Микробиологическая диагностика энтеробактерий

Содержание ЭДМ
1. Введение
2. Требования ФГОС
3. Цели занятия
4. Актуализация опорных знаний
5. Изучение нового материала
6. Самостоятельная работа
7. Контрольные вопросы с использованием иллюстративного материала
8. Ситуационные задачи
9. Термины и определения
10. Список литературы

Введение
Учебный материал представлен в соответствии с требованиями Федерального государственного образовательного
стандарта ПМ 04 «Проведение лабораторный микробиологических исследований» специальности «Лабораторная диагностика»
(базовый уровень образования).

Профессиональные компетенции
ПК 4.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных микробиологических исследований.
ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов; участвовать в контроле качества.
ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК. 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

Требования ФГОС
Студент должен
Уметь:
- принимать и регистрировать поступающий исследуемый материал;
- проводить подготовку исследуемого материала, питательных среди других ингредиентов для проведения микробиологического исследования;
- проводить исследования с момента взятия материала до окончательного ответа;
- проводить исследование с применением бактериоскопического, бактериологического и серологического методов;
- проводить обеззараживание отработанного материала.

Цель занятия:
Методическая
Активизация познавательной деятельности студентов. Использование современных средств обучения при изучении профессиональной дисциплины.
Учебная
Познакомиться с основными возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний. Микробиологическая характеристика и диагностика инфекции.
Развивающая
Развитие у студентов интереса к изучаемой дисциплине.
Воспитательная
Воспитание у студентов умения логически мыслить. Анализировать, грамотно формулировать и излагать полученные знания.

Семейство Enterobacteriaceae
Энтеробактерии (лат. Enterobacteriaceae) — семейство грамотрицательных палочкообразных
спор не образующих бактерий, факультативные анаэробы.
Семейство энтеробактерий включает большое число представителей нормальной микрофлоры человеческого организма и, в то же время, значительное количество патогенных микробов.

Энтеробактерии — возбудители заболеваний
Энтеробактерии являются причиной большого числа различных заболеваний человека. Ниже перечислены лишь некоторые:
Escherichia coli (кишечная палочка) — ряд патогенных серотипов могут
быть причиной различных инфекционных заболеваний, протекающих с
интоксикацией, лихорадкой, обычно с поражением желудочно-кишечного
тракта (различные диареи, в том числе диарею путешественников,
геморрагический колит, гемолитико-уремического синдром и другие), реже
— мочевыводящих, желчевыводящих путей, других органов или с
развитием сепсиса энтерогеморрагическая кишечная палочка была причиной кишечной инфекции 2011 года со смертельными исходами в Германии и других странах Европы
Klebsiella pneumoniae и klebsiella oxytoca — возбудители пневмонии,
заболеваний мочевыводящих путей, мозговых оболочек, суставов, глаз, а
также бактериемии и септикопиемии
Klebsiella ozaenae — возбудитель озены — зловонного насморка,
характеризующимся атрофическим процессом слизистой оболочки и
костных стенок полости носа
Klebsiella rhinoscleromatis — возбудитель склеромы, гранулематозного
поражения слизистой оболочки носа и верхних дыхательных путей

Salmonella enterica enterica серотип typhi — возбудитель брюшного тифа
Salmonella enterica enterica серотипы paratyphi A, paratyphi B, paratyphi C
Возбудители паратифов A, B и С.
Salmonella enterica, в том числе серотипы Salmonella typhimurium и Salmonella enteritidis и многие другие (но не перечисленные выше typhi и paratyphi A, B и С),— возбудители сальмонеллеза
Shigella dysenteriae, Shigella flexneri ,Shigella boydii, Shigella sonnei — возбудители дизентерии
Yersinia enterocolitica — возбудитель иерсиниоза (острого инфекционного заболевания, преимущественно желудочно-кишечного тракта)
Yersinia pseudotuberculosis — возбудитель псевдотуберкулеза
Yersinia pestis — возбудитель чумы
Энтеробактерии — возбудители заболеваний

