Иммуноферментный анализ (ИФА). Правила интерпретации

Определение.
Иммуноферментный анализ (ИФА) – универсальный чувствительный иммунобиологический метод анализа, с помощью которого проводят качественное и количественное определение различных веществ, обладающих свойствами антигена, гаптена (неполноценного антигена) или антитела.
Проект Министерства здравоохранения Российской Федерации. Общая фармокопейная статья. «Метод иммуноферментного анализа»

Сущность метода заключается в реакции специфического взаимодействия антиген – антитело и последующей детекции полученного комплекса с использованием таких методов, как спектрофотометрия, хемилюминесценция и др.
Детекция полученного комплекса возможна благодаря мечению антител или антигенов ферментами. [1]
Наиболее широко используется пероксидаза хрена и щелочная фосфатаза, применяют также b-галактозидазу и b-лактамазы. [2]
Проект Министерства здравоохранения Российской Федерации. Общая фармокопейная статья. «Метод иммуноферментного анализа»
«Лабораторная диагностика вирусных инфекций» Н.Н. Носик, В.М. Стаханова. Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва. 2000 г. Взято с сайта http://www.antibiotic.ru/

Применение метода.
1) Поиск специфических антител к любому инфекционному заболеванию;
2) поиск антигенов каких-либо заболеваний (инфекционных, венерологических);
3) исследование гормонального статуса пациента;
4) обследование на онкомаркеры;
5) обследование на предмет наличия аутоиммунных заболеваний 6) для подтверждения качества иммунобиологических лекарственных препаратов [1] 7) оценка клинического течения болезни и эффективности химиотерапии [2]
1.http://www.medicalj.ru/diacrisis/d-immunology/1025-ifa
2. «Лабораторная диагностика вирусных инфекций» Н.Н. Носик, В.М. Стаханова. Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва. 2000 г. Взято с сайта http://www.antibiotic.ru/

Классификация
Прямой (когда исследуемое вещество само обладает ферментативной активностью, либо помечено ферментативной меткой)
Косвенный (гетерогенный твердофазный) (когда исследуемое вещество, связавшееся с иммобилизованными на твердой фазе антителами, инкубируется с антителами, мечеными ферментативной меткой)
Проект Министерства здравоохранения Российской Федерации. Общая фармокопейная статья. «Метод иммуноферментного анализа»

Стадии метода
1) образование иммунного комплекса исследуемое вещество (антиген) - специфическое к нему антитело (или наоборот);
2) стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания;
3) стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал.
Проект Министерства здравоохранения Российской Федерации. Общая фармокопейная статья. «Метод иммуноферментного анализа»

Методика оценки результатов
Качественный анализ позволяет получить положительный или отрицательный результат содержания антигена или антитела в исследуемом веществе.
Количественный - содержание того или иного антигена или антитела в исследуемом веществе с использованием калибровочного графика.
Проект Министерства здравоохранения Российской Федерации. Общая фармокопейная статья. «Метод иммуноферментного анализа»

ГБОУ ВПО «РГМУ» Учебное пособие. «Иммуноферментный анализ»