Секвенирование

Содержание

Слайд 2

таким образом в каждой пробирке образуется набор фрагментов ДНК разной длины, которые

таким образом в каждой пробирке образуется набор фрагментов ДНК разной длины, которые
заканчиваются одним и тем же нуклеотидом. Затем полученные фрагменты визуализируют с помощью электрофореза и, сравнивая длины фрагментов из четырех реакций с ddATP, ddTTP, ddCTP или ddGTP, восстанавливают последовательность ДНК.

Энзиматический метод.

Слайд 3

Пиросеквенирование

Во время цикла пиросеквенирования при образовании фосфодиэфирной связи между матричной цепочкой ДНК

Пиросеквенирование Во время цикла пиросеквенирования при образовании фосфодиэфирной связи между матричной цепочкой
и нуклеотидом синтезируемой цепи выделяется пирофосфат, который запускает каскад химических реакций, приводящих к выделению АТФ, необходимой для реакции окисления люциферина с выделением кванта света, который фиксируют аналоговой интегральной микросхемой (ПЗС-матрицей), состоящей из светочувствительных фотодиодов.

Слайд 4

Химический метод.

один из дезоксинуклеотидов радиоактивно помечен по α-положению фосфата (32P)

Далее результаты визуализируют

Химический метод. один из дезоксинуклеотидов радиоактивно помечен по α-положению фосфата (32P) Далее
с помощью электрофореза, и определяют последовательность ДНК, исходя из того, что в «плюс»-системе терминация (прерывание) ПЦР происходит после конкретного dNTP, а в «минус»-системе — перед ним

Слайд 5

Гибридизация

Для определения нужен ДНК-зонд – комплементарная
цепь ДНК

Гибридизация Для определения нужен ДНК-зонд – комплементарная цепь ДНК

Слайд 6

Введение нового гена в клетку

Через вектор

Путем прямого введения

Молекула ДНК или РНК, способная

Введение нового гена в клетку Через вектор Путем прямого введения Молекула ДНК
переносить включенные в нее чужеродные гены в клетку, где эти молекулы реплецируются автономно или после интеграции с геном

Слайд 7

Свойства вектора:

Свойства вектора:

Слайд 8

плазмиды

Небольшие внехромосомные , автономно реплицирующиеся кольцевые молекулы ДНК, которые есть в бактериальной

плазмиды Небольшие внехромосомные , автономно реплицирующиеся кольцевые молекулы ДНК, которые есть в бактериальной клетке
клетке

Слайд 10

Векторные системы, предназначенные для клонирования крупных фрагментов ДНК

космиды —участки плазмидных ДНК (ген-маркер)

Векторные системы, предназначенные для клонирования крупных фрагментов ДНК космиды —участки плазмидных ДНК
и ДНК бактериофаг (оболочка)
фазмиды —искусственные гибриды между фагом и плазмидой
бактериальная искусственная хромосома
дрожжевая искусственная хромосома

Слайд 11

Методы прямого переноса генов в клетку

Трансформация —увеличению проницаемости ее клеточной оболочки: обрабатывают

Методы прямого переноса генов в клетку Трансформация —увеличению проницаемости ее клеточной оболочки:
ледяным раствором СаС12, выдерживают при температуре 42 °С в течение 1,5 мин.
Трансдукция —перенос бактериальной ДНК из одной клетки в другую бактериофагом.
Трансфекция —введение ДНК, адсорбированной на кристаллах фосфата кальция (кальциевый преципитат), в клетку путем фагоцитоза

Слайд 12

Электропорация —импульсов высокого напряжения электрического тока → на клеточную мембрану→ временное образование

Электропорация —импульсов высокого напряжения электрического тока → на клеточную мембрану→ временное образование
большого количества пор→ увеличивает проницаемость мембран.
Микроинъекции ДНК — с помощью тонки х микроигл и микроманипулятора вводить в клетку или прямо в ядро векторную ДНК с включенным в нее трансгеном
Упаковка в липосомы– оболочки из фосфолипидов (способны непосредственно сливаться с мембраной клетки или поглощаться клетками→ разрушение оболочки липосом и высвобождение ДНК)
Имя файла: Секвенирование.pptx
Количество просмотров: 59
Количество скачиваний: 1