, капсула в виде розовой бахромы окружает фиолетовые клетки;
б - окраска по методу Гутштейна, прокрашивается наружная граница капсулы.

Рис. Капсула живых сибиреязвенных бацилл.
а - штамм 14/41; б - штамм Ч-7. Влажный тушевой метод. Фазовый контраст. х1350.
Капсула препятствует проникновению частиц туши к клеткам и по этой причине выглядит в виде ореола, окружающего бациллы.

Рис. Микроскопическая картина спор В. anthracis в окрашенных мазках культур, выращенных на агаре Хоттингера в течение 72 ч.
а - штамм СТИ-1; б - штамм 71/12.
Окраска по методу Циля-Нильсена. x1150.
Спороnлазма у неповрежденных спор не прокрашивается. Деструктивно измененные споры прокрашены полностью.

Рис. Прижизненная микроскопическая картина спор В. аnthraсis.
Иммобилизация спор агаровым гелем. Фазовый контраст.
1350.
Неповрежденные споры блестящие, вальной формы, с резко очерченными контурами (а).
Деструктивно изменен
енные споры, а также споры в стадии прорастания округлые и диффузно потемневшие (б).

Споры возбудителя сибирской язвы чрезвычайно устойчивы к физическим и химическим воздействиям и сохраняют жизнеспособность в течение многих лет (клетка со спорами выделена розовым цветом). Фото © Dennis Kunkel Microscopy, Inc./Dennis Kunkel

При благоприятных условиях патогенные свойства спор сибирской язвы сохраняются более столетия. Именно эта особенность возбудителя сибирской язвы имеет важное эпидемиологическое значение и требует постоянного мониторинга стационарно-неблагополучных пунктов по сибирской язве.

Нейтрофил, поглощающий возбудителя сибирской язвы. После разрушения клеточной стенки бактерии компоненты её цитоплазмы спровоцируют дальнейшее развитие иммунного ответа. (Фото Science Photo Library.)
Возбудитель сибирской язвы. Изображение с сайта extension.org

Возбудитель сибирской язвы bacillus anthracis, иллюстрация с сайта freewebs.com
Микрофотографии сибирской язвы

Рис. Ультраструктура капсулы клеток В. аnthraсis выращенных на бикарбонатном агаре в атмосфере углекислого газа в течении 48 ч.
Штамм 14/41. Фиксация глутаровым альдегидом и четырехокисью осмия. хЗО (а, в, д); х40 000 (6, г).
а - бахромчатая капсулa вокруг одиночной клетки
б.- в вокруг делящихся клеток. Г- отслоение биополимеров
д - объединение фибрилл капсулы в пучки, прикрепленные к клеточной стенке.

Рис. Цитохимические реакции с компонентами капсулы В. anthracis.
Штамм 14/41. х30 000 (а); х20 000 (6); ХI0 000 (в); х60 000 (г).
а, б - контрастирование мукополисахаридов капсулы рутениевым красным;
в - альциановым синим;
г - контрастирование липидосодержащих комплексов малахитовым зеленым.

Рис. Варианты тонкого строения клеток В. anthracis, выращенных на агаре Хоттингера в тече­ние 24 ч. Штамм Ч-7. х60 000 (а, б, г); х40 000 (в). Видны гомогенное (а, г) и двухслойное строение клеточной стенки (б, в).
У бескапсульных клеток с поверхности клеточной стенки происходит слущивание образующих ее биополимеров (а, б, г).
Цитоплазматическая мембра­на наиболее отчетливо заметна на полюсах и у поперечных перегородок (а, г).
В цитоплазме видны гранулы - полирибосомы, вакуоли, а также включения и нуклеоид.

Рис. Варианты ультраструктуры цитоплазмы клеток В. anthracis.
Штамм Ч-7. хю 000 (а, б); х30 000 (в).
а - гипервакуолизация цитоплазмы клеток;
б - осмиофильные включения;
в - вакуоли, ограниченные одноконтур­ными мембранами.

Рис. Деление сибиреязвенных микробов. Штамм 14/41. хгО 000.
Клетки делятся путем образования поперечных перегородок. Деление мо­жет быть равномерным с образованием равновеликих клеток (а)
и нерав­номерным с формированием стрептобацилл (б, в).

