Исследование Ретинальных Липофусциновых Гранул Методами Атомно-силовой И Ближнепольной Скарирующей Микроскопии

Обьект исследования – липофусциновые гранулы из глаза человека

Под действием синего света гранулы флуоресцируют в жёлтой части спектра
Наиболее известным из флуорофоров является так называемый А2Е, обладающий фототоксическими свойствами, спектр флуоресценции которого в основном совпадает со спектром флуоресценции липофусцина.
A2E

Изображения гранулы, полученные
атомно-силовым микроскопом

Схема эксперимента по наблюдению флуоресценции

Использовалось две методики:
Образец освещается через зонд, флуоресценция собирается объективом (режим освещения)
Достоинства: простота
Недостатки: сильный фоновый сигнал из-за
флуоресценции волокна. Сложные юстировки.
Образец освещается через обьектив , флуоресценция собирается зондом (режим сбора)
Достоинства: Можно избавится от фонового сигнала. Облегчаются юстировки.
Недостатки: сигнал флуоресценции слабее

1
2
3

Сравнение спектров флуоресценции тестового образца, полученных при сборе через объектив и через апертуру зонда

Сравнение спектров флуоресценции на вершине и у подножия скопления липофусцина

Нахождние спектра флуоресценции отдельной гранулы

Сравнение спектров флуоресценции, полученных в различных точках гранулы

Фотовыцветание гранул под действием зелёного света