Абсорбционная спектроскопия (поглощение света веществом)

Параметры электромагнитных излучений
λ [нм]
ν [Гц, c-1]
ν [см-1]
Е [Дж, кал]
Дж*с

Шкала электромагнитных излучений, используемая
для исследований в области биологии
γ – спектроскопия
Рентгеновская спектроскопия
Оптическая спектроскопия:
УФ-спектроскопия (электронные переходы)
Спектроскопия видимого диапазона (электронные переходы)
ИК-спектроскопия (колебательные и вращательные перходы)
4) Радиочастотная спектроскопия:
ЯМР
ЭПР

Шкала электромагнитных излучений, используемая
для исследований в области биологии

Поглощение света. Закон Бугера–Ламберта – Бера
J0
J
l
K, ε – коэффициенты поглощения и молярного поглощения,
сМ – концентрация вещества
-коэффициент пропускания
- оптическая плотность

Группы, поглощающие свет в оптическом диапазоне
ароматические группы
сопряженные двойные связи
неподеленные пары электронов
Хромофоры – химические группы, отвечающие за поглощение света веществом

А
СПЕКТР ПОГЛОЩЕНИЯ
А

Спектры поглощения биомолекул

Улучшение разрешения максимумов при снижении температуры

Улучшение разрешения максимумов при математической обработке спектров

Определение концентрации бактерий путем измерения оптической плотности
Одно из основных применений УФ-спектроскопии на сегодняшний день – измерение концентрации биополимеров.
Для этого используется закон Бугера-Ламберта-Бера:
как правило коэффициенты экстинкции известны.

Схематическое устройство спектрофотометра

На спектры биополимеров влияет их локальное окружение, например, изменение конформации биополимера, изменение среды в которую они помещены (pH, полярность растворителя и т.д.), взаимодействие с другими хромофорами.
Данные факторы необходимо учитывать при анализе спектров биополимеров.

Денатурация белка

Денатурация ДНК

Окисление гемоглобина
На спектры биополимеров влияет их локальное окружение, например, изменение конформации биополимера, изменение среды в которую они помещены (pH, полярность растворителя и т.д.), взаимодействие с другими хромофорами.
Данные факторы необходимо учитывать при анализе спектров биополимеров.

Спектры поглощения аминокислот

Спектры поглощения аминокислот