Микробиологическая, вирусологическая и серологическая диагностика воспалительных заболеваний сердечнососудистой системы

Материалом для исследования может быть кровь больного в остром периоде до приема антибиотиков с целью выделения чистой культуры возбудителя.

Микробиологическая диагностика ревматизма основана на выявлении специфических антител к антигенам стрептококка, аутоантигеном, белков острой фазы, ЦИК серологическими методами

В сыворотке крови обнаруживают:
А) антитела к О- стрептолизину (А-ОС);
к гилуронидазе;
к специфической детерминанте А-ПСХ;
к дезоксирибонуклеазе В (ДНК-аза В);
к стрептокиназе
Б) аутоантитела к антигенам миокарда
В) циркулирующие иммунные комплексы
Г) антигены стрептококков: А-ПСХ; М-субстанция
Д) белки острой фазы: С-реактивный белок, маннан-связывающий лектин

Микробиологическая диагностика бактериальных патогенов:
Стафилококки
Бактериоскопия: мазок - окраска по Граму «грозди винограда»);
Бактериология - культивирование на специальных средах: МЖСА или ЖСА (желточно-солевой агар для обнаружения фермента лецитиназы); на цитратную плазму для обнаружения плазмокоагулазы;
Идентификация по биохимическим свойствам, фаготипирование, определение чувствительности к антибиотикам

Стрептококки
Бактериоскопия: мазок - окраска по Граму («цепочки или диплококки»), наличие капсулы;
Бактериология - культивирование на специальных средах: КА (кровяной агар с зонами полного или неполного гемолиза);
Идентификация по биохимическим свойствам, антигенным свойствам, определение чувствительности к антибиотикам

Дифтерийная палочка
1. Бактериоскопия. Исследуемый материал: слизь из зева (ротоглотки), носа, окраска мазка по Граму, Нейссеру (палочки с волютиновыми метахроматическими зернами).
2. Бактериология - посев на кровяной теллуритовый агар (среда Клауберга). По характеру колонии определяют тип возбудителя gravis, mitis, intermedius.
3. Идентификация: по биохимическим свойствам; определение токсигенности с помощью реакции преципитации (РП) в геле, с использованием индикаторных бумажных дисков с антитоксином и культуры от больных;
4. Серология: определение антител-антитоксинов проводят в РПГА с эритроцитарным диагностикумом или реакция Шика.

Salmonella typhi
1. Бактериоскопия. , окраска мазка по Граму, (палочки с закругленными концами Грам- средних размеров).
2. Бактериология - посев на специальные среды (среда Эндо – бесцветные колонии, висмут сульфит агар – мелкие черные колонии)
3. Идентификация: по биохимическим свойствам; по антигенным свойствам, фаготипирование, определение чувствительности к антибиотикам.

Микобактерия туберкулеза
1. Бактериоскопия. окраска мазка по Граму, по Цилю-Нильсену (Грам+, по Цилю – ярко-красные тонкие палочки, кислото- и щелочеустойчивые).
2. Бактериология - посев на специальные среды: картофельно-глицериновая, яично-солевая среда Левенштейна-Йенсена. Растут медленно 2-3 недели.
3. Идентификация: корд-фактор в цитратной плазме (метод Прайса – гемокультур).
4. Серология: РИФ, РСК, ИФА, ПЦР.
5. Аллергический метод – проба Манту с туберкулином.

Вирусологическая диагностика заключается в обнаружении прироста ан­тител в парных сыворотках больных. Наивысшие титры антител опреде­ляются через 9-12 дней после заболевания. Используют РСК, РТГА, реакцию нейтрализации, иммунодиффузию, иммуноферментный метод. В качестве антигенов применяют стандартные диагностикумы.

В сыворотке крови обнаруживают: аутонтитела к антигенам миокарда; циркулирующие иммунные комплексы
Диагностика основывается на бак.посевах крови, определении острофазовых показателей, титра антител, иммунных комплексов.

Прямые методы исследования в вирусологии
Прямые вирусологические методы исследования позволяют обнаружить вирус, вирусную нуклеиновую кислоту или вирусный антиген непосредственно в клиническом материале и являются, таким образом, наиболее быстрыми (экспресс-методы – до 24 ч). Данные методы менее информативны и требуют лабораторного подтверждения непрямыми методами диагностики в связи с нередким получением ложноотрицательных или ложноположительных результатов. К прямым относятся следующие методы исследования:

электронная микроскопия с окрашиванием вирусов методом негативного контрастирования (позволяет определить наличие вируса и его концентрацию в материале при условии, что в 1 мл содержится не менее 105 вирусных частиц);

иммунная электронная микроскопия, основанная на взаимодействии специфических антител с вирусами с образованием комплексов, которые легче обнаруживаются при негативном контрастировании, нежели вирусы отдельно;

твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) с использованием меченных ферментами антител, которые связываются с антигенами, образуя комплексы, выявляемые при добавлении субстрата для использованного фермента;

реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – прямая или непрямая – основана на применении антител, связанных с флюоресцентным красителем;
радиоиммунный анализ (РИА) основан на использовании меченных радиоизотопами антител и гамма-счётчиков;
цитологические методы основаны на микроскопическом исследовании окрашенных мазков, биоптатов, материалов аутопсии;

молекулярные методы – молекулярная гибридизация нуклеиновых кислот и полимеразная цепная реакция (первая основана на выявлении комплементарных нитей нуклеиновых кислот с помощью метки, вторая – на принципе репликации вирусспецифической последовательности ДНК в три этапа). ПЦР (полимеразная цепная реакция) на сегодняшний день всё шире применяется в мониторинге и диагностике вирусных инфекций в связи с высокой чувствительностью и специфичностью данного метода.

Непрямые вирусологические методы исследования
Данные методы основаны на выделении и идентификации вируса.
Материалом для таких исследований может быть: содержимое везикул, смывы, кровь и ликвор, фекалии

Культивирование вируса осуществляют в культуре ткани, курином эмбрионе или в организме животного (хомяка, белой мыши, собаки, кошки, некоторых видов обезьян).
Индикацию вируса проводят по цитопатическому действию, в реакции гемадсорбции, по цветной пробе, по результатам реакции торможения гемагглютинации, по изменениям или их отсутствию в куриных эмбрионах или культурах ткани, по выживаемости чувствительных животных.

Серологические методы диагностики, применяемые в вирусологии
Под серологической диагностикой подразумеваются вирусологические методы исследования, основанные на реакции антиген-антитело. При этом чаще всего используются парные сыворотки крови, которые берутся с интервалом в несколько недель. При нарастании титра антител в 4 и более раз реакция считается положительной.

Для определения типоспецифичности вирусов применяется реакция вируснейтрализации, с целью определения группоспецифичности – реакция связывания комплемента. Также широко применяются реакции пассивной гемагглютинации, торможения гемагглютинации, обратной пассивной гемагглютинации, РИФ и различные варианты иммуноферментного анализа.

В ходе генно-инженерных исследований разработана методика получения моноклональных антител. Узкая специфичность моноклонов преодолевается применением нескольких моноклональных антител к разным вирусным детерминантам. Это повысило чувствительность и специфичность вирусологических методов исследования с определением вирусных антигенов.
В настоящее время создано множество различных тест-систем для иммунологической диагностики вирусных инфекций.