Генная инженерия дрожжей

План:
Генная инженерия дрожжей.
Дрожжевые плазмиды.
Дрожжевые векторы.
Двухгибридные системы дрожжей.

Дрожжевые клетки используются по следующим причинам:
Дрожжи – это одноклеточные эукариоты, генетика и физиология которых хорошо изучены, геном дрожжей секвенирован, их можно культивировать в условиях лаборатории и в биореакторах.
В качестве векторных молекул могут использоваться природные плазмиды дрожжей
В клетках дрожжей посттрансляционные модификации аминокислотных остатков белков (гликозилирование, формирование -S-S- мостиков и др.) осуществляются как у эукариот.
Способны секретировать гетерологичные белки в среду, что облегчает процесс очистки
Используются в пищевой промышленности и признаны безопасными микроорганизмами

Плазмиды дрожжей
2μ (2-микронная плазмида)
Размер:6,3 кб
Количество : 50 копии
Пример: вектор экспрессии

Первый шаг на пути оптимизации экспрессии в дрожжах-выбор промотора
ТАТА-бокс расположен дальше (40-120 п.о)
Дрожжевые промоторы функционируют вместе с активаторами 100-1000п.о.
Содержат длинную регуляторную область до 1кб
Конститутивные промоторы: алкогольдедидрогеназа, триозофосфатдегидрогеназа
Индуцибельные промоторы-промоторы генов катаболизма галактозы
Полиаденилирование происходит очень близко к 3’-концу транскрипта

Следующее требование для экспрессии – это эффективная трансляция
Распознавание факторами инициации участка инициации трансляции AUG-кодона. AUG у дрожжей находится в окружении A и U.
Остановку инициации вызывают: G, петлевые структуры

Известны 5 типов дрожжевых векторов:
1. YIp интегративные
2. YRp репликативные
3. YEp эписомальные
4. YCp центромерные
5. YAC дрожжевые искусственные хромосомы
Они различаются по копийности и стабильности.

ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Kurs_lekcij_po_geneticheskoj_inzhenerii.pdf
Щелкунов С. Н. Генетическая инженерия.pdf
https://starius.ru/fbb/VI/GenEng/2011-03-01.pdf