Методы определения концентрации спермиев

Определение интенсивности дыхания спермиев по времени обесцвечивания метиленовой сини.
Методика: при температуре 20-22 градуса на предметном стекле смешивают каплю спермы и каплю 0,01% р-ра метиленовой синьки. Смесь набирают в стеклянную трубочку длиной 6-8 см и каналом диаметром 0.8-1 мм так, чтобы высота столбика была 2 см, трубочку помещают на лист белой бумаги. Засекают время обесцвечивания.
Результат: непригодна для осеменения: бык – более 30 мин, баран – более 20 мин

Определение концентрации спермиев в счётной камере:
Оборудование: камера Горяева, смесители эритроцитарный для спермы быка и барана, лейкоцитарный – для спермы жеребца и хряка.
Методика: сперма смешивается в меланжере с 3%-ным р-ром натрия хлорида, сбоку камеры на сетку наносят каплю разбавленной спермы. Считают спермии в 5 больших квадратах (80 малых) по диагонали.
Результат вычисляют по формуле С = 400*П*Д/NP*1000000, где С – концентрация, П – подсчитанные спермии, Д – степень разбавления, N – число квадратов (80), Р – глубина камер.
Результат – млрд. в л

Определение абсолютной выживаемости спермиев – продолжительность жизни спермиев при разных степенях разбавления синтетическими средами.
Методика:
11 стерильных нумерованных пробирок по 2 мл
1-2 по 0,5 мл неразбавленной спермы
2-11 по 0,5 мл синтетической среды,
1 пробирка – контроль
Далее – последовательный перенос 0,5 мл разбавленной спермы из предыдущей пробирки в следующую. Получаем разбавление в 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512, 1024.
Пробирки закрывают и ставят в штативе в термостат при 0 градусах.
Ежедневно оценивают активность спермиев при 40 градусах, добавляя к капле спермы 2 капли 2,9% р-ра цитрата натрия.
Оценку активности проводят до полной гибели всех спермиев во всех пробирках.

Определение процентного соотношения нормальных и патологических спермиев.
На приготовленный мазок спермы кладут фильтрованную бумагу и наливаю р-р красителя (фуксин-эзоин или метиленовую синь)
Краску на стекле смывают водой и высушивают на воздухе. Просохший мазок просматривают под микроскопом (ув.400-600) и подсчитывают в нескольких полях не менее 200 спермиев.
Определяют процент нормальных и патологических спермиев.