Рис. Формирование поперечных перегородок в делящихся клетках В. anthracis. Условия выращивания - см. рис. 2.10. Штамм Ч-7. х60 000 (а, г); х40 000 (6, в).
а - инвагинаuия цитоплазматической мембраны;
б - поперечная перегородка, состоящая из двух мембран, разделенных материалом клеточной стенки;
в - закладка электронно-плотного слоя;
г - расщепление перего­родки.

Рис. Ультраструктура соединительных отростков у клеток В. anthracis. Условия выращивания - см. рис. 2.10. Штамм Ч-7. xlO 000 (а); х30 000 (6, г); x15 000 (в).
а - соединение отростком клеток стрептобациллы;
б - клетки и споры;
в - сохранение отростка на полюсе клетки после деления;
г - фрагменты отростков в межклеточном пространстве.

Рис. Спорообразование у В. anthracis, выращенных на агаре Хоттингера в течение 72 ч. Штамм 14/41. хзо 000 (а, б); х20 000 (в, г).
а - конденсация осмиофильного материала в зоне образования споры;
б - обособление предспоры цитоппаз­матической мембраной;
в - формирование кортекса, споровых оболочек и экзоспориума;
г - выход споры из спорангия.

Рис. Внешний вид спор возбудителя сибирской язвы при электронной микроскопии.
Штамм 14/41. xlO 000.
а - оттенение хромом;
б - платино-углеродная реплика.
споры эллипсовидной формы, на поверхности имеют складки, отличаются высокой электроннооптической плотностью.

Рис. Варианты тонкого строения спор воз­будителя сибирской язвы.
Штамм 14/41. х40 000 (а, в); х60 000 (б); х80 000 (г).
Созревание спор сопровождается уменьшением электронно-оnтической плотности кортекса (а-в).
У зрелой споры ортекс электронно-прозрачный (б).
Компоненты спор:
спороплазма,
споровая мембрана,
клеточная стенка,
кортекс,
споровая оболочка и экзоспориум.
На наружной поверхности экзоспориума имеется слой ворсинок (в, г).

Рис. Микроколонии сибиреязвенных микробов, выращенных в течение 9 ч на ага­ре Хоттингера.
Микроколонии образованы нитевидными клетками, завитыми в не­сколько слоев. Фазовый контраст. х56.
а - штамм СТИ-1;
б - штамм 71/72.

Рис. Морфологические особенности колоний сибиреязвенных микробов, выращенных на ага­ре Хоттингера в течение 24 ч. Микрофотосъемка в падающем (а) и проходящем (б) свете. х13 (б). Вакцинный штамм СТИ -1.
а - визуально: колонии матовые или серовато-белые; б - при увеличении: поверхность их шероховатая, центр бугристый коричневого цвета, края бахромчатые в виде плоской зернистой каймы.

Рис. Морфологические особенности колоний капсульных бактерий возбудителя си­бирской язвы.
Штамм вторая вакцина Ценковского. Инкубирование в течение 48 ч на бикарбонатном агаре в атмосфере углекислого газа. Микрофотосъемка в отраженном свете. x13 (б).
а - визуально: колонии в падающем свете напоминают жемчуг;
б - при увеличении: центр колоний выпуклый, периферия уплощенная, Края ровные и округлые, поверхность гладкая.

АНТИГЕНЫ:
1.КЛЕТОЧНЫЕ-
-О - АНТИГЕН (ПОЛИСАХАРИД-ДЛЯ РЕАКЦИИ АСКОЛИ)
-КАПСУЛЬНЫЙ АГ – АНТИФАГОЦИТАРНЫЙ
2. ТОКСИЧЕСКИЕ-
- ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ (1ФАКТОР)
- ПРОТЕКТИВНЫЙ (2ФАКТОР)
- ЛЕТАЛЬНЫЙ – АЛЛЕРГЕН (3ФАКТОР)

