Отбор патологического материала для диагностики бешенства

Отбор патологического материала
Наблюдение за животными -10 дней (заграницей 14-15 дней)
При необходимости убоя – выстрел в сердце
Нельзя стрелять в голову и использовать яд!

Патологический материал
Головной мозг
Кровь
Нижняя челюсть
(слюна, слюнные железы)

Патологический материал
Головной мозг – диагностика бешенства, изучение молекулярно-биологических свойств вируса бешенства
Кровь – оценка эффективности антирабической иммунизации
Нижняя челюсть – оценка поедаемости оральных антирабических вакцин

Отбор патологического материала

Инструменты, защитная одежда, материалы
http://uvex-safety.ru

Отбор проб головного мозга

Вскрытие черепной коробки
Череп животного семейства собачьих (вид сверху)
2 – продольный распил от лобной кости (по наружному сагиттальному гребню) до большого затылочного отверстия, глубина 0,3-0,5 см;
3 – поперечный распил за глазницами на глубину 0,5-1,5 см.

Вскрытие черепной коробки
Косой распил (4) проходит через теменную, височную кости и мыщелок, соединяя край поперечного распила (3) и большое затылочное отверстие и может в ряде случаев заменять продольный распил

Продольный распил

Поперечный распил

Удаление костей черепа

Удаление костей черепа

Извлечение головного мозга

Извлеченный мозг

Усовершенствованный способ отбора проб головного мозга
Существующие нормы РФ:
Вскрытие черепной коробки, извлечение головного мозга целиком, исследование препаратов из продолговатого мозга мозжечка, аммонова рога, коры больших полушарий.
Международные нормы:
Вскрытие черепной коробки целиком (при наличие условий и опытного персонала), а также отбор проб через затылочное отверстие или ретроорбитальным способом.

Усовершенствованный способ отбора проб головного мозга (отбор через затылочное отверстие)

ОТБОР ПРОБ ГОЛОВНОГО МОЗГА С ПОМОЩЬЮ ТРОАКАРА РЕТРООРБИТАЛЬНЫМ СПОСОБОМ
Работу проводит один специалист. Голову животного кладут на эмалированную кювету. При поступлении трупа целиком голову можно не отделять.
Троакар вместе с гильзой вводят в глазное отверстие, отодвинув глазное яблоко вниз или в сторону. Вращая троакар и применяя умеренное усилие, делают прокол дна глазницы. В прокол вводят гильзу троакара в направлении затылочного отверстия, затем закрывают отверстие гильзы резиновой пробкой или пальцем, извлекают гильзу и с помощью стилета троакара выталкивают патологический материал.
Полученную пробу головного мозга помещают в стерильную стеклянную или пластиковую тару, которую герметично закрывают. Пробу подвергают заморозке при -200С

Консервирование патматериала (головной мозг)
Существующие нормы РФ:
Пересылка в замороженном, консервированном в 50% глицерине виде.
Международные нормы:
Пересылка по возможности в замороженном виде, в случае невозможности этого – в охлажденном виде в 50% глицерине, в крайнем случае допускается консервирование 10% формалином (современные методы РИФ, ИФА, ПЦР, иммуногистохимия, позволяют проводить исследование такого материала).

Отбор проб крови
Аппаратура, материалы и реактивы
Перчатки резиновые анатомические;
Нож ампутационный;
Капроновые или шелковые нитки для наложения лигатур на сосуды сердца;
Одноразовые шприцы объемом 5 мл;
Флаконы пластмассовые на 10 мл с крышками;
Сумка-холодильник или её аналоги;
Условия хранения крови, сыворотки крови, трупной жидкости в лаборатории – минус 20оС

Наложение лигатур на сосуды сердца

Отбор проб крови у диких животных

Отбор проб крови у домашних животных
Отбирают кровь в объеме 2 мл
Выдерживают кровь при 37оС в течение 0,5 часа
Осторожно обводят сгусток спицей по стенке и помещают в холодильник при 4-8оС минимум на 0,5 часа
Отделившуюся сыворотку центрифугируют в течение 15 минут при 3000 об/мин (при необходимости центрифугирование можно повторить)
При хранении сыворотки крови более 24 часов ее замораживают

Отбор проб крови у домашних животных
Требование к сыворотке крови:
- объем 1 мл
- отсутствие гемолиза или легкая степень гемолиза (розоватый цвет)
- отсутствие признаков гниения, бактериальной или грибковой контаминации
Информация на сайте ФГБУ «ВНИИЗЖ» по адресу:
http://www.arriah.ru/production/detection_of_antibodies/

Отделение ветви нижней челюсти с зубами
Для оценки поедаемости брикетов оральной
вакцины методом выявления флуоресценции тетрациклина в зубной ткани.

Отделение нижней челюсти

Отбор проб костной ткани

Правила транспортировки патологического материала для исследований на бешенство
Пробы помещают в герметичную стеклянную или пластиковую тару, которую, в свою очередь, помещают в металлический контейнер. В контейнер помещают сопроводительное письмо и опись проб, заверенные руководителем учреждения, направляющего материал для проведения исследований. Контейнер помещают в термоконтейнер с хладагентами или с системой принудительного охлаждения, опечатывают и направляют для проведения исследований.

Опись пробы

Опись пробы (продолжение)

Опись пробы (продолжение)

Меры безопасности
Факторы риска:
1. Травмирование кожных покровов:
острые костные обломки
режущие, колющие инструменты
2. Попадание твердых и жидких элементов (брызги, аэрозоль) патологического материала в глаза, на слизистые оболочки.

Меры безопасности
Меры предупреждения инфицирования:
Обязательная профилактическая вакцинация
Проведение процедуры вскрытия и отбора патологического материала 2-мя специалистами
Использование специальной одежды (халат, чепчик, прорезиненный фартук, нарукавники)
Использование индивидуальных средств защиты ( очки, защитная маска на лицо, ватно-марлевая повязка, перчатки, устойчивые к факторам механического повреждения)

Меры безопасности
Дезинфицирующие вещества:
четвертичный аммоний в концентрации 1:500
45-70% этиловый спирт l % мыльный раствор (горячий раствор мыла, детергента, стирального порошка может использоваться для мытья поверхностей, полов)
5-7% йодный раствор
Указанные растворы убивают вирус бешенства в течение 1 минуты и могут применяться для обработки ран.

Меры безопасности
Утилизация потенциально-опасных материалов:
Стеклянная и пластиковая посуда, инструменты – замачивание в растворе дезинфицирующего вещества (1% мыльная вода) с последующим кипячением или автоклавированием
Использованный дезинфицирующий раствор – кипячение, автоклавирование
Трупы и ткани животных – предпочтительно помещение в полиэтиленовые мешки и кремирование

Меры безопасности
Обработка ран
Все раны немедленно и тщательно промыть мылом и водой в течение нескольких минут
Колотые раны обработать дезинфицирующим веществом
Как можно быстрее обратиться в медицинское учреждение за антирабической помощью