Энтеробактерии — представители родов Citrobacier, Ewardsiella, Enterobacter, Echerichia, Hafnia, Klebsiella, Proteus, Providencia, Salmonella, Serratia, Yersiniaмогут вызывать инфекции мочеполовой сферы (в том числе циститы, пиелонефриты, острые и хронические простатиты,эпидидимиты и орхиты и т.п.).
Энтеробактерии могут быть причиной вагинитов (воспаления влагалища), цервицитах (воспаления канала шейки матки), других воспалительных гинекологических заболеваниях.
Энтеробактерии во влагалище обычно выявляются у пациенток, не соблюдающих правила личной гигиены.
Энтеробактерии — возбудители заболеваний

Эпидемиология.

Антропонозы — это инфекционные заболевания, при которых источником инфекции может быть только человек.

Зооантропонозы — это инфекционные заболевания, при которых источником инфекции могут быть как человек так и животные или птицы.

Зоонозы — это инфекционные заболевания, при которых источником инфекции могут быть только животные или птицы.

Причины распространения кишечных инфекций
Условия и факторы, способствующие распространению кишечных инфекций, многообразны. Ими являются как невыявленные источники возбудителей инфекции, так и множественные пути и факторы передачи возбудителей.
Зоонозы и зооантропонозы зависят в своем распространении:
от условий получения продуктов животного происхождения, т.е. от организации вскармливания и содержания животных и птицы,
от условий выращивания и хранения продуктов растительного происхождения, от доступности продовольственных складов и овощных баз для синантропных грызунов.

Механизм передачи возбудителей кишечных инфекций —
ФЕКАЛЬНО-ОРАЛЬНЫЙ.
Установлено, что уровень заболеваемости острыми кишечными инфекциями и различные характеристики проявлений эпидемического процесса во многом зависят от конкретных путей реализации механизма передачи.
Ряд закономерно повторяющихся признаков позволяет выделять черты водных, пищевых и контактно-бытовых вспышек острых кишечных инфекций.
3нание этих признаков облегчает расшифровку механизма возникновения вспышек. Определяющая роль путей и факторов передачи в распространении кишечных инфекций делает их главным объектом в организации и проведении профилактических и противоэпидемических мероприятий.

Механизм передачи возбудителей кишечных инфекций —
ФЕКАЛЬНО-ОРАЛЬНЫЙ

МЕХАНИЗМ ПЕРЕДАЧИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЧЕРЕЗ ВОДУ
ВОДНЫЙ ПУТЬ
- Нарушение очистки сточных вод
- Необеззараженная питьевая вода
- Сброс необеззараженных сточных вод
- Аварии канализации и водопровода

МЕХАНИЗМ ПЕРЕДАЧИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЧЕРЕЗ ПИЩУ
ПИЩЕВОЙ ПУТЬ
Нарушение технологии приготовления пищи Приготовление пищи больным или бактериовыделителем
Использование зараженных продуктов
Нарушение условий хранения и сроков реализации пищи

МЕХАНИЗМ ПЕРЕДАЧИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
ЧЕРЕЗ ПРЕДМЕТЫ БЫТОВОЙ ОБСТАНОВКИ
КОНТАКТНО-БЫТОВОЙ ПУТЬ
Фекальное загрязнение предметов
при нарушении санитарного режима

ПРОЯВЛЕНИЕ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА

ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА
ПРИ РАЗНЫХ ПУТЯХ ПЕРЕДАЧИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

ОРГАНИЗАЦИЯ И ПРОВЕДЕНИЕ
ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ И ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИХ МЕРОПРИЯТИЙ
ПРИ АНТРОПОНОЗНЫХ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
Наибольшее значение имеет санитарный контроль за эпидемиологически значимыми объектами: канализационной сетью и очистными сооружениями, источниками водоснабжения и водопроводной сетью. В сфере особого внимания находятся предприятия, связанные с заготовкой, хранением, приготовлением и реализацией пищевых продуктов (общественное питание, торговля), а также дошкольные детские учреждения, учебные и лечебные учреждения.
Планирование профилактической работы основано на учете миграции и возрастной структуры населения, рождаемости, доли многодетных семей и детей, посещающих дошкольные детские учреждения.
При эпидемиологическом надзоре за кишечными инфекциями проводится анализ и устанавливается связь заболеваемости с санитарно-гигиеническими условиями, с качеством проводимых мероприятий.

