Роль точечных мутаций гена RUNX1 в патогенезе миелодиспластических и миелопролиферативных заболеваний у детей

Оглавление
Актуальность темы.
Цели и задачи.
Объект и предмет исследований.
Научная гипотеза.
Основные результаты.
Научная новизна.
Положения, выносимые на защиту.
Конференции и публикации.
Благодарности.
Спасибо за внимание
Приложение

1. Актуальность темы
Нарушение транскрипционной регуляции – это одно из ключевых событий в процессе лейкемогенеза. В последнее время были охарактеризованы некоторые участники, имеющие критическое значение для этого процесса. Одним из них является продукт гена RUNX1.
Роль мутаций гена RUNX1 в альтернативных путях кооперации мутаций в процессе лейкемической трансформации представляет большой интерес. Принято считать, что мутации в этом гене принадлежат к группе II событий, приводящих к нарушению регуляции процесса дифференциации клеток. В то время как мутации группы I проявляются в нарушении пролиферации. У пациентов с миелодиспластическим синдромом/острым миелоидным лейкозом (МДС/ОМЛ) и мутацией в RUNX1, последние чаще всего наблюдаются в NRAS, FLT3, JAK2 и с-KIT генах.

2. Цели и задачи
Цель: исследование роли точечных мутаций гена RUNX1 в патогенезе миелодиспластических и миелопролиферативных заболеваний у детей
Задачи:
Определить группы пациентов детского возраста с миелодиспластическими и миелопролифера-тивными заболеваниями, в которых наиболее часто встречаются точечные мутации гена RUNX1
Охарактеризовать кооперативные пути лейкемогенеза у пациентов с точечными мутациями гена RUNX1

3. Объект и предмет исследований
В исследование были включены 248 пациентов в возрасте от 1 до 18 лет с миелодиспластическим или миелопро-лиферативными заболеваниями за период с 1986 по 2009г. Исследования были одобрены комитетом ГУ РНПЦДОГ по этическим вопросам (протокол от февраля 2007г.)

Пациенты (248 человек) были разделены на шесть групп по их клиническим характеристикам:
de novo ОМЛ – 204 человека
de novo МДС – 20 человек
вторичный ОМЛ после лечения опухоли –
6 человек
вторичный ОМЛ после лечения АА – 3 человека
ЮММЛ – 10 человек
ХММЛ – 5 человек.

4. Научная гипотеза
Поскольку до сих пор вся существующая информация была получена для взрослых пациентов, было принято решение исследовать случаи точечных мутаций гена RUNX1 в детских миелодиспластических и миелопролиферативных заболеваниях. Кроме того, была предпринята попытка охарактеризовать описанные ранее для взрослых пути кооперации мутаций в выбранной группе пациентов с мутациями в RUNX1.

5. Основные результаты
В ходе проведенного нами исследования было показано, что частота мутаций гена RUNX1 в группе пациентов детского возраста с диагнозом первичный ОМЛ составила 3%, первичный МДС - 15%, вторичный ОМЛ – 33%.
В группе пациентов с индуцированными заболеваниями показана кооперация между мутациями в генах RUNX1, NRAS и хромосомной аберрацией -7/7q-, тогда как в группе с мутациями в гене RUNX1 и диагнозом первичный ОМЛ и МДС преобладают пациенты нормальным кариотипом в опухолевых клетках.
В группе пациентов с диагнозом de novo и вторичный ОМЛ и МДС, характеризующихся нормальным кариотипом или аберрацией -7/7q-, необходимо проводить мутационный скрининг гена RUNX1, с целью поиска генетического маркера для эффективного отслеживания минимальной остаточной болезни в ходе лечения и на стадии ремиссии.

6. Научная новизна
Впервые получена информация о роли точечных мутаций гена RunX1\AML1 в патогенезе миелодиспластических и миелопролиферативных заболеваний у детей.
Охарактеризованы альтернативные пути кооперации мутаций у пациентов с МДС\ОМЛ.

7. Положения, выносимые на защиту
Наиболее часто точечные мутации гена RunX1\AML1 встречаются у пациентов с диагнозом «вторичный ОМЛ»;
В случаях индуцированного терапией ОМЛ показана кооперация между мутациями RunX1, NRas и хромосомной аберрацией -7/7q.

8. Конференции и публикации
«66-я научная конференция студентов, магистрантов, аспирантов» 7 мая 2009г., г. Минск
«67-я научная конференция студентов, магистрантов, аспирантов» 4 мая 2010г., г. Минск
Мигас А.А., Савва Н.Н., Матвеева (Мишкова) О.А., Алейникова О.В. Мутации гена RUNX1 у пациентов детского и юношеского возраста с de novo и вторичными ОМЛ и МДС. Сборник статей "Патогенез социально значимых заболеваний человека"., стр.79-82. Минск, БГМУ.

9. Благодарности
научному руководителю к.б.н. Гринёву В.В.
м.н.с. лаборатории молекулярно-генетических исследований ГУ РНПЦДОГ Мигасу А.А.
зам.директора ГУ РНПЦДОГ по науке Савве Н.П.
научной группе лаборатории молекулярно-генетических исследований ГУ РНПЦДОГ
К.б.н., в.н.с. ГУ РНПЦДОГ Кустановичу А.М.

Спасибо за внимание

Обнаруженные нуклеотидные замены у пациентов.

Доля случаев мутаций среди групп пациентов с соответствующими диагнозами

Особенности цитогенетических характеристик у пациентов с обнаруженным мутациями

Экспрессия генов b-actin и RUNX1 у пациентов с делециями и в контрольном образце дикого типа.
Дорожки 1, 2 и 5, 6 представляют собой продукты амплификации кДНК генов b-actin и RUNX1 в образцах № 6 и 14 соответственно. Дорожки 3, 4 и 7, 8 в контрольных образцах здоровых доноров.

Анализ числа копий гена RUNX1 у пациентов с делецией в 17 пар оснований.
Дорожки 1-3 представляют продукты ПЦР амплификации экзона 5 и части интрона 5-6 гена RUNX1 в случаях №6, 14 и для донора дикого типа соответственно. Расположенный выше фрагмент – продукт амплификации аллеля дикого типа. Нижний – продукт мутантного аллеля. Дорожки 4-6 демонстрируют ПЦР продукт амплификации фрагмента гена b-globin в таком же порядке.