Исследование эякулята

Микроскопическое исследование.
Эякулят помещают в термостат при температуре 37 С (при пониженной температуре сперматозоиды замирают).

Микроскопическое исследование.
Микроскопируют после разжижения не позднее, чем через 1 час после эякуляции. Перемешанную сперму наносят на чистое, сухое, подогретое до 20-30ºС предметное стекло и накрывают покровным. Нативные препараты смотрят при объективе 40, окуляре 10, полуопущен конденсор. Описывают клеточные и неклеточные элементы. Определяют кинезисграмму.

Микроскопическое
исследование.
Сперматозоиды - длинные клетки (58-66 мкм) со жгутиками.
В них различают головку, шейку и хвост. Головка грушевидной формы с заостренным передним концом. Большая часть головки занята ядром, вокруг тонкая полоска цитоплазмы. Шейка — наиболее тонкая часть сперматозоида. Хвост тонкий, длиной 50-60 мкм. При отсутствии сперматозоидов в нативных препаратах сперму центрифугируют при 3-4 тыс. об/мин. 5-10 мин, из осадка готовят нативные препараты, затем их окрашивают и исследуют сперматограмму.

Микроскопическое исследование.
При различных заболеваниях половых органов (простатит и др.) может наблюдаться агглютинация (склеивание) сперматозоидов (+), при склеивании половины сперматозоидов только головками (++), половины сперматозоидов и головками и хвостами (+++), всех или почти всех сперматозоидов (++++).

Микроскопическое исследование.
Поддерживающие клетки извитых семенных канальцев (клетки Сертоли) –
Крупные вытянутой грушевидной формы (20-40) со светлым угловатой формы ядром. В цитоплазме много трофических включений (капли жира и липидов, кристаллы белков). Встречаются в эякуляте в 5% случаев.

ЭРИТРОЦИТЫ –
в норме отсутствуют или 1-2 в препарате. При ранениях воспалениях – гемоспермия.

ЛЕЙКОЦИТЫ (L) –
В норме единичные. Количество их повышается при гонорее, туберкулезе. Большое количество лейкоцитов - плеоспермия, необходимы окраска по Граму, бактериологическое исследование (посев на микрофлору, чувствительность к антибиотикам).

КЛЕТКИ ЭПИТЕЛИЯ –
В норме - в небольшом количестве цилиндрический эпителий мочеиспускательного канала и единичные клетки протока придатка яичка, они полигональной формы 18-42 мкм, ядра круглые, гиперхромные. При неспецифическом уретрите - в сперме многослойный плоский неороговевающий эпителий.

ГИГАНТСКИЕ КЛЕТКИ –
диаметром 16-22 мкм. 2-12 ядер. Это клетки хронического воспаления.

СПЕРМАТОФАГИ –
круглые большие клетки диаметром 20-36 мкм со светлой вакуолизированной цитоплазмой, 1 или несколько ядер.
В цитоплазме - головки фагоцитированных сперматозоидов. Сперматофаги появляются при застое спермы (половое воздержание, облитерация семявыносящего протока из-за воспаления).

ЗЕРНА ЛИПИДОВ – (лецитиновые зерна)
мелкие белесоватые образования округлой формы. В норме в большом количестве. При воспалении предстательной железы снижены.

КРИСТАЛЛЫ БЕТТХЕРА –
бесцветные, удлиненные, раствором Люголя окрашиваются в синий цвет. Являются продуктами кристаллизации спермина-секрета предстательной железы. Чем больше гипоспермия, тем больше этих кристаллов. Причина – простатит.
Нативный
препарат

АМИЛОИДНЫЕ ТЕЛЬЦА (конкременты) –
овальной или округлой формы с концентрической исчерченностью. Центральная часть мелкозернистая, желтая. Иногда тельца сливаются по 2-3 вместе. Обнаруживаются при застое спермы (аденома, гипертрофия предстательной железы, ее воспаление).

СЛИЗЬ –
В норме отсутствует. При простатите и везикулите – большое количество густой липкой слизи, обволакивающей сперматозоиды, что затрудняет их подвижность.

Определение количественных и качественных особенностей сперматозоидов.
Определение подвижности сперматозоидов.
КИНЕЗИСГРАММА –
Процентное соотношение в эякуляте сперматозоидов с различной подвижностью. В нативном мазке подсчитывают 100 сперматозоидов, отмечая количество с нормальной подвижностью (нормокиноспермия), с ослабленной (гипокиноспермия) и неподвижных (акиноспермия).
Сперматозоиды с нормальной подвижностью (поступательными движениями) скорость 50 мкм/с, в норме 80-90%, с ослабленной (медленными поступательными движениями) -10-12%, неподвижных - 6-10%. Колебательные движения сперматозоидов - называются дискиноспермия – в норме не наблюдается.

