Основы микробиологии и иммунологии. Бактериологическая лаборатория

Бактериологическая лаборатория – научно-практическое учреждение, выполняющее бактериологические, иммунологические и другие микробиологические исследования.

Медицинская бактериологическая лаборатория является одним из подразделений больниц, входит в структуру ФБУЗ, научно-исследовательских институтов.
Бактериологическая лаборатория размещается в специальном помещении, устройство и оборудование которого приспособлены для выполнения исследований в стерильных условиях и гарантирует персонал от возможности заражения.

В структуру лаборатории входит ряд помещений общего и строго специального назначений: регистратура, лабораторные комнаты, бокс с предбоксником, термальная, помещение для приготовления питательных сред, моечная, препараторская, стерилизационная.
Все помещения лаборатории должны иметь высоту не менее 3 м, быть обеспечены вентиляцией, водопроводом, канализацией, электроэнергией и газом. Стены должны быть окрашены масляной краской или покрыты кафельной плиткой, пол – линолеумом.

Материалом для микробиологических исследований служат: выделения человека (испражнения, моча, рвотные массы, мокрота, отделяемое ран), а также кровь, желчь, спинномозговая жидкость, промывные воды желудка, бронхов, трупный (секционный) материал и др.
Материалом для исследований санитарной бактериологии являются: смывы с различных объектов, пищевые продукты, перевязочный материал, препараты для инъекций, вода, почва.

Регистратура – помещение, где идет прием лабораторных анализов, исследуемого материала, регистрация и выдача результатов микробиологического исследования.
Контакт с посетителями идет через специально оборудованное окно.

Лаборатория клинической микробиологии

Материал, поступивший на исследование, регистрируется в специальных журналах и данные о больном заносятся в «банк» компьютера.

Регистрация материала

Журнал регистрации материала

Доставку исследуемого материала в лабораторию производят в кратчайший срок в специальных металлических боксах, контейнерах, сумках-холодильниках, которые после использования подвергаются дезинфекции.
Любой клинических материал для исследований рассматривают как потенциально опасный для человека. Поэтому при заборе, хранении и направлении материала в лабораторию строго соблюдают правила техники бактериологической безопасности.

Все материалы, направляемые в лабораторию, должны иметь сопроводительный документ – направление на специальном бланке, где указаны фамилия, имя, отчество больного, возраст, вид материала, дата взятия, предполагаемый клинический диагноз и другие сведения.

Направление в лабораторию клинической микробиологии

Лабораторная комната – одна или несколько, что зависит от объема работы – основное помещение для проведения исследований, она должна быть светлой и просторной.
Режим работы лаборатории предусматривает ежедневную влажную уборку, а один раз в месяц и дезинфекцию не только пола и стен, но и мебели, поэтому рабочую поверхность столов и оборудования покрывают кислотоупорным материалом.

Лабораторные комнаты

Компьютерные технологии в бактериологии

В лабораторной комнате оборудуют: рабочие столы для врача и лаборанта, место для окраски препаратов; термостат или термальную комнату, холодильник, центрифугу, микроскоп, шкафы и т.д.

Рабочее место сотрудника

Рабочее место сотрудника

Оснащение рабочего места

Место для окраски препаратов

Микроскоп
Бинокуляр

Термальная комната – помещение, в котором поддерживается постоянная температура воздуха с помощью термостата. Большинство патогенных бактерий культивируются при температуре 37 ⁰C. Температура ежедневно регистрируется. Сбой температурного режима может повлиять на рост микроорганизмов, что затруднит диагностику определения вида возбудителя.

Термостат – аппарат, в котором поддерживается постоянная температура.
Микроанаэростат – аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.

Термостаты

Денсиметр
Определение концентрации бактерий в растворе

Холодильники и холодильные камеры служат для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин, сывороток, и других биологически активных веществ при температурах 4 – 20 ⁰C.

Холодильники

Коллекция музейных штаммов бактерий

Центрифуга – оборудование, которое используют для отделения плотных частиц от жидкости (например, эритроцитов от сыворотки) в течении 3-5 минут.

Микроцентрифуга
Равномерное распределение бактерий в растворе

Бокс – строго изолированное помещение для проведения бактериологических исследований в стерильных условиях.
Дезинфекцию воздушной среды в боксе проводят при помощи бактерицидных ламп. Обычно в боксе работают два человека. Входят в бокс через предбоксник, в котором переодеваются в стерильные одежды (халат, шапочку, маску, бахилы) и переходят в бокс через вторую дверь.

Ламинарный бокс

Помещение для приготовления питательных сред располагают рядом с моечной и стерилизационной комнатой. В помещении находятся шкафы для хранения сухих питательных сред, химических реактивов, лабораторной посуды и т.д.
Здесь варят, готовят питательные среды и разливают в лабораторную посуду – в боксе.

Сухие питательные среды
Посуда для приготовления питательных сред

Автоклавы для стерилизации питательных сред

Стерильные питательные среды хранят в специальных холодильниках и используют для культивирования бактерий и изучения их свойств с целью определения вида возбудителя.

Стерильные питательные среды

Моечная – комната для мытья и обработки посуды.
Моечную оборудуют столами, стеллажами, снабжают приспособлениями для мытья посуды: моющими средствами, ершами, тряпками и т.д.

Моечная

Стеллажи для инвентаря

Препараторская (купорочная) – комната, в которой чистая сухая посуда готовится для стерилизации.
После стерилизации посуда хранится в специальных шкафах и используется сотрудниками лаборатории для проведения микробиологических исследований; для забора материала для бактериологического исследования.

