Методы изучения реакций с участием свободных радикалов:1. Электронный парамагнитный резонанс 2. Хемилюминесценция3. Биохимическ

Биохимические
Маркеры,
Диеновая коньюгация,
Ингибиторный анализ
Электронный парамагнитный резонанс
Прямое обнаружение радикалов
Метод спиновых ловушек
Хемилюминесценция
Собственная
Активированная
Клеточная ХЛ
Липидные системы
Диагностика
Действие лазеров
Липопротеины крови
АОА веществ
Методы изучения реакций с участием свободных радикалов

Методы изучения свободных радикалов:
Метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР)
Прямое измерение сигнала радикалов
Сигналы стабильных радикалов
Метод быстрого смешивания
Стабилизация радикалов при низких температурах
Метод спиновых ловушек

Прямое обнаружение радикалов липидов методом ЭПР в проточной кювете
Резонатор
Магнит
S
N
Сигнал ЭПР
Осипов А. Н., Моравский А. П., Шувалов В. Ф., Азизова О. А., Владимиров Ю. А. 1980, Биофизика 25(2): 234-238.

Две реакции образования радикалов гидроксила
+
+
.
ОН
Радикал
гидроксила
Спиновая
ловушка
ФБН
Спиновый
аддукт
ФБН
Реакция
Фентона
Реакция c HOCl

Сигнал ЭПР спиновых аддуктов ФБН и радикалов олеиновой кислоты, образующихся в реакции ионов Fe2+ с гидроперекисью линоленовой кислоты
Fe2+ + LOOH → Fe3+ + LO• + OH-
PBN + LO• → PBN-LO (аддукт)

Биохимические методы изучения свободных радикалов
Биомаркеры
Диеновая коньюгация
Ингибиторный анализ

Биохимические методы изучения свободных радикалов
Биомаркеры

de Zwart, L. L., Meerman, J. H., Commandeur, J. N. and Vermeulen, N. P. (1999). Biomarkers of free radical damage applications in experimental animals and in humans. Free Radic Biol Med 26(1-2): 202-26.
Biomarkers

Маркеры оксидативного повреждения нуклеиновых кислот (слева) и белков (справа)
8-гидроксигуанозин
тимидингликоль
о-тирозин

Образование маркеров при окислении ДНК

Биомаркеры на окисление арахидоновой кислоты

Структура некоторых изопростанов

Маркеры липидной пероксидации
Липогидропероксид
Алканы
Коньюгированные диены
Малоновый диальдегид
α-,β -ненасыщенные альдегиды
Цепное окисление
Липоксигеназа
Алифатические альдегиды

Биомаркеры -карбонилы

Кинетика образования изопростановых биомаркеров у крыс при отравлении четыреххлористым углеродом

Биомаркеры у курильщиков

Биохимические методы изучения свободных радикалов
Диеновая коньюгация

Другая форма изображения диеновой коньюгации
─ CH2─ CH = CH ─ CH2─ CH = CH ─ CH2 ─
∙
∙
∙
∙
OO
LH
─ CH2─ CH ─ CH = CH ─ CH = CH ─ CH2 ─
OOH + L
∙
1
2
3
4
5

Третий способ изображения процесса диеновой коньюгации

0,0
УФ-облученные
Необлученные
Спектры диеновых коньюгатов
234 нм
Образование коньюгированных диенов при УФ-облучении фосфолипидов митохондрий

Биохимические методы изучения свободных радикалов
Ингибиторный анализ

Ингибиторный анализ
Супероксид-дисмутаза (СОД) → Ингибирование реакций с участием супероксидного радикала
Перехватчики липидных радикалов (токоферол, каротиноиды, флавоноиды и другие «липидные антиоксиданты») → Ингибирование реакций с участием липидных радикалов
Примеры
Биохимические методы изучения свободных радикалов