ПАТОГЕННОСТЬ:
1.ЭКЗОТОКСИН, СОСТОЯЩИЙ ИЗ 3-Х КОМПОНЕНТОВ: - ОТЕЧНЫЙ ( аденилатциклаза- индуцирует образование цАМФ, повышает проницаемость сосудов и вызывает развитие отека), ЛЕТАЛЬНЫЙ ( металлопротеаза - оказывает цитотоксическое действие, вызывает отек легких)ФАКТОРЫ И ПРОТЕКТИВНЫЙ АГ (обеспечивает проникновение отченого и летального компонентов токсина через мембрану в цитозоль и способствует синергидному эффекту действия других компонентов токсина, индуцирует выработку Ат-антитоксинов)
субъединица А- (отечный и летальный факторы)
субъединица Б – (протективный Аг)
2.КАПСУЛА – белок
3.ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ- гиалуронидаза, пламокоагулаза
4.ИНВАЗИЯ
ТИПЫ ТОКСИНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ПО МЕХАНИЗМУ ДЕЙСТВИЯ:
1.ЦИТОТОКСИНЫ
2.ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ БЛОКАТОРЫ

ОСНОВНЫЕ ИСТОЧНИКИ ЗАРАЖЕНИЯ СИБ.ЯЗВЫ:
1.ТРАВОРЯДНЫЕ С/Х ЖИВОТНЫЕ
2.РЕЖЕ ЗАЙЦЫ, КОШОКИ,СОБАКИ
3.ПОЧВА, КОНТАМИНИРОВАННАЯ СПОРАМИ
ПУТИ ЗАРАЖЕНИЯ СИБ.ЯЗВЫ:
-КОНТАКТНЫЙ
-АЛИМЕНТАРНЫЙ
-ВОЗДУШНО-ПЫЛЕВОЙ
-ТРАНСИМССИВНЫЙ (СЛЕПНИ, МУХИ-ЖИГАЛКИ)

Патогенез сибирской язвы
Входные ворота (поврежденная кожа, реже слизистые оболочки дых. путей и пищеварительного тракта)
Ближайшие л/узлы – регионарный лимфаденит
С прорывом в кровь и лимфу–генерализация процесса
Терминальная септицемия

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА:
ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ
ОСНОВНОЙ ПРИНЦИП ДИАГНОСТИКИ СИБ.ЯЗВЫ:
-ОБНАРУЖЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ
содержимое везикул, карбункула, отторгнутый струп (кожная форма); мокрота (при поражении легких);
испражнения (при поражении кишечника);
кровь (при всех формах);
трупный материал (части пораженных органов и тканей, кровь и селезенка);
почва, кожа, шерсть животных, корм, вода, смывы с объектов окружающей среды и др.

Механизм действия сибиреязвенного токсина:
Субъединица А:
а) отечный фактор (аденилатциклаза) –индицирует образование цАМФ, повышает проницаемость сосудов и вызывает развитие отеков
б) летальный фактор (металлопротеаза) – оказывает цитотоксическое действие, вызывает отек легких
2. Субъединица В (протективный Аг) – обеспечивает проникновение отечного и летального компонентов токсина через мембрану в цитозоль и способствует синергидному эффекту действия других компонентов токсина, индуцирует выработку антител (антитоксинов)

Клинические формы сибирской язвы у человека в зависимости от места внедрения возбудителя:
-кожная
-легочная
-кишечная
-септическая
Клинические проявления кожной формы сибирской язвы у человека:
В месте входных ворот инфекции образуется сибиреязвенный карбункул, покрытый темно-коричневым струпом

Сибиреязвенные карбункулы

Сибиреязвенный карбункул на лице:
на фоне отека подкожной клетчатки в центре карбункула струп черного цвета, окруженный зоной воспаления (красного цвета).

Выраженный отек лица и шеи больного с эдематозной разновидностью кожной формы сибирской язвы; некроз в области век правого глаза.

ИММУНИТЕТ:
Напряженный
стойкий
Активная специфическая профилактика сибирской язвы у человека:
Живая сибиреязвенная вакцина вводится по эпидпоказаниям.
Пассивная специфическая экстренная профилактика и терапия сибирской язвы у человека:
Противосибиреязвенный иммуноглобулин

Основной принцип диагностики сибирской язвы:
Обнаружение возбудителя
Исследуемый материал для диагностики:
содержимое везикул, карбункула, отторгнутый струп (кожная форма); мокрота (при поражении легких);
испражнения (при поражении кишечника);
кровь (при всех формах); трупный материал (части пораженных органов и тканей, кровь и селезенка);
почва, кожа, шерсть животных, корм, вода, смывы с объектов окружающей среды и др.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
-МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ
-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ
-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ПРОБА (оценка вирулентных свойств на лаб.животных –капсула, LD50)
-АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ (ПРОБА С АНТРАКСИНОМ)- основные показания к использованию аллергического метода: диагностика заболевания ретроспективная, эпидемиологическое исследование, отбор лиц для вакцинации.
-СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ – РИФ, РЕАКЦИЯ ТЕРМОПРЕЦИПИТАЦИИ АСКОЛИ.

