Ферментативная активность кальпаинов в поперечно-полосатых мышцах спонтанно-гипертензивных крыс (SHR)

Основные белки кальпаиновой системы позвоночных
µ-кальпаин
m-кальпаин
Кальпастатин

Цель: выяснение роли основных компонентов кальпаиновой системы в развитии гипертрофии сердечной мышцы и атрофии скелетных мышц у спонтанно-гипертензивных крыс (SHR)
Задачи:
Изучить изменения общей активности кальпаинов в белковых экстрактах, полученных из поперечно-полосатых мышц 12 и 15 недельных спонтанно-гипертензивных крыс (SHR)
Изучить изменения содержания μ-кальпаина и ингибитора кальпастатина в поперечно-полосатых мышцах 12 и 15 недельных SHR
Изучить изменения содержания и уровня фосфорилирования субстратов кальпаинов – тайтина и небулина в поперечно-полосатых мышцах 12 и 15 недельных SHR
Изучить изменения экспрессии генов исследуемых белков в поперечно-полосатых мышцах 12 и 15 недельных SHR

Методы
Метод флуоресцентной спектрофотометрии с использованием набора Calpain Activity Assay Kit («Abcam») для определения общей активности кальпаинов
ДСН-гель-электрофорез и Вестерн-блот анализ кальпаина и кальпастатина
ДСН-гель-электрофорез тайтина
Метод определения уровня фосфорилирования тайтина с помощью флуоресцентного красителя фосфатных групп белков Pro-Q Diamond («Invitrogen», США)

Общая активность кальпаинов

Вестерн-блот анализ

Уровни фосфорилирования тайтина
*
*

qRT-PCR
m. gastrocnemius

m. soleus
qRT-PCR

Сердце
qRT-PCR