ПРОФИЛАКТИКА КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
При всем многообразии инфекций и несхожести некоторых черт эпидемиологии главным в работе является комплекс санитарно-гигиенических мер, направленных на устранение путей и факторов передачи.
Противоэпидемические мероприятия в конкретных очагах антропонозных кишечных инфекций на врачебном участке предусматривают весь комплекс мер, направленных на:
- на устранение путей и факторов передачи возбудителей;
- на обезвреживание и изоляцию источников инфекции;
- на защиту, предупреждение и раннее выявление болезни у лиц,
общавшихся с больным.

ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ И ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ
ПРИ АНТРОПОНОЗНЫХ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
1. Устранение путей и факторов передачи возбудителей.
2. Выявление источников инфекции.
3. Работа с восприимчивыми лицами.

УСТРАНЕНИЕ ПУТЕЙ И ФАКТОРОВ ПЕРЕДАЧИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ

ВЫЯВЛЕНИЕ ИСТОЧНИКОВ ИНФЕКЦИИ
БОЛЬНЫЕ (БАКТЕРИОВЫДЕЛИТЕЛИ)
Обследование пищевиков по эпидемическим показателям.
Контроль за больными острыми кишечными инфекциями.
Контроль за выделителями возбудителей.

РАБОТА С ВОСПРИИМЧИВЫМИ ЛИЦАМИ
САНИТАРНОЕ ПРОСВЕЩЕНИЕ
Привитие гигиенических навыков населению
Гигиенический режим при приготовлении пищи
Раннее обращение к врачу при болезни

ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ
ПРИ АНТРОПОНОЗНЫХ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
МЕРЫ В ОТНОШЕНИИ БОЛЬНОГО.
МЕРЫ ПО ПРЕРЫВАНИЮ МЕХАНИЗМА ПЕРЕДАЧИ.
РАБОТА С КОНТАКТНЫМИ ЛИЦАМИ.

ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ В ОЧАГЕ
АНТРОПОНОЗНЫХ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
МЕРЫ В ОТНОШЕНИИ БОЛЬНОГО
ГОСПИТАЛИЗАЦИЯ
ИЗОЛЯЦИЯ ДОМА
1. Нетяжелые формы болезни
2. Хорошие санитарно-бытовые условия
3. Санитарная грамотность и культура больного

ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ В ОЧАГЕ
АНТРОПОНОЗНЫХ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
МЕРЫ ПО ПЕРЕРЫВУ МЕХАНИЗМА ПЕРЕДАЧИ
ОЧАГОВАЯ ДЕЗИНФЕКЦИЯ
ОБЪЕКТЫ ДЕЗИНФЕКЦИИ
СРЕДСТВА ДЕЗИНФЕКЦИИ
ТЕКУЩАЯ
ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНАЯ
Испражнения больного
Унитаз, туалет
Постельное белье
Посуда
ХЛОРСОДЕРЖАЩИЕ
ЛИЗОЛ
ВЫСОКАЯ ТЕМПЕРАТУРА, КИПЯЧЕНИЕ

ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ В ОЧАГЕ
АНТРОПОНОЗНЫХ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
РАБОТА С КОНТАКТНЫМИ ЛИЦАМИ
МЕРЫ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ

ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ ПРИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
САНИТАРНЫЙ КОНТРОЛЬ
ЗА ЭПИДЕМИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫМИ ОБЪЕКТАМИ
Источники водоснабжения
Очистные сооружения
Водопроводная сеть
Канализационная сеть
Предприятия общественного питания
Предприятия торговли пищевыми продуктами
Детские учреждения
Учебные, лечебные и другие учреждения

ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ ПРИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
ОЦЕНКА
СОЦИАЛЬНО-ДЕМОГРАФИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ
Рождаемость
Возрастная структура населения Доля многодетных семей
Доля детей, посещающих дошкольные детские учреждения
Плотность населения
Миграция

ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ ПРИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЙ НАДЗОР
Связь заболеваемости и санитарно-гигиенических условий Качество и эффективность мероприятий
Прогноз заболеваемости

ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКАЯ РАБОТА
ПРИ ЗООАНТРОПОНОЗНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ

ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКАЯ РАБОТА
ПРИ ЗООАНТРОПОНОЗНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
ЛЕЧЕБНАЯ СЛУЖБА
РАБОТА В ЭПИДЕМИЧЕСКОМ ОЧАГЕ
ВЫЯВЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ ГОСПИТАЛИЗАЦИЯ ПО КЛИНИЧЕСКИМ И ЭПИДЕМИЧЕСКИМ ПОКАЗАНИЯМ
ОРГАНИЗАЦИЯ ТЕКУЩЕЙ ДЕЗИНФЕКЦИИ
ЗАБОР МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
НАБЛЮДЕНИЕ И ОБСЛЕДОВАНИЕ ОБЩАВШИХСЯ ЛИЦ

ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКАЯ РАБОТА
ПРИ ЗООАНТРОПОНОЗНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
ОБЪЕКТЫ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЙ СЛУЖБЫ
ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ОЧАГ
ПРЕДПРИЯТИЯ ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ И ОБЩЕСТВЕННОГО ПИТАНИЯ, ОВОЩЕХРАНИЛИЩА И ДР.
ВОДОИСТОЧНИКИ

ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКАЯ РАБОТА ПРИ ЗООАНТРОПОНОЗНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
РАБОТА САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЙ СЛУЖБЫ В ЭПИДЕМИЧЕСКОМ ОЧАГЕ 1. ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ ОЧАГА 2. ВЫЯВЛЕНИЕ ИСТОЧНИКОВ, ФАКТОРОВ ПЕРЕДАЧИ 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ПОДОЗРИТЕЛЬНЫХ ПРОДУКТОВ 4. НАБЛЮДЕНИЕ И ОБСЛЕДОВАНИЕ ОБЩАВШИХСЯ ЛИЦ 5. ОРГАНИЗАЦИЯ ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНОЙ ДЕЗИНФЕКЦИИ
РАБОТА САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЙ СЛУЖБЫ
НА ПРЕДПРИЯТИЯХ ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ И ОБЩЕСТВЕННОГО ПИТАНИЯ, ОВОЩЕХРАНИЛИЩАХ И ДР.
САНИТАРНО-ПРОСВЕТИТЕЛЬСКАЯ РАБОТА
КОНТРОЛЬ ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ ПРОДУКТОВ И ВОДЫ
ЗАЩИТА ПРОДУКТОВ ОТ ГРЫЗУНОВ
РАБОТА САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЙ СЛУЖБЫ
С ВОДОИСТОЧНИКАМИ
КОНТРОЛЬ СОДЕРЖАНИЯ

Систематика энтеробактерий
Энтеробактерии (Enterobacteriaceae) входят в порядок энтеробактерии (лат. Enterobacteriales), класс гамма-протеобактерии (лат. γ proteobacteria), тип протеобактерии (лат. Proteobacteria), царство бактерии.
Семейство энтеробактерии включает в свой состав следующие роды: Alishewanella, Alterococcus, Aquamonas, Aranicola, Arsenophonus, Averyella, Azotivirga, Brenneria, Buchnera, Budvicia, Buttiauxella, Cedecea, Citrobacter (цитробактер), Dickeya, Edwardsiella, Enterobacter (энтеробактер), Erwinia, Escherichia(эшерихии), Ewingella, Grimontella, Hafnia, Klebsiella (клебсиеллы), Kluyvera, Leclercia, Leminorella, Moellerella, Morganella, Obesumbacterium, Pantoea, Pectobacterium, Photorhabdus, Plesiomonas, Pragia,Proteus (протей), Providencia, Rahnella, Raoultella, Salmonella (сальмонеллы), Samsonia, Serratia, Shewanella, Shigella (шигеллы), Sodalis, Tatumella, Thorsellia, Tiedjeia, Trabulsiella, Wigglesworthia, Xanthomonas, Xenorhabdus, Xylella, Yersinia (иерсинии), Yokenella. Роды Blochmannia и Phlomobacter рассматриваются как кандидаты в семейство Enterobacteriaceae.

