Fish - флуоресцентная in situ гибридизация

FISH – это цитогенетический метод.
Цитогенетический метод – это изучение генетической конституции клеток человека с помощью визуализации и анализа хромосом.

Гибридизация in situ – метод прямого выявления нуклеиновых кислот в клеточных структурах в условиях, позволяющих одновременно исследовать их морфологию.
Видны изменения в хромосомах не в пробирке, а непосредственно на гистологическом срезе.
По методу выявления:
Флуоресцентная
Хромогенная

Применение

Принцип FISH-метода
В основе FISH-метода лежит реакция гибридизации между искусственно созданным ДНК-зондом и комплементарной ему нуклеотидной последовательностью ядерной ДНК.
Молекула ДНК представляет собой две спирально соединенные нуклеотидные цепи, а гибридизация возможна только в том случае, если цепи разойдутся. Чтобы разъединить нуклеотидные цепи ДНК прибегают к денатурации. После денатурации ДНК-зонд гибридизируется с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа.

ДНК-пробы представляют собой специально синтезированные фрагменты ДНК, последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом.

Интерпретация результатов
В ходе процесса гибридизации при наличии в исследуемом образце аберрантных хромосом происходит их связывание с ДНК-пробой, которое при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как флуоресцентный сигнал (положительный результат FISH-теста).
При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-пробы в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста).

Преимущества FISH
Эффективность, быстрота и относительная простота метода относительная простота метода FISH делают его полезным инструментом для
диагностики хромосомных аномалий как в
постнатальном , так и в пренатальном периоде, включая предимплантационный.

Недостатки
Зонды являются специфичными только к одному участку генома и, как следствие, при одном исследовании можно определить наличие или число копий только этого участка (или нескольких при использовании многоцветных зондов). Поэтому важным является правильная клинически предпосылка, а FISH анализ может только подтвердить или не подтвердить диагноз.

Типы проб для FISH
Центромерные
Теломерные
Пробы на всю хромосому
Локус‐специфические

Примеры положительных результатов

Хромосомные перестройки у супружеских пар с
бесплодием
Транслокации – наиболее частые структурные хромосомные перестройки, определяемые у супружеских пар с бесплодием, поскольку фенотипически не проявляются у носителей.
В мейозе I дериватные хромосомы и их нормальные гомологи могут среагировать с образованием несбалансированных гамет

Последствия:
•Бесплодие
•Невынашивание •Мертворождение или ранняя детская
смертность
•Рождение детей с Рождение детей с хромосомными аномалиями

Клинический пример
Пациент 1970 г.р.
Олигоастенотератозооспермия
У супружеской пары одно спонтанное прерывание беременности в 12 нед.

Система описания хромосом
– Короткое плечо хромосом обозначают латинской буквой р, длинное – q.
– Каждое плечо хромосомы разделяют на районы, нумеруемые от центромеры к теломере.
Если локализация гена точно известна, для ее обозначения используют индекс полосы. Например, обозначается 13р14 – четвертый сегмент первого района короткого плеча хромосомы 13

45,ХУ,der(5;15)

кариотипирование с использованием метода FISH
45,ХУ,der(5;15)t(q35.3; q10)

Использование метода FISH для исследования
уровня анеуплоидий сперматозоидов.