Купорочная

Подготовка посуды для стерилизации

Стерилизаторы паровые – автоклавы, широко используются для стерилизации паром под давлением питательных сред, перевязочного материала, воды, ряда лекарственных средств, не изменяющих свойств при высоких температурах, а также для обезвреживания отработанного зараженного материала.

Стерилизационная

После стерилизации посуда хранится в специальных шкафах и используется сотрудниками лаборатории для проведения микробиологических исследований; для забора материала для бактериологического исследования.

Стерильная посуда для забора материала для бактериологического исследования

Стерильная посуда для работы в лаборатории

Аварийная аптечка
Щит

Гардеробная

Душевая

Учебная комната

В России в соответствии с рекомендациями ВОЗ патогенные микробы делят на 4 группы:
I группа – возбудители особо опасных инфекций (возбудители чумы);
II группа – возбудители высококонтагиозных Ку-лихорадки и т.д.);
III группа – возбудители инфекционных болезней, выделяемые в самостоятельные нозологические группы (возбудители коклюша, столбняка, ботулизма, дифтерии, дизентерии и т.д.);
IV группа – условно-патогенные микробы – возбудители оппорунистических инфекций (возбудители кандидозов, септицемии, пищевых токсикоинфекций, пневмонии и т.д.).

Работу с культурами возбудителей I и II групп можно проводить только в специальных лабораториях с разрешением органов здравоохранения РФ.
Работа с возбудителями III и IV группы проводится в соответствии с правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии в лабораториях ФБУЗ и других бактериологических лабораториях.

По номенклатуре ВОЗ выделяют 3 категории микробиологических лабораторий:
базовые (основные или общего типа), которые в связи с конкретными особенностями работы, могут быть оборудованы различными защитными устройствами;
режимные (изолированные), или лаборатории удержания;
лаборатории особого режима (максимально изолированные), или лаборатории максимального удержания.

Оформление результатов проводится на специальных бланках, которые передаются лечащему врачу.
В ответах, прежде всего, указывается патогенные, а также условно-патогенные микроорганизмы, обнаруженные при микробиологическом исследовании. Сообщаются данные лабораторного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
При обнаружении микробных ассоциаций перечисляются все микроорганизмы, указываются доминирующие виды и количественные микробиологические показатели.
В соответствии с правилами международной номенклатуры в ответах приводятся видовые названия микроорганизмов, например: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и т.д.
С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, например Proteus sp., Candida sp. и т.д.
Оформление результатов лабораторных микробиологических исследований

Результаты бактериологического исследования

Результаты бактериологического исследования

Режим работы в лаборатории зависит от степени опасности заражения для лиц, работающих с болезнетворными микроорганизмами или материалом, их содержанием.
Микроорганизмы по степени опасности заражения ими разделены на четыре группы:
Возбудители чумы;
Возбудители холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, сапа, Ку-лихорадки и т.д.;
Возбудители коклюша, возвратного тифа, столбняка, ботулизма, дифтерии, лепры, брюшного тифа, дизентерии и т.д.;
Возбудители пневмонии, пищевых токсикоинфекций, газовой гангрены, септицемии, кандидозов; микробы – показатели санитарного состояния объектов окружающей среды.
Работу с культурами возбудителей I и II групп можно проводить только в специальных лабораториях с разрешения органов здравоохранения РФ.

Все сотрудники должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых случаях работающие надевают на лицо маску из марли. Работа с особо опасными м/о регламентируется специальной инструкцией и производится в режимных лабораториях.
В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.
Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи сотрудников следует хранить в специально отведенном месте.
При случайном попадании инфицированного материала на стол, пол и другие поверхности эхто место необходимо тщательно обработать дезинфицирующим раствором.
Хранение, наблюдение за культурами микроорганизмов и их уничтожение должны производится согласно специальной инструкции. Все культуры патогенных микроорганизмов регистрируются в специальном журнале.
По окончании работы руки следует тщательно вымыть, а при необходимости обработать дезинфицирующим раствором.
Правила работы в микробиологической лаборатории

Микробиологические методы исследования

Микроскопический метод заключается в приготовлении микроскопических препаратов (нативных или окрашенных простыми или сложными способами) из исследуемого материала и их микроскопии с применением различных видов микроскопической техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная и др.).

Бактериологический метод заключается в посеве исследуемого материала на искусственные питательные среды с целью выделения и идентификации чистой культуры возбудителя.

Биологический метод (эксперементальный, или биопроба) заключается в заражении исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных.
Его используют для выделения чистой культуры возбудителя, определения типа токсина и активности антимикробных химиотерапевтических препаратов и т.д.

Серологический метод заключается в определении титра специфических антител в сыворотке крови больного, реже в обнаружении микробного антигена в исследуемом материале.
С этой целью используют реакции иммунитета.

Аллергологический метод заключается в выявлении инфекционной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препарат-аллерген.
С этой целью ставят кожные аллергические пробы с соответствующими аллергенами.

Молекулярно-генетический метод - например, полимеразная цепная реакция (ПЦР). Позволяет обнаружить микроорганизм в исследуемом материале по наличию в нем ДНК микроорганизма.

Задания для самопроверки знаний

Упражнение 1
Ключевые понятия
Подберите правильные определения перечисленным ключевым терминам, вписав вместо пробела соответствующий номер из списка приведенных следом определений:
_______ моечная
_______регистратура
_______стерилизационная
_______лабораторная комната
_______бокс с предбоксником
_______средоварочная
_______препараторская