Серодиагностика брюшного тифа

Серодиагностика брюшного тифа (3 варианта)
Применение: диагностика брюшного тифа
Ищем: антитела к отдельным антигенам
Возможности: выявление стадийности заболевания (Динамика содержания антител к S. typhi своеобразна: раньше всего появляются антитела к О-антигену, но титр их быстро снижается после выздоровления; Н-антитела появляются позднее, но зато сохраняются после болезни и прививок годами) A-B-C=начало-разгар-исход
В виде РНГА реакция не ставится, только в виде пробирочной реакции агглютинации Видаля

РНГА с Vi-антигенным диагностикумом
Применение: диагностика брюшного тифа и скрининг брюшнотифозных носителей
Ищем: антитела к Vi-антигену
Возможности: выявление титра антител более 1/40 означает или носительство, или наличие заболевания. Больной или носитель отправляются на бактериологическое исследование фекалий, желчи и дуоденального содержимого.

Серодиагностика дизентерии в РНГА
Применение: диагностика дизентерии острой, хронической и носительства.
Ищем: антитела к групповым антигенам шигелл
Возможности: титр антител к определенному виду 1/200 – 1/400 означает носительство, 1/400 и выше – острая форма
Примечания: диагностикумов с антигенами S. boydii нет, не было и никогда не будет. Это студенческий вариант из древности. Реакция ставится в макропланшеты, в микропланшетах трудно учитывается и требует смещения вышеуказанных значений титров на 1 разведение в большую сторону (1/200 в 1/400, например)

Серодиагностика иерсиниоза и псевдотуберкулеза в РНГА
Применение: диагностика иерсиниоза и псевдотуберкулеза.
Ищем: антитела к групповым антигенам иерсиний
Возможности: титр антител к определенному виду 1/200 – 1/400 означает носительство, 1/400 и выше – острая форма
Примечания: ТОЛЬКО в больших панелях, в микропланшетах реакция нечитаема

Серодиагностика туберкулеза в РНГА
Применение: диагностика туберкулеза.
Ищем: антитела антигенам микобактерий
Возможности: титр антител 1/200 – 1/400 означает хроническую форму, 1/400 и выше – острая форма

Все методы серодиагностики в РНГА
Диагностикум: эритроцитарный сенсибилизированный определенным видом антигена (указан где-либо на фото или планшетке)
Положительный феномен – зонтик
Отрицательный феномен – пуговка
Как правило в микропланшетах диагностическим титром при ОДНОКРАТНОМ исследовании является титр 1/320, в макропланшетах – 1/400 и выше (острые заболевания)
Исследование парных сывороток предполагает нарастание титра антител в 4 раза и более за 12-14 дней
Контроли: контроль диагностикума (Кд) – это контроль свободного осаждения диагностических эритроцитов; контроль сыворотки (Кс) – это контроль отсутствия взаимодействия сыворотки больного с несенсибилизированными эритроцитами, положительный контроль (К+) – это контроль реакции тестовых (сенсибилизированных) эритроцитов с заведомо положительным образцом

Висмут-сульфит агар
Тип среды: элективно-дифференциальная
Основа: МПА
Элективный фактор: соли висмута
Дифференциальный фактор: соли висмута и сульфит натрия (бактерии, образующие сероводород, восстанавливают S4+ до S2-, что приводит к почернению среды). Прочие или остаются зелеными, или не растут.
Применение: среда для селективного выделения Salmonella spp.

Типы гемолиза бактерий
β Гемолиз: полное просветление среды вокруг колоний (среда становится прозрачной). Характерно для S. aureus, Str. Pyogenes, некоторых Enterobacteriaceae
α гемолиз: окрашивание среды в зеленоватый цвет вокруг колоний (неполное разрушение гемоглобина)
γ гемолиз: нет изменения цвета и прозрачности

Среда Клауберга
Тип среды: элективно-дифференциальная
Основа: МПА с добавлением гемолизированной крови, глицерина и (по возможности) витаминов В6 и В12
Элективный фактор: теллурит калия 2%
Дифференциальный фактор: теллурит калия восстанавливается коринебактерями, прокрашивая их в черный цвет с металлическим отливом
Применение: среда для селективного выделения коринебактерий

Биохимические свойства нейссерий
Тип среды: дифференциальная (комплекс сред с моно- и дисахаридами)
Основа: МПБ с добавлением моно-/дисахарида и индикатор рН
Дифференциальный фактор: в процессе ферментации моно-/дисахарида рН меняется в кислую сторону, что меняет цвет индикатора (в данном случае на красный)
Применение: дифференцировка нейссерий

Реакция преципитации по Оухтерлони
Тип реакции: реакция преципитации
Применение: Выявление антигенов менингококков в ликворе (экспресс-метод)
Ищем: антигены менингококков
Диагностикум: сыворотка поливалентная к антигенам N. meningitidis
Возможности: выявление реакции Аг+Ат происходит по формированию полосы преципитации между лункой с положительным образцом и Ат диагностикумом
Примечания: IS – иммунная сыворотка, NS – неиммунная сыворотка (отрицательный контроль)

Реакция преципитации по Оухтерлони
Тип реакции: реакция преципитации
Применение: Выявление токсина коринебактерий
Ищем: токсин коринебактерий
Диагностикум: сыворотка к токсину коринебактерий
Возможности: выявление реакции Аг+Ат происходит по формированию полосы преципитации между продуцирующей токсин колонией и Ат диагностикумом