Способы сбора исследуемого материала

Подготовка проб к исследованию

:
1-й день исследования
Подготовленные пробы из объектов
внешней среды, шерсти и кожи для
освобождения от посторонней
микрофлоры подвергают
термической обработке на водяной
бане при 80 ос в течение 20 мин.
Не прогревают пробы, содержащие
вегетативную форму возбудителя
сибирской язвы (материал от
больных человека и животных, из
патологического материала, мяса
животных и др.).
Бактериоскопия (Мазки окрашивают по Граму, одним
из методов для выявления капсулы - по Ребигеру,
Гинсу, Михину или Романовскому - Гимзе и при ее
наличии - сибиреязвенной люминесцирующей
сывороткой (антисоматической или антиспоровой, в
зависимости от вида пробы)
Посев
В зависимости от доставленного материала
подготовленные для исследования пробы засевают на
следующие питательные среды.
Желательно использовать 5-10 чашек на пробу, посев
производить с помощью шпателя, при посеве
загрязненного материала применять метод
истощения. Посевы инкубируют в термостате при 36
37 ос в течение 18- 20 ч.
Биологическая проба.
Подготовленный для исследования материал,
вводят подкожно во внутреннюю поверхность бедра
двум белым мышам в количестве 0,2-0,5 мл и двум
морским свинкам - по 0,5-1 МЛ. Животные погибают
через 1-3 дня, иногда позже, от септицемии, на месте
введения наблюдаются отек и гиперемия.
Наблюдение за выжившими животными ведут в
течение 10 сут.

Ускоренный биологический метод.
Этот метод предложен Э. Н. Шляховым для сокращения сроков
бактериологического анализа. Исследуемый материал вводят
внутрибрюшинно 6 белым мышам по 0,5 мл. Через 1 и 2 ч
вскрывают по паре мышей, из перитонеального экссудата и
крови сердца делают мазки, из селезенки и печени - мазки
отпечатки. Мазки фиксиру­ют, окрашивают по Ребигеру и
капсульно - соматической люминесцентной сибиреязвенно
сывороткой, микроскопируют. Проба считается
положительной при наличии в мазках типичных капсульных
бацилл. Параллельно производят посевы на питательные
среды с целью выделения чистой культуры возбудителя.
Оставшуюся пару мышей наблюдают до 10 сут.

2-й день исследования
просмотр посевов и
колоний на средах.
Отбирают не менее 10 шероховатых
колоний. Из всех отобранных
Колоний делают мазки для окраски
по Граму и сибиреязвенной
соматической люминесцирующей
сывороткой. И делают посевы на
скошенный агар или сектора для
выделения чистой культуры, на
дифференциально -
диагностическую среду
Посевы на дифференциально-диагностическо
среде перед просмотром обрабатывают парами
аммиака. Для этого на фильтровальную бумагу в
от­дельную крышку от чашки Петри наливают 1-2 мл
водного аммиака (29 %, концентрированного). Затем
чашку с посевом помещают на несколько секунд
(пока не порозовеют колонии сапрофитов) в крышку
с аммиаком. В отличие от спорообразующих
сапрофитов сибиреязвенный микроб не образует
фосфатазу, вследствие чего его колонии цвета не
изменяют. С дифференциально-диагностической
среды для идентификации отбирают колонии, не
изменившие своего цвета после обработки парами
аммиака.
Посевы инкубируют в термостате 18-20 ч.
Осматривают лабораторных животных. Павших
животных вскрывают, делают мазки - отпечатки,
которые фиксируют, окрашивают и
микроскопируют. Производят посевы на агар и
бульон Хоттингера .

