Методи генетичного аналізу

Перші мозаїки у дрозофіли – гінандроморфи (Морган, 1914)
Причини виникнення мозаїцизму:
Мозаїк – органїзм, у якого клітини мають різний генотип
Втрата хромосоми під час поділу
Соматичний кросінговер
Інсерційницй мутагенез

Визначити місце та характер активності гена:
Чи функція гена внутрішньоклітинна, чи він діє на віддалені клітини?
Використання соматичних мозаїків у генетичному аналізі:
2. Вивчення функції летальних генів, оскіки гомозиготи гинуть у ембріональному періоді, а мозаїки - життєздатні

y+ sn
♀
y sn+

Молекулярні інструменти –трансформація у дрозофіли
1982 - Дж.Рубін та А.Спрадлінг, вектор Р-елемент
Ефективність трансформації близько 14%

Як включити рекомбіназу FLP?
Система FRT – FLP
FLP – рекомбіназа дріжджів (фліпаза), що викликає сайтспецифічну рекомбінацію
FRT – сайт мішень
Перевага – рекомбінацію можна «вмикати» у подрібний час та у визначеному місті

Хит-шоком (38˚ на 1 год). FLP під хіт-шоковим промотором
Клони розподілятимуться по тканинах випадково

FRT
FRT
промотор
GFP- білок
Маркування
GFP-білок зявиться, якщо спейсер
видалено
Клони в імагінальному диску крила

2. Бінарна GAL4 – UAS система
UAS-FLPпромотор + специфічний драйвер GAL4 (активатор транскрипції дріжджів)
– тканиноспецифічні клони

Маркування геном w

Функціональний knock-out
До 70-80% мРНК інактивується