ЗАО «ЭКОлаб» лабораторная диагностика сифилиса

Динамика заболеваемости сифилисом в Российской Федерации (1992-2009 гг.)
[на 100 тыс.населения]

Динамика заболеваемости сифилисом по федеральным округам РФ (2005-2009 гг.) [на 100 тыс. населения]

Заболеваемость сифилисом в странах Европы [на 100 000 населения] 2008 г. <= 80
<= 64
<= 48
<= 32
<= 16
No data
Min = 0
Source: WHO/Europe, European HFA Database, July 2010
European Region
16.2
Russian Federation
59.9

Перераспределение в структуре скрытого сифилиса с возрастанием
эпидемически опасных ранних форм инфекции
Рост осложнений: мертворождения, врождённый сифилис, нейросифилис, третичный сифилис, серорезистентность
Оседание в стационарах соматического профиля до 30-32% от всех зарегистрированных случаев

Серологические исследования являются в настоящее время основным элементом клинической лабораторной диагностики сифилиса.
Они решают три задачи:
скрининг на сифилис;
диагностика сифилиса при наличии подозрений на него;
контроль эффективности лечения диагностированного сифилиса

Методы диагностики сифилиса
8
Окончательный диагноз
Предварительный диагноз

ПЦР-исследование наT.pallidum
Все ПЦР – тесты собственного производства перед использованием должны быть апробированы путем тестирования:
не менее 10 образцов от больных сифилисом, положительных в методе ТПМ (образец) с положительными серореакциями (кровь)
не менее 10 образцов от пациентов, у которых в методе ТПМ (образец)и при серологическом исследовании (кровь) получен отрицательный результат
В настоящее время ПЦР для диагностики сифилиса имеет исследовательский статус

Нетрепонемные тесты
Сифилис VDRL –тест
(Veneral Disease Research Laboratory)
Рекомендован к применению ВОЗ
Микрофлокуляционный тест на основе кардиолипинового антигена
Применение микроскопа с Х100 позволяет рассмотреть микрокомплексы АГ-АТ
Исследование образцов cмж редко даёт ложноположительный результат в отличие от исследования инактивированной сыворотки
Традиционный диагностический тест для постановки диагноза нейросифилиса
Мониторинг эффективности лечения

РИФ – реакция иммунофлуоресценции
(FTA Fluorescent treponemal antibody)
набор реагентов для определения антител к антигенам T.pallidum
Сифилис-IgG-РИФ и Сифилис-IgM-РИФ

Рекомендации по применению отдельных ТТ
РИФ (в особенности РИФабс ) считается наиболее чувствительным тестом на сифилис и принята в качестве «золотого стандарта» среди ТТ.
Чувствительность при первичном сифилисе - 70-100%, при вторичном и позднем - 96-100%, специфичность – 94-100%
Показания к применению: «золотой стандарт»
подтверждающего теста на сифилис
Ограничения применения:
не может использоваться при скрининге ввиду трудоемкости ручной методики исследования, необходимости использования флуоресцентного микроскопа, субъективности оценки результатов теста

Трепонемные тесты
ИФА-Антипаллидум-скрин
ИФА-Антипаллидум-одностадийный
ИФА-Антипаллидум-IgG
(Аналитическая чувствительность методов–0,01- 0,02 МЕ/мл)
ИФА-Антипаллидум-IgM
Сифилис РПГА-тест
(Аналитическая чувствительность метода –0,05МЕ/мл)
Все системы контролируются международным стандартом ВОЗ(NIBS, London, UK) для выпуска с одинаковой аналитической чувствительностью всех серий

ТТ не могут быть использованы для контроля эффективности проведенной специфической терапии, так как антитрепонемные антитела могут длительно циркулировать в организме больного, перенесшего сифилитическую инфекцию
Дают положительные результаты при тропических трепонематозах (фрамбезия - вызывается T.pertenue и пинта - вызывается T.carateum)
Могут давать ложные положительные реакции у больных с аутоиммунными заболеваниями, проказой, онкологической и эндокринной патологией, а также и при некоторых других заболеваниях и состояниях
Ограничения применения ТТ

Лайн-Блот Сифилис
Вариант иммуноферментного анализа в формате линейного блота для регистрации антител к наиболее иммуногенным детерминантам

Расположение антигенов в
Лайн Блот Сифилис
Контроли
Антигены
TpN47
TpN17
TpN15
TmpA
3+ 1+ ±
Контроль А/г

Принцип технологии иммуноблоттинга
Иммобилизация на нитроцеллюлозную мембрану рекомбинантных белков - аналогов антигенов Treponema pallidum p17, p 47, p 41, p15
Проведение иммуноферментного анализа для
одновременного дифференцированного выявления антител к каждому из нанесённых на мембрану антигенов
Антитела к белкам T. pallidum в разной степени
регистрируются на всех стадиях инфекции
Выявлена зависимость появления антител к различным белкам на разных стадиях инфекции

Оценка интенсивности антителообразования к белкам T.pallidum у больных сифилисом
Условные ед. «+»

Интенсивность антителообразования к белкам T.pallidum у пациентов после перенесенного сифилиса
стадия заболевания
Условные ед. «+»

Реактивность сыворотки оценивают по каждому антигену отдельно, путём сравнения интенсивности окрашивания полученных полос с окрашиванием трёх калибровочных линий
Отслеживание белкового профиля помогает при уточнении стадии инфекции и в оценке эффективности
проведённого лечения

Частота выявления антител к основным иммунореактивным белкам Tr.Pallidum
TpN15 – 67,5%
TpN17 – 98,5%
TmpA – 95,0%
TpN47 – 92,5%
За счет высокой степени очистки рекомбинантных антигенов и одновременного выявления антител к наиболее иммуногенным детерминантам возбудителя сифилиса метод обладает высокой чувствительностью ( 99,6-100%) и специфичностью (100%), что позволяет рассматривать его как новый подтверждающий тест на сифилис.

Применение метода иммуноблоттинга целесообразно:
Для ранней диагностики сифилиса. В возможном инкубационном периоде и при первичном сифилисе
Для подтверждения диагноза скрытого раннего сифилиса ( при противоречивых результатах традиционных серологических методов)
При необходимости проведения дифференциальной диагностики с л/положительными результатами серологических реакций на сифилис, особенно, при аутоиммунных заболеваниях: ревматизме,СКВ
В сложных диагностических ситуациях, как референс-метод.
При оценке результатов лечения
При необходимости установления ретроспективного диагноза.
21

Основные характеристики :
Общее время постановки - 2ч 45 мин
Необходимый объем сыворотки (плазмы) или ликвора – 20 мкл.
Срок годности набора – 12 месяцев.
Число определений, включая контрольные образцы –24
Специфичность и чувствительность при оценке на сыворотках панелей МБС – 100 %.
Преимущества:
Действует принцип: «Один пациент – одна тест-полоска – один результат»
Возможность тестирования образцов ликвора
Все компоненты тест-системы - окрашенные жидкие реагенты -готовы к использованию и не требуют дополнительного разведения
Возможность проведения реакции ИБ c использованием анализаторов.

Автоматическая станция ProfiBlot 48 для исследования в иммуноблоттинге

Основные направления развития диагностики сифилиса
Автоматизация и объективизация выполнения исследований
(роботизированные
станции, фотометры)