3-й день исследования
Просматривают посевы. Для дальнейшей идентификации отбирают культуры, не дающие гемолиза, не изменяющие своего цвета после обработки парами аммиака, формирующие характерный «комочек ваты» в МПБ.
Проверяют на чистоту роста в мазке и ставят идентификационные тесты.
Подвижность устанавливают в «висячей капле» или при посеве уколом в полужидкий агар,
Тест «жемчужного ожерелья»-
модифицированный ускоренный вариант. К
бульону Хоттингера (рН 7,2-7,3) добавляют 20
% инактивированной лошадиной сыворотки и
0,5 ЕД/мл пенициллина. Среду разливают с
соблюдением стерильности по 2-3 мл в
пробирки и засевают в нее по 2 капли
бульонной или петлю агаровой культуры,
отобранной для идентификации. Посевы
инкубируют не более 3 ч при 37 ос. Затем
делают мазки, фиксируют их, окрашивают
метиленовым синим и микроскопиру­ют.
В мазках сибиреязвенные бациллы
обнаруживаются в виде цепочки шаров,
напоминающих жемчужное ожерелье,
результат воздействия пе­нициллина на
клеточную стенку микроба. Спорообразующие
сапрофиты, как правило, к пенициллину
устойчивы.

При классическом варианте постановки
теста «жемчужного ожерелью)
изучаемые 3-4-часовые бульонные
культуры наносят по 1 капле на 3
пластинки питательного агара: две с
добавлением пенициллина в конечной
концентрации 0,5 и 0,05 ЕД/мл и третья
контрольная - без антибиотика. Посевы
инкубируют при 37ос. Не позже 3 ч
инкубации просматривают рост с сухой
(х40) и иммерсионной (х90) фазово-
контрастными системами под
микроскопом, предварительно накрыв
каждый участок нанесения культуры
покровным стеклом. В положительном
случае на средах с пенициллином
сибиреязвенный микроб формирует
цепочки шарообразных клеток, на
средах без пенициллина - длинные цепи
палочек.
Тест с сибиреязвенным бактериофагом.
Сибиреязвенный микроб лизируется
сибиреязвенными фагами. Пробу ставят
на свежеприготовленных и хорошо
подсушенных чашках с агаром
Хоттингера. или МПА. Дно чашки
расчерчивают на квадраты, 5-6-часовую
бульонную культуру наносят петлей или
пипеткой, подсушивают в термостате,
затем в центр подсушенной капли
наносят петлей каплю цельного
сибиреязвенно­го бактериофага. Посевы
инкубируют при 37ОС. Результат
учитывают через 5-6 ч под малым
увеличением микроскопа и через 12-24
ч невооружен­ным глазом. В
положительном случае на месте
нанесения бактериофага отмечается
лизис колоний.

Продолжение 3-го дня
Наличие капсулы можно определить несколькими способами:
путем посева культур на 1 % бикарбонатный агар и инкубацией при 37 ос в
анаэростате при содержании 10-50 % СО2 или В эксикаторе. Через 18-24 ч
капсулообразующие культуры вырастают в виде крупных слизистых колоний.
В мазках, окрашенных по Ребигеру и капсульно-соматической сибиреязвенной
люминесцируюшей сывороткой, видны цепочки палочек, окруженных
капсулой;
путем посева в жидкую питательную среду ГКИ, состоящую из 40 %
инактивированной бычьей или лошадиной сыворотки и 60 % раствора Хенкса.
Пробирки закрывают стерильными резиновыми пробками и инкубируют при
37 ОС. Через 16-18 ч большинство сибиреязвенных клеток образуют капсулу,
которая выявляется при микроскопии окрашенных мазков;
путем заражения биопробных животных,.
При микроскопии мазков от животных видны короткие цепочки или
отдельные микробные клетки, окруженные розовой капсулой.

Продолжение 3-го дня
Гемолиз эритроцитов барана
изучают на МПА или агаре
Хоттингера с 3-5 %
дефибринированной крови
барана. Культуры засевают
петлей на сектора агара.
Результат учитывают через 18
20 ч инкубации при 37 Ос.
Сибиреязвенный микроб в
отличие от спорообразующих
сапрофитов не лизирует
эритроциты барана в эти сроки
Лецитиназную активность
определяют в жидкой
желточной среде или на агаре
Хоттингера с добавлением
куриного желтка.
Сибиреязвенный микроб не
свертывает желток в жидкой
среде в течение нескольких
суток инкубирования. При
росте на плотной среде
вокруг колоний
сибиреязвенного микроба
мутная белая зона не образуется.

