Тема: Метод Дригальского: этапы выделения чистой культуры и ее идентификации

Выделение чистой культуры бактерий – обязательный этап бактериологичекого исследования в лабораторной диагностике.
Метод Дригальского основан на механическом разобщении клеток.

Метод Дригальского
1-й этап. Рассев исследуемого материала по поверхности плотной питательной среды с целью получения изолированных колоний. Может включать предварительную микроскопию исследуемого материала

1-й этап.
Посевы «газоном» производят на плотную питательную среду в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлёй или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара по методу Дригальского.
Техника посева

2-й этап.
Макро- и микроскопическое изучение выросших колоний и отсев колонии, характерной для определенного вида на скошенный агар или чашку Петри со свежим агаром для получения чистой культуры.

По результатам посева серийных разведений исследуемого материала выбирают чашку Петри, удобную для подсчета колоний.
Подсчет колоний

Культуральные свойства бактерий
Колонии различаются по величине, форме, цвету, консистенции, контуру края, структуре и характеру поверхности:
по величине — крупные (диаметр более 4—5 мм), средние (2—4 мм) и малые (1—2 мм)
по форме — круглые, розеткообразные, листовидные и т. д.
по цвету, зависящему от пигмента — белого, ярко-синего, красного цветов и т. д.
по консистенции — сухие, влажные, сочные, слизистые
по поверхности — гладкие, морщинистые, исчерченные, плоские, выпуклые, плосковыпуклые, вдавленные
по краю — с ровными, волнистыми, бахромчатыми краями
по структуре — могут иметь аморфную, зернистую, волокнистую внутреннюю структуру
в чистой культуре, выращенной на скошенном питательном агаре, характер роста может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым, пигментированным

Культуральные свойства бактерий
(продолжение)
Streptomyces
Рост изолированных колоний
Klebsiella pneumoniae

S.аureus на кровяном агаре
Колонии Bacillus anthracis
«голова медузы»
Колонии возбудителя чумы Y.pestis
«кружевной платочек»
Культуральные свойства бактерий
(продолжение)

Культуральные свойства бактерий. Пигменты.
Рост чистой культуры Micrococcus roseus.
Рост чистой культуры S. aureus

Метод Дригальского 3-й этап.
Задача 3 этапа – идентификация- определение вида – выделенной чистой культуры по комплексу биологических свойств:
Морфологических
Тинкториальных
Культуральных
Биохимических
Антигенных
Токсигенных
Чувствительности к антибиотикам и др. лекарственным препаратам
Чувствительности к типовым диагностическим фагам

Метод Дригальского 3-й этап. Изучение ферментативной активности.
Биохимическая идентификация выделенной чистой культуры заключается в определении спектра ее ферментативной активности

Пример определения ферментативной активности на тест-системах api
Тест-система с сухими дифференциально-диагностическими средами заполняется суспензией из чистой культуры бактерий и инкубируется в термостате

Вид системы для энтеробактерий после инкубации. Верхний планшет – все тесты положительны, нижний – все отрицательны.
Вид системы для энтеробактерий после инкубации. Верхний планшет – все тесты положительны, нижний – все отрицательны.
Вид системы для стафилококков после инкубации. Верхний планшет – все тесты положительны, нижний – все отрицательны.