Скрининг перспективных пробиотических штаммов бактерий Bacillus spp., выделенных из микробиоты здоровых кур

Пробиотики – биологически активные пищевые добавки, содержащие живые микроорганизмы, обладающие полезными для организма свойствами
Микробиота – совокупность всех микроорганизмов, населяющих тот или иной эпитоп организма хозяина

Поиск перспективных пробиотических штаммов Bacillus spp.
Цель работы
Задачи
Выделение потенциальных пробиотических бацилл из микробиоты птиц;
Определение свойств выделенных штаммов и оценка их потенциальной пробиотической активности;
Формирование пула перспективных пробиотических штаммов бацилл.

ОАО «Птицефабрика Белокалитвинская», п.Сосны Белокалитвинского р-на РО (БК)
ЗАО «Птицефабрика Гуляй-Борисовская», х.Гуляй-Борисовка Зерноградского р-на РО (ГБ)
ООО «Шахтинская инкубаторно-птицеводческая станция», г.Шахты, РО
Птицефабрика «Донецкий бройлер» (ИП Строителев О.Н.), г.Донецк, РО
Учхоз ДГТУ, РО
Частное подсобное хозяйство, п.Персиановский Октябрьского р-на РО (П)
Частное подсобное хозяйство, с.Раздольное, Краснодарский край (Раз)
Частное подсобное хозяйство, г.Ростов-на-Дону (РнД)
Места отбора проб

Несушки клеточного содержания, кросс Хайсекс Браун, корм: стандартная кормосмесь;
Несушки клеточного содержания, кросс Хайсекс Браун, корм: стандартная кормосмесь;
Бройлеры клеточного содержания, кросс Кобб, корм: полнорационный комбикорм;
Бройлеры напольного содержания, кросс Кобб, корм: полнорационный комбикорм;
Несушки свободновыгульного содержания, кросс Хайсекс Браун, корм: комбикорм ПК-1-2;
Несушки свободновыгульного содержания, кросс Хайсекс Браун, корм: комбикорм «Мегамикс» с добавками в виде овощей до 10% рациона;
Несушки свободновыгульного содержания, порода полосато-пестрый Леггорн, корм: полнорационный комбикорм с добавками в виде овощей до 20% рациона.
Исследованные птицы

Для исследования от 5-6 здоровых кур в стерильные пластиковые контейнеры отбирался свежий помёт в количестве 30-40 грамм. Пробы охлаждались до температуры +4°С и в течение суток доставлялись в лабораторию.
Отбор проб

Каждая проба тщательно стерильно перемешивалась и помещалась в холодильник на 48 ч при +4°С для образования спор.
Для выделения бактерий рода Bacillus spp. навески после инкубации разводили физиологическим раствором из расчёта 1:10 и прогревали на водяной бане при 93-95°С в течение 3 минут для удаления вегетативных форм бацилл.
После охлаждения взвеси делали ряд последовательных разведений и высевали поверхностно на МПА.
Посевы инкубировали 24 ч при температуре 42°С, после чего проводили учёт.
Этапы бактериологического исследования

Метод скрининга на протекторную активность: биосенсорный тест
Рекомбинантные штаммы E. coli:
MG1655 pRecA-lux - реагирует на разрывы ДНК (индикатор генотоксичности);
MG1655 pKatG-lux – реагирует на внутриклеточную генерацию перекиси водорода.

Принцип теста
Индукция
Lk – свечение в контроле
Le – свечение в опыте
Протекторная активность
Ia - индукция
Ip - индукция в присутствии протектора

Количество бактерий Bacillus spp., выделенных у кур, содержавшихся в разных условиях, КОЕ/г, log:

Отобранные штаммы Bacillus spp. и их источники:

Протекторная активность Bacillus spp. КВ53

ДНК-протекторная активность

Антиоксидантная активность

Активность штаммов Bacillus spp. из микробиоты кур
разных условий содержания

Отобран ряд перспективных штаммов, обладающих антиоксидантной и ДНК-протекторной активностями, которые можно использовать для создания пробиотических биопрепаратов;
В микробиоте кур клеточного содержания присутствует больше бактерий-продуцентов антимутагенных соединений.
Выводы