Секвенирование

таким образом в каждой пробирке образуется набор фрагментов ДНК разной длины, которые заканчиваются одним и тем же нуклеотидом. Затем полученные фрагменты визуализируют с помощью электрофореза и, сравнивая длины фрагментов из четырех реакций с ddATP, ddTTP, ddCTP или ddGTP, восстанавливают последовательность ДНК.
Энзиматический метод.

Пиросеквенирование
Во время цикла пиросеквенирования при образовании фосфодиэфирной связи между матричной цепочкой ДНК и нуклеотидом синтезируемой цепи выделяется пирофосфат, который запускает каскад химических реакций, приводящих к выделению АТФ, необходимой для реакции окисления люциферина с выделением кванта света, который фиксируют аналоговой интегральной микросхемой (ПЗС-матрицей), состоящей из светочувствительных фотодиодов.

Химический метод.
один из дезоксинуклеотидов радиоактивно помечен по α-положению фосфата (32P)
Далее результаты визуализируют с помощью электрофореза, и определяют последовательность ДНК, исходя из того, что в «плюс»-системе терминация (прерывание) ПЦР происходит после конкретного dNTP, а в «минус»-системе — перед ним

Гибридизация
Для определения нужен ДНК-зонд – комплементарная
цепь ДНК

Введение нового гена в клетку
Через вектор
Путем прямого введения
Молекула ДНК или РНК, способная переносить включенные в нее чужеродные гены в клетку, где эти молекулы реплецируются автономно или после интеграции с геном

Свойства вектора:

плазмиды
Небольшие внехромосомные , автономно реплицирующиеся кольцевые молекулы ДНК, которые есть в бактериальной клетке

Векторные системы, предназначенные для клонирования крупных фрагментов ДНК
космиды —участки плазмидных ДНК (ген-маркер) и ДНК бактериофаг (оболочка)
фазмиды —искусственные гибриды между фагом и плазмидой
бактериальная искусственная хромосома
дрожжевая искусственная хромосома

Методы прямого переноса генов в клетку
Трансформация —увеличению проницаемости ее клеточной оболочки: обрабатывают ледяным раствором СаС12, выдерживают при температуре 42 °С в течение 1,5 мин.
Трансдукция —перенос бактериальной ДНК из одной клетки в другую бактериофагом.
Трансфекция —введение ДНК, адсорбированной на кристаллах фосфата кальция (кальциевый преципитат), в клетку путем фагоцитоза

Электропорация —импульсов высокого напряжения электрического тока → на клеточную мембрану→ временное образование большого количества пор→ увеличивает проницаемость мембран.
Микроинъекции ДНК — с помощью тонки х микроигл и микроманипулятора вводить в клетку или прямо в ядро векторную ДНК с включенным в нее трансгеном
Упаковка в липосомы– оболочки из фосфолипидов (способны непосредственно сливаться с мембраной клетки или поглощаться клетками→ разрушение оболочки липосом и высвобождение ДНК)