Кроме того, определяют вирулентность и антибиотикоrpамму выделен­ных культур.
Для определения вирулентности атипичных
штаммов используют кроликов породы шиншилла
При постановке пробы с антибиотиками
обязательно используют диски с пенициллином,
тетрациклином и рифампицином, что служит еще
одним дифференциальным признаком, так как
близкородственные спорообразующие сапрофиты к
ним устойчивы.
Лабораторных животных осматривают, павших
вскрывают и исследуют.

4-й день исследования
Учитывают результаты идентификационных тестов.
Продолжают наблюдение за выжившими биопробными
Животными. В течение 10 сут. Затем их забивают, вскрывают и
Исследуют.
Ставят реакцию Асколи
Реакцию термопреципитации по Асколи проводят с целью
обнаружения сибиреязвенного антигена.

Идентификация выделенной культуры
- рост на МПБ
- чувствительность к сибиреязвенному бактериофагу
- капсула in vitro
- проба с пенициллином
- тест на фосфатазу
- лецитиназная активность
- подвижность
- гемолиз эритроцитов
-ПЦР
- Определение чувствительности к антибиотикам

Реакции для обнаружения Аг сибирской язвы в исследуемом материале (ткани погибших животных – шкура, кожа и трупный материал от человека):
1. РИФ
2. Реакция АСКОЛИ (термопреципитации) с использованием преципитирующей сибиреязвенной сыворотки
Характеристика Аг, выявляемого в реакции Асколи:
Термостабильный соматический сибиреязвенный Аг полисахаридной природы

Реакция термопреципитации по Асколи
Реакцию термопреципитации по Асколи ставят при массовом загрязнении посторонними микробами исследуемого материала (кожа, шерсть, органы трупа).
Компоненты реакции:
а. антиген - прозрачный, растворимый, термостабильный.
б. противосибиреязвенная сыворотка.
Реакция ставится в 2-х преципитационных пробирках.
В преципитационную опытную пробирку наливают 0,5 мл преципитирующей сибиреязвенной сыворотки и на нее с помощью пастеровской пипетки наслаивают полученный фильтрат (антиген). При наличии антигена в исследуемом фильтрате на границе двух жидкостей образуется кольцо преципитации. В контрольной пробирке вместо преципитирующей сыворотки используется нормальная.

реакция Асколи
Для этого измельчают кусочки органов трупа, кожи, шерсти животных и кипятят в физиологическом растворе 10-15 мин. Полученный термоэкстракт фильтруют.
Фильтрат наслаивают на преципигирующую сыворотку, разлитую в узкие пробирки. В положительных случаях на границе обеих жидкостей появляется мутно-белое кольцо преципитации.
Способ извлечения Аг из исследуемого материала для реакции термопреципитации Асколи:
Экстракция путем кипячения

Выявление АГ в реакции преципитации.
Схемы реакций кольцепреципитации (А) и диффузии в геле (Б).
Реакцией кольцепреципитации также выявляют AT к бруцеллам в молоке (кольцевая проба Банга).

Постановка реакции Асколи
В узкую пробирку для преципитации наливают иммунную преципитирующую противосибиреязвенную сыворотку и осторожно наслаивают на нее испытуемый экстракт.
В течение ближайших 10 мин на границе между сывороткой и экстрактом в положительных случаях появляется кольцо помутнения (кольцепреципитация). Асколи реакция очень чувствительна и специфична.
С ее помощью удается быстро выявить материалы, инфицированные сибирской язвой.

Полученные результаты проверяются контрольными пробами (см. табл.)
В пробирках № 4, 5, б и 7 кольца помутнения отсутствуют. А. р. можно ставить по сокращенной схеме: пробы 1, 2, 5 и 6.

Критерии идентификации ЧК палочки сибирской язвы в бактериологическом методе диагностики
1. МОРФОЛОГИЯ
2. БИОХИМИЧЕСКИЕ Свойства
3. ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ФАГУ
4. ОЦЕНКА ВИРУЛЕНТНЫХ СВОЙСТВ (КАПСУЛА , LD50).