Бактериологическую диагностику ОКИ, вызванных эшерихиями проводят в соответствии:
1).Приказом МЗ СССР № 475 от 16.08.89 года « О мерах по дальнейшему совершенствованию профилактики заболеваемости ОКИ»
2).МУ «По микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериям» - 1984г. Москва
3).СП 3.1.1.1117-02 г. «Профилактика острых кишечных инфекций».
4).МУ 4.2.2039-05 г. «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории».

Лабораторное исследование включает:
1) Бактериологический метод
2) Серологический метод
Бактериологическое исследование направлено на выделение и типирование возбудителя в посевах кала и других биологических секретах и экскретах организма больного.
2) Серологическое исследование проводится с применением специфических диагностикумов в различных реакциях (РА, РНГА,ИФА и т.п.)

Материал для лабораторного исследования
Бактериологическому исследованию на наличие энтеробактерий (ЭН) подвергают различный материал. При сборе материала необходимо учитывать клинические проявления заболевания, его сроки, предполагаемый диагноз, преимущественную локализацию. Основным материалом при исследовании служит отделяемое кишечника. Однако ЭН вызывают заболевания и вне кишечной локализации. Следовательно, материалом для бактериологического исследования могут быть не только испражнения, но и кровь, отделяемое зева, носа, желчь, пунктанты, соскобы, гной, эксудат, отделяемое мочеполовых органов, грудное молоко, биоптаты и др.

Материал для лабораторного исследования
Материал собирают в стерильную посуду, которую
снабжают наклейкой с указанием Ф.И.О. обследуемого и
наименованием исследуемого материала.
В сопроводительном документе указывают учреждение,
направляющее материал, анкетные данные обследуемого:
Ф.И.О., возраст, место работы, должность, дату
заболевания, диагноз или другие показания для
обследования, наименование материала,
час взятия пробы, цель исследования, первичность или
повторность исследования (при повторных исследованиях
необходимо указать дату и результат первичного
обследования), фамилию и должность лица
направляющего материал.

Материал для лабораторного исследования
Судно до сбора материала дезинфицируют
растворами хлора с последующей тщательной
отмывкой горячей водой до полного удаления
хлора. Испражнения собирают после дефекации из
судна, горшка, специального лотка, с пеленки с
помощью стеклянной стерильной палочки, проволочной
петли или деревянного шпателя. При наличии в
испражнении слизи, хлопьев, гноя их следует включить
в отбираемую пробу.
С целью обнаружения сальмонелл для посева следует
брать материал из последней порции испражнений,
происходящих из верхних отделов кишечника.

Материал для лабораторного исследования
Кровь на исследование берут
одноразовым шприцом с
соблюдением правил асептики
из локтевой вены в объеме 2-20 мл
(в зависимости от срока заболевания,
тяжести клинического течения и возраста
больного). Взятую кровь тут же засекают во
флакон или колбу с питательной средой(10 20%
желчный бульон, среду Рапопорт, в соотношении
1:10 с целью уменьшения
бактерицидного/бактериостатического
действия крови на возбудитель заболевания.

Материал для лабораторного исследования
Желчь (дуоденальное содержимое). Возможность
проведения дуоденального зондирования
определяет врач - клиницист. В отдельные
стерильные пробирки собирают порции. А, В, С
Моча. После обмывания наружных половых
органов и спускания первой порции
мочи собирают 20-30 мл. мочи в
стерильную баночку (флакон).
Доставленную в лабораторию
мочу перед посевом центрифугируют
и засевают осадок или используют
для посева нативную мочу.

