Лабораторная медицина

Определение относительной плотности мочи урометром
Принцип метода:
Относительная плотность мочи составляет в норме 1,015-1,025 г/см3. Определение относительной плотности мочи производят с помощью специальных ареометров небольшого размера, называемых урометрами. Урометры бывают двух типов: первый - для мочи с низкой и нормальной относительной плотностью (с делениями от 1,000 до 1,030 г/см3), второй - для мочи с высокой относительной плотностью (с делениями от 1,030 до 1,060 г/см3).

ХОД РАБОТЫ
В небольшой цилиндр с таким диаметром, чтобы урометр свободно плавал в нем, наливают по стенке исследуемую мочу и осторожно погружают в нее урометр. Производят отсчет, беря ту линию на шкале урометра, которая соответствует нижнему мениску жидкости. Все определения производят при температуре 200С, поскольку шкала урометра проградуирована в соответствии с этой температурой. Если моча имеет другую температуру, то на каждые 30С свыше этой температуры нужно прибавить, а на каждые 30С ниже – убавить по 0,001 от показания шкалы урометра.

Определение белка в моче
Все реакции на содержание белка в моче основаны на его денатурации и осаждении. Перед проведением анализа необходимо профильтровать и подкислить щелочную мочу. Для определения белка в моче применяют пробы кипячения с сульфасалициловой кислотой, Геллера.
Количественное определение белка проводят по методу Робертса — Стольникова (Брандберга). Этот метод получил широкое распространение благодаря достаточной точности и простоте постановки. В его основе лежит проба Геллера с использованием 50%-ной азотной кислоты. При постановке реакции обращают внимание на плотность, ширину и время появления белого кольца на границе разделения сред. Образование белого нитевидного кольца на 3-й минуте после наслоения 50%-ной азотной кислоты на мочу соответствует 0,033 % белка в моче. Если нитевидное кольцо образуется тотчас после наслоения реактива, мочу следует развести дистиллированной водой или изотоническим раствором хлорида натрия в 2 раза. При образовании широкого кольца делают четырехкратное разведение (1 часть мочи на 3 части дистиллированной воды или изотонического раствора хлорида натрия). При необходимости делают восьмикратное разведение и т. д. В разведенной моче снова определяют время появления кольца. Полученное разведение умножают на 0,033, и это произведение отражает количественное содержание белка в моче.

Если реакция с сульфасалициловой кислотой дает положительный результат, а при количественном способе белок в моче не определяется, то считают, что в ней имеются лишь следы белка.

Определение в моче глюкозы
1. Редуктометрические. Почти не используются
2. Колориметрические. Почти не используются
3. Ферментативные:
а) глюкозооксидазный
- фотометрический по конечной точке
- фотометрический кинетический
- отражательная фотометрия – сухая химия
- электрохимический
б) гексокиназный.
Первые два метода крайне неудобны, токсичны и обладают низкой точностью, поэтому мы на них не будем останавливаться.
Глюкозооксидазный метод
Сегодня наибольшее распространение получили методы, основанные на использовании фермента – глюкозооксидазы. В основе метода лежит следующая реакция:

Среди вышеперечисленных способов регистрации наибольшее распространение получил фотометрический биохимический метод, в котором молекулы перекиси водорода под действием фермента пероксидазы расщепляются с образованием активной формы кислорода – супероксид анион-радикала – О2-, который в свою очередь окисляет хромоген, что приводит к значительному изменению спектра поглощения хромогена.

Наряду с методом фотометрирования по конечной точке, несколько лет назад появились наборы, в которых реализован кинетический метод фотометрирования. Суть метода состоит в том, что при определенном соотношении активностей глюкозооксидазы и пероксидазы, скорость образования окрашенного соединения некоторое время после внесения пробы в рабочий раствор будет пропорциональна концентрации глюкозы в пробе. Преимущество такого метода состоит в том, что результат не зависит от наличия в пробе других соединений, поскольку поглощение последних стабильно во времени. Этот метод требует применения кинетического фотометра, например Stat Fax 1904+, Stat Fax 3300, полуавтоматических анализаторов, например Clima 15, или автоматических биохимических анализаторов. Измерение концентрации глюкозы из цельной крови удобно выполнять с помощью приборов, работа которых основана на амперометрическом принципе измерения, при помощи специальных ферментных датчиков. Перекись водорода является крайне нестабильным химическим соединением и она может служить источником заряженных частиц. Именно это и используется в ферментных датчиках мембранного типа или электрохимических элементах портативных глюкометров.

Гексокиназный метод
Гексокиназный метод состоит из двух последовательных реакций, но совершенно других:

Регистрация осуществляется при длине волны 340 нм по светопоглощению НАДН. Этот метод является высокоспецифичным и не дает реакции с другими компонентами сыворотки крови. Гексокиназный метод считается референтным для определения глюкозы. Как правило, он линеен до 50 ммоль/л, что позволило его широко рекомендовать для клиник с эндокринологическими отделениями.