ПРИЗНАКИ, ОТЛИЧАЮЩИЕ ПАЛОЧКУ СИБ ЯЗВЫ ОТ ГРАМ(+) САПРОФИТОВ (АНТРАКОИДЫ И Т.Д.- B.cereus,B.subtilis):
-НАЛИЧИЕ КАПСУЛЫ
- НЕПОДВИЖНОСТЬ
-ЧУВСТИВТЕЛЬНОСТЬ К СИБ.ЯЗВЕННОМУ ФАГУ
- ПАТОГЕННОСТЬ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ (МЫШИ, СВИНКИ, КРОЛИКИ)

Включите видео!!!!

Bacillus anthracis and В. cereus:
Murray: Medical Microblology, 501 Edition, Chapter 25
( CASE SТUDIES – изучаемое дело)
Two days after shearing sheep, а shepherd notices а papule оп his апп, which rapidly progresses to ап ulcer and then а necrotic eschar. Lymphadenopathy and edema develop: cutaneous anthrax
Three month after visiting а sheep farm, а man develops fever, cough, shortness of breath, headache, vomiting, chills, and chest pain. These progress to edema, swelling of mediastinal lymph nodes, shock, and death within 3 days: inhalation anthrax

( TRIGGER WORDS - ключевые слова)
Sheep Goat
Fur Spore
Bioterror Wool-
sorter's disease

( ESSENTIAL FACТS– основные факты)
Anthrax is usually associated with animal fur and is аn occupational hazard for butchers, goatherds, sheepherders, and sheepshearers.
Virulence is plasmid encoded: Enzymes for the poly-D- ­glutamic acid capsule
Three plasmid encoded exotoxins: Edema toxin-adenylate cyclase; lethal toxin-zinc metalloprotease; protective antigen
( STUDY ВREАК- экспресс - исследование )
Anthrax spores аге extremely resistant to inactivation and mау remain viabIe for millennia (e.g., in Egyptian tombs). Anthrax spores have been developed as а prime bloterror agent and were sent through the U.S. mail to terrorize legislators, reporters, and others.

Figure 1·. Gram stain of
B. antracis
Figure 2: Antrax on the forearm, as would be observed for a butcher, shepherd, or another at risk of infection

Bacillus anthracis
( STRUCТURE- строение )
( + )
Gram-positive rod in long chains, spore forming, polypeptide capsule
(LAB ID лабораторное подтверждение)
Growth characteristics and Gram stain
(VIRULENCE FACTORS – факторы вирулентности)
Polypeptide capsule, exotoxins: Edema toxin-adenylate cyclase; lethal toxin-zinc metalloprotease; protective antigen
(DISEASES - заболевания)
Cutaneous anthrax
Inhalation anthrax (most deadly)

Bacillus anthracis
(EPlDEMIOLOGY - эпидемиология)
Commonly found in fur of herblvores and in soil. Spores аге viаЫе for а long time and ме difficult to inactivate.
( РRЕVЕNТЮN - профилактика )
Vaccination of animals
( TREATMENT - лечение)
Ciprofloxacin

В. cereus:
(TRIGGER WORDS –ключевые слова)
Rice Preformed toxin
Heat-stаЫе toxin-vomiting Heat-Iablle toxin-diarrhea
(STRUCТURE - строение) ( + )
Gram-positive rod, sporulates
Lab ID – лабораторное подтверждение
Isolation of organism from contaminated food

В. cereus:
(VIRULENCE FACТORS – факторы вирулентности)
Gastroenteritis :
Heat-stаЫе entertoxin—emesis
Heat-Iablle enterotoxin-diarrhea
Ocular: necrotic toxin, cereolysin,
phospholipase С

В. cereus:
(DISEASES - заболевания)
Emetic form gastroenteritis: ingestion of heat-stаЫе toxin trom contaminated rice.
Like S. аиreus gastroenteritis, the incubation period is 1-6 h. The individual is being poisoned bу preformed toxin.
Diarrheal form gastroenteritis: bacterial growth in gut produces toxin; sources аге contaminated псе, meat, vеgеtаЫеs, and sauces.
Ocular infections after trauma

В. cereus:
(EPIDEMIOLOGY - эпидемиология)
Food-borne disease, rice and rice dishes
( PREVENТION - профилактика)
Proper food storage
(TREATMENT- лечение)
Symptomatology