Материал для лабораторного исследования
Гной, пунктаты органов, экссудат получают
с помощью стерильного шприца или зонд-тампона
Слизь из зева, носа, уха забирают с зонд-тампона.
Мокроту собирают натощак
после туалета рта.

Материал для лабораторного исследования
Спинномозговую жидкость получают
при люмбальной пункции в объеме
3-5 мл и помещают а стерильную
пробирку. При транспортировке
материала предохраняют его
от охлаждения.
Рвотные массы и промывные воды желудка берут для исследования в объеме до 100 ил.
Операционный материал (кусочки органов и тканей, извлекаемые при оперативных вмешательствах, содержимое удаленного червеобразного отростка, желчного и мочевого пузыря и др.) помещают в стерильные стеклянные баночки или пробирки, отдельные для каждого вида материала и доставляют в лабораторию.

Материал для лабораторного исследования
Секционный материал берут на месте вскрытия, соблюдая правила асептики. В лабораторию направляют участки кишок длиной 8-10 см., с целью получения, которых на кишечник накладывают двойные лигатуры и разрезают между ними. Кусочки тканей и органов вырезают из глубины стерильным скальпелем или ножницами после предварительного обжигания поверхности. Каждый образец органа, ткали и т.д. помещают раздельно в стерильную посуду.

Посев испражнений, доставленных без консерванта
Суспендирование в физиологическом растворе
в соотношении 1: 10 и посев 0,1 мл по методу секторных посевов некалиброванной петлей.
На жидкие обогатительные
среды
Суспендирование в среде в соотношении 1:5
Посев
Транспортировка
(не более 2 часов)
Взятие материала из судна
(испражнения, включая патологические примеси)

Посев испражнений, доставленных в консерванте
Посев 0,1 мл по методу секторных посевов некалиброванной петлей
Н а жидкие обогатительные
среды
Консервант смешивают со средой из расчета 1:5. Тампон погружают в среду.
Посев
Транспортировка
Взятие материала
из судна или ректальным тампоном
(петлей)
Суспендирование в консерванте

Испражнения, кровь, рвотные массы, желчь, дуоденальное содержимое, моча, секционный материал.
I Этап
Инкубация 18 – 24 часа

Среда Эндо (Мак Конки)
1) Дифференцирующие компоненты: ЛАКТОЗА
2) Индикатор: основной фуксин
3) Цвет колоний в зависимости от ферментации углеводов:
«+» красный с металлическим блеском, красный
«-» бесцветный

Цвет колоний в зависимости от ферментации углеводов:
«+» красный с металлическим блеском, красный
Среда Эндо (Мак Конки)
«-» бесцветный

Среда Левина
1) Дифференцирующие компоненты: ЛАКТОЗА и САХАРОЗА
2) Индикатор: метиленовый синий
3) Цвет колоний в зависимости от ферментации углеводов:
«+» темно-синий «-» бесцветный

Среда Плоскирева
1) Дифференцирующие компоненты: ЛАКТОЗА
2) Индикатор: нейтральный красный
3) Цвет колоний в зависимости от ферментации углеводов:
«+» красный, розовый «-» бесцветный

Среда Висмут-сульфитный агар
1) Дифференцирующие компоненты: ГЛЮКОЗА, СУЛЬФАТ ВИСМУТА
2) Индикатор: сульфат железа
3) Цвет колоний в зависимости от образования сероводорода:
«+» черный, зеленый «-» бесцветный

1) грамотрицательные
2) не образуют спор
3) каталазоположительные
4) оксидазоотрицательные
5) ферментируют глюкозу (O/F тест)
5) восстанавливают нитраты в нитриты
Микробиологические методы идентификации микробов семейства Enterobacteriaceae

Ход исследования: 3 этап
Микроскопия
Окраска по Граму
Гр- палочки расположенные хаотично

Ход исследования: 3 этап
Проведение теста. На предметное стекло наносят
исследуемую культуру. Затем наносят 3%
раствор перекиси водорода так, чтобы она
покрывала поверхность культуры тонким слом.
Появление пузырьков газа - в результате
расщепления перекиси водорода под
действием каталазы Отсутствие пузырьков
Проба на каталазу
Энтеробактерии каталазоположительные