Определение количественных и качественных особенностей сперматозоидов.
Определение подвижности сперматозоидов.
ДИНАМИЧЕСКАЯ КИНЕЗИСГРАММА.
24 часа определяют подвижность сперматозоидов. Каплю спермы помещают в лунку на стекле, закрывают покровным стеклом (края смазаны вазелином) и определяют количество подвижных сперматозоидов через 3,6,12, и 24 часа. Нормокиноспермия должна убывать меньше чем на 20%, если с большей скоростью, то это астеноспермия (слабая оплодотворяющая способность).

Определение количественных и качественных особенностей сперматозоидов.
Проба на «оживление» сперматозоидов.
Если акиноспермия в свежем эякуляте более 30% можно попытаться «оживить» сперматозоиды. Безуспешная попытка говорит о некроспермии (мертвые). В качестве «оживляющих» растворов применяют:
Р-р Бекера: глюкоза 3г +NaHP04-0,6г+ NaCl 0,2г + КН2РО4 0,01г +Н2О2 до 100 мл.
0,1% р-р кофеина.
0,1 % р-р аргинина.
Мерной пипеткой на 1 мл насасывают 0,1 мл. спермы + 0,9 мл. любого стимулирующего р-ра. выдувают в лунку, перемешивают и исследуют под микроскопом. Через 5-10 мин неподвижные, но живые сперматозоиды начинают двигаться.

Проба на «оживление» сперматозоидов.
ОКРАСКА ПО БЛУМУ. Позволяет отличить погибшие сперматозоиды от живых. На предметное стекло наносят маленькую каплю спермы, рядом в 2 раза больше каплю 5% р-ра эозина и каплю 10% водного р-ра нигрозина в 2 раза большую, чем капля эозина. Сначала каплю спермы смешивают стеклянной палочкой с эозином, ждут 5 сек. Затем с нигрозином, ждут 5 сек и делают мазок (как кровь).

Проба на «оживление» сперматозоидов.
Живые сперматозоиды не окрашиваются, а погибшие становятся розовыми. Смотрят с иммерсией. Сосчитывают 500 клеток и определяют процент живых, в норме - 80-90%.

Подсчет сперматозоидов в 1 мл и во всем объеме эякулята.
Перемешанную сперму набирают в меланжер до отметки 0,5, затем до метки II жидкость для разведения и заполняют камеру Горяева.
Жидкости:
1. Р-р гидрокарбоната Na (гидрокарбонат Na 5 мг + конц. формалин
1 мл+Н2О 100 мл.
2. Жидкость Рубенкова (осн. фуксин 0,1 г, краситель Романовского 0,02 мл., конц. карболовая кислота 0,2 мл., глицерин 0,1 мл., этиловый спирт 2 мл., 1% NaCl 100 мл.
Окуляр х7, объектив х40. Считают сперматозоиды в 5 больших квадратах по диагонали и умножают на 1 млн. (в 1 мл. спермы). В норме число сперматозоидов в 1 мл спермы 60-120 млн., при гиперспермии больше 120 млн, при олигоспермии - 30-60 млн.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕРМАТОГРАММЫ.
Сперматограмма – совокупность результатов количественного исследования спермы. Для определения сперматограммы препараты окрашивают по Паппенгейму, оценивают с иммерсией не менее 200 сперматозоидов. В норме сперматозоиды нормальной формы составляют 80 – 85%. Молодые или незрелые формы имеют вокруг головки и шейки остаток цитоплазмы ("воротничок"), наблюдается при частых половых сношениях и не способны к оплодотворению.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ
СПЕРМАТОГРАММЫ
Старые формы характеризуются гиперхромией, ахромией, вакуолизацией головки — половое воздержание, не пригодны к оплодотворению. Дегенеративные формы: мегалосперматозоиды (гиганты), сперматозоиды с двумя головками, но с одной шейкой и одним хвостом, а также без шейки с одним или несколькими хвостами, без хвоста, с хвостом без головки и др. У здоровых мужчин патологические формы не встречаются. Патология хвоста чаще из-за прохождения по патологическим семявыносящим путям.

Патологические формы сперматозоидов

Патологические формы сперматозоидов

Патологические формы сперматозоидов

Референтные значения эякулята (ВОЗ, 2002)