Биотехнология 2

TALEN
(Transcription Activator-Like Effector Nucleases;
эффекторные нуклеазы, подобные активаторам
транскрипции)
ZFN
«Цинковопальцевые нуклеазы»
нуклеазы на основе белков,
содержащих домен «цинковые пальцы)

Создание клонотеки кДНК
Синтез первой цепи
Фермент — обратная транскриптаза

Создание клонотеки кДНК

Клонирование с использованием линкеров
Вставка не содержит сайтов EcoRI?

Технология SMART

Технология RACE

Создание
клонотеки
cDNA
cDNA Library Construction Kit (Clontech)

GFP-белок

GFP-белок

GFP-белок

Phage Display Library

Бактериофаг М13

Строение филаментных бактериофагов E coli
(f1, fd, M13)

Бактериофаг М13
11 генов
5 кодируют белки капсида;
2 отвечают за репликацию фаговой ДНК;
3 за самосборку фаговых частиц
и секрецию;
1 – за связывание c одноцепочечной
фаговой ДНК в процессе,
предшествующем самосборке
фаговых частиц

F-плазмида

Жизненный
цикл
бактериофага

Репликация бактериофага М13

Жизненный цикл бактериофага
Самосборка и секреция фаговых частиц

Фаговый дисплей

108-109 вариантов

Smith (1990)
Аффинная
селекция
(биопэнинг)
фагов

Типы фаговых комбинаторных библиотек
Основные типы пептидных библиотек различаются:
количеством копий рекомбинантного белка с экспонированным
чужеродным белком по отношению к белку дикого типа на одну фаговую частицу
2) количеством векторных систем, обеспечивающих экспонирование.
3
3+3
фаг-помощник
33