Проба на цитохромоксидазу
При добавлении к культуре α-нафтола NN диметил-n-фенилендиамина с реактивом образуется индофенол и через 10-20 мин в пурпурно-красный цвет (полоски тест-«ОКСИ» синее окрашивание)
Энтеробактерии оксидазоотрицательные

Основан на выявлении разных путей расщепления глюкозы:
Окислительного - в присутствии О2 и ферментативного – в
анаэробных условиях.
Тест проводят на среде Хью-Лейфсона. Для посева используют 18-часовую агаровую культуру, которую в небольшом количестве вносят в среду методом укола в 2 пробирки. В одну наслаивают 3-5 мл стерильного вазелинового масла. Инкубируют в течении 3-4 дней при 37С. Учет результатов:
цвет среды изменился на желтый в пробирке с вазелином (анаэробные условия) O-/F+ - «ферментирующая» группа
цвет среды изменился на желтый в пробирке без вазелина (аэробные условия) O+/F- - «неферментирующая» группа
O/F тест (тест окисления/ферментации)

Рост псевдомонад (а, б) и эшерихий (в-е) на среде Хью-Лейфсона
В аэробных и анаэробных условиях К1 , К2- контроль
O/F тест (тест окисления/ферментации)

Восстановление нитратов до нитритов
Выявляют на среде МПБ и 0,2% раствор KNO3 среду разливают в пробирки, опускают «поплавки» и стерилизуют при 112 С 30 мин. В пробирки вносят 18-часовую культуру. Культивируют при 36С 24 часа.
Добавляют в отдельную пробирку:
- 1 каплю раствора (йодистый калий, ZnCL2 и крахмал),
- 1 каплю культуры,
- 1 каплю раствора HCL.
При наличии в среде нитритов
возникает синее окрашивание

Серотипирование возбудителя в посевах кала
РА на стекле, используют поливалентные
сыворотки
В РА берут по половине колоний, остаток колонии,
давшей агглютинацию сывороткой, отсевают на
среды дня выделения чистых культур.

II этап
Клиглера,
Олькеницкого
Отобранные для первичной
идентификации колонии отсевают на
среды: Олькеницкого,Клиглера. В начале
материал эмульгируют в
конденсационной жидкости, затем
засевают на скошенную поверхность
штрихом и делают прокол в
толщу агарового столбика, не достигая
дна пробирки. Посевы инкубируют
при 37С в течение 18-20 часов.
лактоза
глюкоза

Посев на комбинированные среды
При расщеплении сахаров (глюкозы и лактозы) образуется
кислота или кислота/газ, что улавливается индикаторами,
окрашивая среду в желтый цвет.
Почернение среды свидетельствует об образовании
Н2S

Посев на комбинированные среды

Выпускаются также сухие среды Рессела и сахарный агар с мочевиной Олькеницкого.
Среда Рессела является полужидким агаром с лактозой (1 %) и глюкозой (0,1 %) и индикатором ВР. После разливания его в пробирки их кладут так, чтобы образовался столбик агара и была скошена поверхность. Если бактерииферментируют лактозу и глюкозу, наблюдают изменение цвета (подкисление) всей среды на синей. Если микробы способны метаболизировать только глюкозу, в этом случае изменяет цвет столбик среды. При условии образования газа наблюдают за появлением его пузырьков или разрывами агара.

Трисахарный агар с мочевиной Олькеницкого – более сложная среда сравнительно с предыдущим. Он позволяет определить ферментацию лактозы, сахарозы, глюкозы, образования сероводорода и наличие у бактерий фермента уреазы. В состав среды соответственно вводят сухой питательный агар, лактозу, сахарозу, глюкозу, комплексную соль аммоний-железо сульфат, тиосульфат натри, мочевину, индикатор феноловый красен. Готовая среда имеет бледно-розовый цвет.

