ИФА-методы: спектр исследований, преаналитика, особенности выполнения

Метод ИФА является иммунодиагностическим методом, с помощью которого проводят качественное и количественное определение различных веществ, обладающих свойствами антигена, гаптена (неполноценного антигена) или антитела.
Метод ИФА широко используется для диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний человека и животных и может также применяться для подтверждения качества иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП).
Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

Три основных этапа ИФА
1. Образование иммунного комплекса «антиген-антитело» или наоборот.
2. Формирование связи конъюгата с образовавшимся на предыдущем этапе иммунным комплексом.
3. Преобразование субстрата под действием ферментной метки в регистрируемый сигнал в результате биохимической реакции.

• массовая диагностика инфекционных заболеваний (выявление различных специфических антигенов или антител к ним);
• выявление и определение уровня гормонов и лекарственных препаратов в биологических образцах;
• определение изотипов (IgG, IgM и другие) антител против конкретного антигена;
• выявление иммунных комплексов;
• выявление онкомаркеров;
• определение белков сыворотки крови (ферритин, фибронектин и др.);
• определение общего IgE и специфических IgE антител;
• скрининг моноклональных антител;
• определение цитокинов в биологических жидкостях.
Практическое применение ИФА

Оценка гормонального статуса;
Диагностика инфекционных заболеваний;
Аллергодиагностика;
Гастропанель;
Оценка иммунного ответа, как показателя эффективности вакцинации (корь, ВКЭ);
Скрининговые исследования на содержание наркотических веществ в моче.
Спектр исследований, выполняемых методом ИФА в
АО «СЗЦДМ»

Антитела – это особые вещества, способные прикрепиться к инфекционному агенту и нейтрализовать его.
Иммуноглобулины М (IgM) – «ранние» антитела, достаточно громоздкие (не могут проходить через плаценту), не очень специфичные, но они уже могут нейтрализовать существенную часть возбудителей.
Иммуноглобулины G (IgG) – антитела, которые начинают продуцироваться, в среднем, через 10-14 дней от начала инфекционного процесса, проходят через плаценту, специфичны. Их уровень может поддерживаться в крови годами. Их выработка – цель любой вакцинации.
Что такое неопределенный (сомнительный) результат?

Что такое неопределенный (сомнительный) результат?
В крови человека можно выявить очень небольшое количество антител, которые потенциально могут подойти для борьбы практически с любой инфекцией, и, соответственно, реагируют с используемой в лаборатории тест-системой.
Поэтому, когда лаборатория определяет антитела к какому-либо возбудителю, обычно результат выглядит так:

Причины неопределенного результата при первичном исследовании антител:
У человека есть инфекционный процесс, но антител к моменту анализа выработалось еще мало;
Этот уровень антител – индивидуальная норма для человека при отсутствии инфекции;
Влияние на исследование неспецифических факторов (например, ОРВИ или обострение герпеса). При любом остром заболевании в крови повышается количество белков острой фазы, часть из них может вступать в реакцию с тест-системой.
Что такое неопределенный (сомнительный) результат?

Сомнительный результат – это не сомнения лаборатории, а отражение определенного этапа работы иммунной системы.

T-SPOT – тест для in vitro диагностики туберкулеза путем выявления эффекторных Т клеток, реагирующих на стимуляцию антигеном Mycobacterium tuberculosis, предназначенным в качестве дополнительного средства диагностики туберкулезной инфекции.
T-SPOT TB

Схема, иллюстрирующая основные этапы анализа с использованием T-SROT. TB.

Забор крови и подготовка образцов.
Образцы крови забирают в вакутейнер с гепарином Na или гепарином Li.

Взрослые и дети в возрасте 10 лет и старше: одна пробирка 8 мл или две пробирки по 4мл;
Дети в возрасте 2 – 9 лет: одна пробирка 4 мл;
Дети в возрасте до 2 лет: одна пробирка 2 мл;
Сразу после взятия крови необходимо перевернуть пробирку 3 – 4 раза без пенообразования и встряхивания для того, чтобы кровь равномерно перемешалась с антикоагулянтом.
Хранение и транспортирование образцов крови в лабораторию производится при температуре от 18 до 25 0С. Образцы цельной крови нельзя ни охлаждать, ни замораживать.
Длительность хранения крови от момента забора до доставки в лабораторию не может быть более 30 часов.
Забор крови и подготовка образцов.

Положительный результат: в образце крови 8 и более эффекторных Т-клеток, специфически сенсибилизированных к M.tuberculosis.
Отрицательный результат: в образце крови эффекторные Т-клетки, специфически сенсибилизированные к M.tuberculosis, отсутствуют, либо их количество менее или равно 4.
Сомнительный результат: образец крови содержит эффекторные Т-клетки, специфически сенсибилизированные к M.tuberculosis, в количестве от 5 до 7. Рекомендовано повторить исследование через 1 – 2 месяца.
Неопределенный результат:
В нулевом контроле >10 спотов;
В положительном контроле <20 спотов.
Рекомендовано повторить исследование через 2 – 4 недели.
результат
Интерпретация результатов.