Среда Левенстайна-Иенсена
Тип среды: элективная
Основа: МПА с добавлением яичного желтка
Элективный фактор: требуется предварительная обработка материала от больного 2% соляной или серной кислотой, для ингибирования роста плесневых грибов добавляется бриллиантовый зеленый
Применение: бактериологическое выделение микобактерий с оценкой их чувствительности к противотуберкулезным препаратам методом серийных разведений в агаре

Проба Пизу
Тип среды: дифференциальная
Основа: МПА с добавлением цистеина
Дифференциальный фактор: потенциально токсигенные коринебактерии способны разлагать цистеин с образованием сероводорода, который с ионами железа образует комплекс черного цвета
Применение: оценка токсигенности коринебактерий

Среда Сабуро
Тип среды: элективная
Основа: МПА с 2 мг/л глюкозы и 10 мкг/мл гентамицина и /или левомицетина
Элективный фактор: низкий рН и антибиотики
Применение: бактериологическое выделение дрожжеподобных грибов рода Candida и др. грибов

Фаготипирование S. aureus тип В

Фаготипирование S. aureus тип А

Фаготипирование S. aureus
Тип реакции: фаготипирование
Исследуемый материал: чистая культура S. aureus
Инструмент типирования: английский набор типовых фагов
Положительный феномен: отсутствие роста в месте аппликации стандартного фага
Цель исследования: определение фаготипа (совокупность лизирующих фагов)

ТСА
Тип среды: дифференциальная
Основа: МПА с добавлением 1 мкг/л глюкозы, 10 мкг/л сахарозы или лактозы, железа (III) хлорного, цистеина, иногда – мочевины (ср. Олькеницкого) индикатора Андраде
Дифференциальный фактор: сахара, цистеин, мочевина
Применение: дифференцировка грамнегативных палочек: 1-Shigella spp., 2-Escherichia spp., 3-Yersinia или любая НГОБ, 4-S. var. Typhi

Фагодифференцировка V. cholerae
Тип реакции: фаготипирование
Исследуемый материал: чистая культура V. cholerae
Инструмент типирования: стандартный набор фагов
Положительный феномен: отсутствие роста в месте аппликации стандартного фага
Цель исследования: определение фаготипа (совокупность лизирующих фагов)

Фагодифференцировка V. cholerae
Тип реакции: фаготипирование
Исследуемый материал: чистая культура V. cholerae
Инструмент типирования: стандартный набор фагов, смесь фагов поливалентная
Положительный феномен: отсутствие роста в месте аппликации стандартного фага
Цель исследования: дифференцировка V. cholerae от других представителей рода Vibrio

Энтерококкагар
Тип среды: элективно-дифференциальная, хромогенная
Основа: МПА с добавлением хромогенного субстрата и селективной смеси солей
Элективный фактор: смесь солей (скрыто производителем)
Дифференциальный фактор: 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид
Применение: среда для селективного выделения и дифференцировки энтерококков: E. fecalis – вишневый, E. faecium - розовый

СРЕДА КОНТРОЛЯ СТЕРИЛЬНОСТИ (Тиогликолевая)
Тип среды
Среда для анаэробов (обогатительная)
Состав
Питательная основа - питательный бульон (мясо-пептонный бульон) + 0,1% агар-агара
Дыхательный субстрат - глюкоза
Редуцирующий фактор - тиоловые соединения (тиогликолят натрия и цистеин)
Принцип действия
Глюкоза является дыхательным субстратом и используется в энергетических анаэробных процессах.
Тиоловые соединения связывают токсичные формы кислорода и снижают окислительно-восстановительный потенциал среды.
Небольшое количество агар-агара повышает вязкость среды и уменьшает насыщение среды кислородом в результате конвекции.
Назначение
Накопление анаэробных микроорганизмов.

Желточно-солевой агар
Тип среды
Элективно-дифференциальная
Состав
Питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар)
Дифференцирующий фактор - лецитин (эмульсия куринного желтка)
Элективный фактор - 10% хлорида натрия
Индикатор - отсутствует
Принцип действия
Высокая концентрация хлорида натрия подавляет рост большинства микроорганизмов. Стафилококки при концентрации соли 10% не подавляются.
Наличие в среде лецитина позволяет дифференцировать стафилококки по наличию лецитовителазы. При расщеплении лецитина образуются нерастворимые продукты, выпадающие в толще среды вокруг колоний, образуя "перламутровую" зону.
Назначение
Выделение стафилококков и дифференцировка по лецитовителазному признаку (S.aureus - lec+, остальные - lec-) с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры.

Тип среды
Элективно-дифференциальная
Состав
Питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар)
Дифференцирующий фактор - лактоза
Элективный фактор - соли желчных кислот
Индикатор - нейтральный красный
Принцип действия
Соли желчных кислот подавляют рост сопутствующей микрофлоры. Поскольку полного подавления не происходит, колонии вырастающих микроорганизмов можно дифференцировать по способности расщеплять лактозу. В питательной среде накапливаются кислые метаболиты. В кислой среде нейтральный красный окрашивает лактозоположительные колонии в красный (брусничный) цвет.
Назначение
Выделение лактозонегативных патогенных энтеробактерий (сальмонеллы и шигеллы)