При расщеплении сахаров феноловый красный окрашивает среду в желтый цвет. Поскольку глюкоза, имеющаяся в небольших концентрациях (0,1 %), в аэробныхусловиях (скошенная поверхность) бактерии полностью будут утилизировать ее за первые часы роста. Через 18-24 год они потребляют и пептоны как белковую питательную основу. При этом образуется аммиак, который делает среду щелочной, предоставляя ей красного цвета. Однако в столбике агара желтый цвет остается, потому что там сохраняются кислые конечные продукты, которые обеспечивают низкий уровень рН.

Энтеробактерии, которые разлагают лактозу и глюкозу, подкисляют среду во всей пробирке (желтый цвет столбика и скошенной поверхности). Поскольку лактозы (1 %) в 10 раз больше, чем глюкозы, через 18-24 год инкубации ее запасы еще не исчерпаны, потому сохраняется желтый цвет среды. Однако через 48 год за счет расщепления пептонов можно наблюдать за его покраснением (сдвиг рН в щелочную сторону).
Если бактерии образуют газ (углекислый, водород) при ферментации сахаров, появляются разрывы среды или происходит скопление газа на дне, который поднимает агар в пробирке.

Сероводород микробы образуют из неорганических соединений, благодаря ферменту тиосульфатредуктазе. Взаимодействуют с сероводородом соли железа, которые, вступая с ним в реакцию, образуют сульфид железа в виде нерастворимого преципитата черного цвета в столбике.
Уреаза, которую продуцируют бактерии, разрушает мочевину с выделением большого количества аммиаку, под воздействием которого вся среда алеет. Потому при наличии уреазопозитивних штаммов провести учет ферментации цукрив невозможно. В таких случаях необходимо использовать другие среды.

III этап
Сероводород +/−
Глюкоза+/−
Лактоза +/−
БС
Гр −
Основные тесты
(таблица)

Как выбрать стрип API ?
Грам(-) кокки
Cat (+)
Грам(+) кокки
Грам(-) палочки
Грам(+) палочки
Cat (-)
Ox (+)
Ox(-)
Staphylococcus
Streptococcus
Неферменты
Enterobacteria
APIStrep
APIStaph
API 20 NE
API 20 E

Требования при работе с микротестами
В настоящее время выпускают микротесты для определения биохимических свойств выделенных бактерий.
1. Для работы отбирают изолированную колонию диаметром 2 мм.
2.Опускают ее в ИХН, далее петлей растирают на стенке пробирки для создания гомогенной эмульсии.
3. Этой же петлей изготовляют мазок.
4. Суспензию отсевают на СПА для проверки чистоты культуры и способности роста.
5. Определяют наличие ферментов каталазы и оксидазы.
Густота суспензий должна отвечать первой степени по шкале мутности McFarlanda(т. е. 3х10(8) бактерий./мл). Очень густой или жидкий инокулят может вести к ложным реакциям.
После внесения культуры пластинки накрывают пленкой, помещают в целлофановый пакет а ставят в термостат от (1 до 24 часов инкубации. Оценку полученных результатов производят по таблицам, приложенным к пластинам.

Как работает API-идентификация?
В лунки стрипа внесены субстраты:
ферментативная активность
утилизация углеводов
Изменение состава среды
Изменение цвета индикатора

ЭНТЕРОтест 24 (24 реакции за 24 часа)
Набор ЭНТЕРОтест 24 предназначен для биохимической идентификации
энтеробактерий - клинически значимых микроорганизмов семейства
Enterobacteriaceae без добавления реактивов в течение 24 часов после
инкубации.

ЭНТЕРОтест 24 (24 реакции за 24 часа)
Для подтверждения принадлежности выделенных изолятов к семейству
Enterobacteriaceae могут быть использованы полоски ОКСИ-тест и ОФ-тест
в микротитровальных планшетах. В набор Энтеротест 24 входят 40
отдельных стрипов, каждый из которых содержит 24 биохимических теста
для идентификации одного штамма.

Цвет положительных и отрицательных реакций на ЭНТЕРОтест 24