Методы иммунодиагностики нарушений фагоцитарных процессов

Методы определения хемотаксиса лимфоцитов
Исследование хемотаксиса в трансвелл-планшетах
Метод миграции под агарозой

Исследование хемотаксиса в трансвелл-планшетах
Клетки проходят через мембрану по градиенту хемоаттрактанта
Не прилипающие клетки выделяют и подсчитывают на проточном цитометре
Прилипающие клетки
Отделяют от мембраны и подсчитывают
Фиксируют на мембране и подсчитывают
Хемотактический индекс вычисляют как отношение количества клеток в опыте к количеству клеток в контроле
+ простота метода
- нету белков межклеточного вещества

Метод миграции под агарозой
Клетки проходят по градиенту по границе дно – агароза
После инкубации клетки фиксируют в геле, окрашивают и подсчитывают
Хемотактический индекс вычисляют как разница пройденного пути до лунки с хемоаттрактантом и пути до лунки с контролем
+ физиологичность
- трудоемкость

Определение адгезивных свойств
Селектины – «качение» клеток по эндотелию
CD62L и CD62E
Интегрины – плотное крепление к эндотелию
CD18, CD11a, CD11b и CD11c

Определение адгезивных свойств
Использование моноклональных антител и дальнейший подсчет на проточном цитометре или ИФА
Клетки метят радиоактивными метками и культивируют с эпителиальными клетками. После промывки измеряют радиоактивность
Окраска клеток прилипших к пластику и измерение оптической плотности. Существует линейная зависимость оптической плотности от количества прилипших клеток

Определение фагоцитарного числа

Определение образования активных форм кислорода (АФК)
НСТ-тест (восстановление нитросинего тетразолия)
Измерения оптической плотности после растворения диформазана
Микроскопический метод определения количества гранул
Проточная цитометрия
Индикатор АФК – дихлорофлуоресцеин диацетат
Активатор образования АФК – форбол 12-миристат 13-ацетат (ФМА)
Оценивают свечение до и после активации образования АФК
Хемилюменисценция

Определение дегрануляции нейтрофилов
Два типа гранул в нейтрофилах
Азурофильные (CD63)
Специфические (CD63b, CD67)
Нейтрофилы стимулируют к дегрануляции
Добавляют МАТ к CD63 b CD66b с ФИТЦ - меткой
Определяют интенсивность средней флуоресценции. По этому параметру определяют экспрессию маркеров