Електрофорез. Основные понятия. Показания для проведения электрофореза

ОСНОВНЫЕ ПОНЯТИЯ
Электрофорез - это движение заряженных частиц в поле постоянного
электрического тока.
Положительно заряженные частицы движутся к катоду,
отрицательно заряженные – к аноду.
Электрофоретический метод в биохимии – это способ
пространственного разделения молекул, имеющих разный заряд и размеры, путем помещения их в электрическое поле.
Электрофоретическая подвижность (u) молекулы - это скорость движения заряженной молекулы (выражаемой в см/ч) в электрическом поле с напряженностью 1 В/см.

Электрофореграмма – картина, полученная после разделения сложной смеси с помощью электрофореза и специфического проявления.

КОМПЛЕКТАЦИЯ

ОБОРУДОВАНИЕ
Блок питания «Consort EV 1450»
Переобразование тока в
постоянный;
Контроль времени
Выбор метода
Предупреждения завершения
процеса

ОБОРУДОВАНИЕ
Ручная камера для електрофореза «Titan Gel»

НАБОР ФИРМА HELENA «SAS-MX SP-10 KIT»
В набор входят:
Гелевая пластинка (Electrophoresis Gel)
Краситель (Acid blue stain)
Буферный р-р (Tris barbital buffer)
Отмывочный р-р (Destain)
Блотеры (Blotter C,А )
Аппликатор (Sample Application template 4)

ГЕЛЕВАЯ ПЛАСТИНКА (10 ПРОБ)

КОМПЛЕКТУЮЩИЕ
Блотеры А,С
- удаление лишней влаги в геле;
- Удаление избыточного количества
биологического материала нанесенных
образцов;
Апликатор:
Точное нанесение биологического
материала
Точное разделение образцов

АПЛИКАТОР

МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ
Винимаем гель з герметизированной упаковки ,покласть на бумажное полотенце, промочить его блоттером С.
Апликатор ( для на несения образцов) выровнять со стрелками по краях геля «линия старта» и наложить поверх него блоттер А и протереть в доль лунок, для обеспечения хорошего прилегания. Снять блотер.
Внести 3 мкл образца в каждую лунку и оставит на 4 минуты для адсорбции
Внести 50 мл буферного р-ра в камеру,по 25мл в каждую внутреннюю часть.
После адбсорбции образцов, промокнуть блотером А лунки для нанесения образца. Снять блотер и апликатор.
Поместить гель в камеру агарозой вниз установив положительную(+) и отрецательную(-) стороны согласно сположением в камере
Електрофорез гелю: 30 минут,80 вольт.

По завершению проведения электрофореза, прибор подаст звуковой сигнал (громкий и долгий)
Правильность метода
Точность
Удобство в использовании

МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ
8. По окончанию електорофореза, гелевую пластинку достаем с камеры и помещаем в 96% этиловый спирт , время выдержки 10 минут.
9. После выдержки в спирте сушим гель. ( Сушка геля должна проводится до полного высыхания геля!
Недостаточность высыхания приводит к :
неправильностью окрашивания геля!
Недостаточностью окрашивания образцов!
недостаточностью интерпретации результатов!
Невозможностью интерпретации результатов!

МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ
10. Погрузить гель в краситель, время выдержки 10 мин.,вибор красителя зависит от указаний и подбора его по методике ,согласно инструкции. Но применяют иногда и другие, для сровнения или для улучшения качества окрашивания.
11. Погрузить в отмывающий р-ор 2раза по 1 минуте. Для лучшей отмывки по 2 минуты.
12. Высушить.

3D СКАНЕР (ДЛЯ ИНТЕРПРЕТАЦИИ ЕЗУЛЬТАТОВ)

НА ФОРЕГРАММЕ СЫВОРОТКИ КРОВИ ВЫДЕЛЯЮТ 5 ФРАКЦИЙ:
1.АЛЬБУМИНЫ;
2.Α-1-ГЛОБУЛИНЫ;
3.Α-2-ГЛОБУЛИНЫ;
4.Β-ГЛОБУЛИНЫ;
5.Γ-ГЛОБУЛИНЫ.

ПОДВИДЫ БЕЛКОВ И ИХ ФУНКЦИИ В ФРАКЦИЯХ

Какие показания для проведения электрофореза белков сыворотки в крови?
• Скрининговый тест до назначения биохимического анализа (в ряде западноевропейских стран – Италия, Франция и др.)
• Выполняется после биохимического анализа общеклинического анализа крови. Основные критерии для назначения:
- Снижение концентрации общего белка в сыворотке крови < 60 г/л
- Увеличение концентрации общего белка в сыворотке крови > 85 г/л
- Снижение концентрации альбумина в сыворотке крови < 35 г/л
- Увеличение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) неясного генеза >25 мм/ч

Когда значения повышены?
+ Альбумин:
- дегидратация;
- шок.
+ Фракция альфа1- глобулина (повышение альфа1-антитрипсина):
- патология паренхимы печени;
- острые и хронические воспалительные процессы (инфекции и ревматические заболевания);
- опухоли;
- травма и хирургические вмешательства;
- беременность (3 триместр);
- прием андрогенов;

+ Фракция альфа2-глобулина:
- повышение альфа2-макроглобулина (нефротический синдром, гепатит, цирроз печени, прием эстрогенов и оральных контрацептивов , хронический воспалительный процесс, беременность);
- повышение гаптоглобина (воспаление, злокачественные опухоли, некроз тканей).
+ Фракция бета-глобулина:
- первичные и вторичные гиперлипопротеинемии;
- моноклональные гаммапатии;
- прием эстрогенов, железодефицитная анемия (повышение трансферрина);
- беременность;
- механическая желтуха;
- миелома (IgA-тип).

+ Фракция гамма-глобулина:
- хроническая патология печени(хронический активный гепатит, цирроз);
- хронические инфекции, саркоидоз, паразитарные инвазии;
- аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, системная красная волчанка);
- лимфопролиферативные заболевания (миелома, лимфома, макроглобулинемия Вальденстрема).

Когда значения понижены?
- Альбумин:
- нарушения питания;
- синдром мальабсорбции;
- болезни печени и почек;
- опухоли;
- коллагенозы;
- ожоги;
- гипергидратация;
- кровотечения;
- анальбуминемия;
- беременность.

- Фракция альфа1- глобулина(повышение альфа1-антитрипсина):
- наследственный дефицит альфа1 -антитрипсина;
- болезнь Танжера (нарушение метаболизма липопротеидов).
- Фракция альфа2-глобулина:
- снижение альфа2-макроглобулина (панкреатит, ожоги, травмы);
- снижение гаптоглобина (гемолиз различной этиологии, панкреатит, саркоидоз).
- фракция бета-глобулина:
-гипо-b-липопротеинемии;
- дефицит IgA.