Слайд 2Пространственная структура миоглобина (кашалота) в проекции ху
Миоглобин (переносчик кислорода в мышцах) содержит
один гем и одну полипептидную цепь, включающую 153 остатка, которые распределены в основном по 8 а-спиральным участкам (А — Н). Гем, в центре которого расположен атом Fe, находится между спиралями Е и F.
Слайд 3Расщепление d-орбиталей в октаэдрическом комплексе (I): и распределение d-электронов по орбиталям высокоспинового
(расщепление Δ мало) и низко спинового (расщепление Δ велико) состояний иона Fe2+ (II)
Слайд 4Структурные изменения, происходящие в гемоглобине при оксигенации (объяснение см. в тексте) (по
Д. Мецлеру, 1980)
Слайд 5МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОФИЗИКА
Белки и нуклеиновые кислоты.
Методы изучения
Слайд 6Методы изучения подвижности белков
Люминесцентные методы
ЭПР
ЯМР
ЯГР спектроскопия
Метод изотопного обмена
Слайд 7Кривые потенциальной энергии основного (So) и синглетного возбужденного (S*) состояний двухатомной молекулы:
U
— потенциальная энергия; г — межъядерное расстояние; I — интенсивность поглощения; X — длина волны; 0-5 — колебательные подуровни ядерных состояний
Слайд 8Электронные уровни органической молекулы и переходы между ними (схема Яблонского): р —
вероятность переходов в единицу времени на основной уровень с испусканием флуорисценции, qi—то же, без излучения; г — вероятность конверсии и триплетное состояние.
Молекула обладает системой триплетных T1, Т2,... и синглетных возбужденных уровней S 1, S2,..., Sn. При переходе на один из высших возбужденных синглетных уровней избыток энергии быстро (10-12 с) диссипирует; молекула попадает на низший возбужденный синглетный уровень S1, с которого и происходит переход (S1 → S0) или
внутримолекулярная конверсия (S1 → Т1). Суммарная вероятность (P) дезактивации определяется суммой величину, qi, r:
Р = р + qi + r
Слайд 9Люминесцентные методы
Измерение внутримолекулярной подвижности белка по зависимости положения максимума люминесценции метки, введенной
в белок, либо собственной люминисценции триптофана белка от температуры
Характеристика подвижности окружения метки
t=10-2-10-6 c
τ=10-1-10-2 c
τ*=10-8-10-9 c
Слайд 10Зависимость положения спектра флуорисценции водного раствора (3-лактоглобулина (I) и нейтротоксина II кобры
(II) от температуры при рН 6,5 (по Е. А. Пермякову, 1977)
Слайд 11Методы радиоспектроскопии
ЭПР и ЯМР
Расщепление энергетических уровней электрона (протона) в магнитном поле (Н)
Слайд 12Энергетические уровни электрона в магнитном поле. А — один электрон (спин 1/2);
Б — три электрона (максимальное значение спина 3/2;
Слайд 13Линия поглощения СВЧ-
а) поля
б) ее первая производная
Ось абсцисс — величина постоянного
магнитного поля Н, которая плавно меняется при постоянной частоте СВЧ-поля до достижения значений, соответствующих условию резонансного поглощения
Слайд 14Линия резонанса ЭПР
Ширина:
Т1 – время передачи энергии окружающей среде
Т2 – время
спин-спинового взаимодействия
Для свободных радикалов: Т1 >> Т2
Слайд 15Схема парамагнитного фрагмента нитроксильного радикала
Слайд 16Спектр ЭПР парамагнитной метки, присоединенной к гис-15 лизоцима (рН 7,0; t=26°C) (по
Г.И. Лихтенштейну, 1971):
h-1, h0, h+1—интенсивность компонентов, соответствующих M= —1;0;+1; ΔH0—ширина центрального компонента
Слайд 17ЯМР-спектроскопия
Измерение времени релаксации Т1 и Т2 по ширине линии резонанса.
Определение времени вращения
метки, на которой наблюдается резонанс
Оценка подвижности белковых структур в состав которых входят «резонирующие» протоны
Изучение некоторых видов внутримолекулярного движения в белках
Информация о химической структуре молекулы
Слайд 18Спектр ЯМР ацетальдегида СН3СНО
СНО химический сдвиг СН3
по А.Керрингтону, Э. Мак-Лечлану, 1970
Слайд 19ЯГР спектроскопия
Дает информацию не только о временных, а также амплитудных характеристиках движений
в белке (средние величины смещений атомов в структуре белка за
t=10-7-10-9 c)
Основан на резонансном поглощении γ-квантов тяжелым ядром атома
Эффект Мёссбауэра
Слайд 20Эффект Мёссбауэра
Уширение спектра обусловлено диффузией молекул белка. Изменение частоты уширения пропорционально
скорости источника (v)
Слайд 24Picture of G-Protein Receptor Family 7 TM Transmembrane Domains