п.з. 1

Стафилококки
семейство Micrococcaceae
род Staphylococcus
Факультативные анаэробы. Разделяются на виды Staphylococcus aureus (наиболее патогенный для человека), S. epidermidis, S. saprophyticus и др.
Биохимические свойства: осуществляют ферментацию углеводов (лактозу, глюкозу, мальтозу), не разлагают индол, выделяют аммиак

Окраска по Грамму
Мазок чистой культуры S.aureus
Грамположительные круглые кокки диаметром 1мкм, располагающиеся в чистой культуре в виде скоплений, напоминающих виноградные гроздья, а в патологическом материале - небольшими скоплениями кокков. Неподвижны. Красятся всеми анилиновыми красками.

Культуральные свойства S.aureus
ЖСА – элективная среда
Высокое содержание натрия хлорида подавляет большинство бактерий, а присутствие яичного желтка выявляет свойственный этому роду фермент лецитиназу. При росте на желточно-солевом агаре вокруг колоний S.aureus образуются радужные венчики.

Кровяной агар

Классификация стафилококков

Факторы вирулентности Staphylococcus aureus
ФЕРМЕНТЫ
Плазмокоагулаза (коагулаза)-Конверсия фибриногена в фибрин, препятствующего контакту с фагоцитами ("псевдокапсула")
Гиалуронидаза- Разрушение соединительной ткани
Липазы - Гидролиз липидов
Стафилокиназа (фибринолизин) -Разрушение фибриновых сгустков
Дезоксирибонуклеаза -Расщепление ДНК, разжижение гноя
ДРУГИЕ КОМПОНЕНТЫ:
Каратиноидные пигменты- Инактивация бактерицидных форм кислорода. Устойчивость к NaCl, жирным кислотам. Размножение в потовых и сальных железах

Факторы вирулентности Staphylococcus aureus
Токсины
Альфа-, бета-, гамма-, дельта-токсины, лейкоцидин-Токсичны для многих клеток, включая лейкоциты, эритроциты, макрофаги и фибробласты
Альфа-токсин - пример порообразующего токсина.
Эксфолиативный токсин- Вызывает синдром "ошпаренной кожи", разрушая межклеточные контакты - десмосомы в гранулярном слое эпидермиса. Суперантиген (поликлональная активация Т-лимфоцитов, стимуляция продукции цитокинов)
Токсин синдрома токсического шока -Нейротропные, вазотропные эффекты. Суперантиген.
Энтеротоксины (А - Е) - Нейротропные эффекты, действие на энтероциты (стафилококковая пищевая интоксикация).Суперантиген

Стрептококки
Семейство – Streptococcaceae содержит 7 родов.
Род – Streptococcus включает 21 вид, в том числе -
Виды– S. pyogenes, S. pneumoniae, S. faecalis, S. agalactiae и др.
Биохимические свойства.
Ферментативная активность неодинакова: наименьшей биохимической активностью обладают наиболее патогенные стрептококки. Они ферментируют ряд углеводов (глюкозу, лактозу, манит, мальтозу) с образованием кислоты без газа . Однако ферментация углеводов не является стабильным и четким признаком, поэтому не используется для дифференциации и идентификации стрептококков. Стрептококки обладают слабой протеолитической активностью, в частности не разжижают желток.

Морфологические свойства
Стрептококк в гное. Окраска по Граму Strepococcus pyogenes. Чистая культура. Окраска метиленовым синим.
Стрептококки - кокки неправильной круглой формы, располагающиеся в виде цепочек или попарно, размеры 0,5-2,0 мкм. Неподвижны, спор не имеют, некоторые образуют капсулы. Грамположительные, факультативные анаэробы

Упрощенная классификация стрептококков

Факторы вирулентности стрептококков.
Капсула - антифагоцитарная активность
M-белок - антифагоцитарная активность, разрушает C3b-компонент комплемента.
F-протеин опосредует прикрепление стрептококка к эпителиальным клеткам
Пирогенные экзотоксины (эритрогенины) -обладают пирогенным эффектом, усиливают гиперчувстиветельность замедленного типа и чувствительность к эндотоксину, иммуносупрессивный эффект на функции B-лимфоцитов, появление сыпи.
стрептолизин S - разрушает лейкоциты, тромбоциты и эритроциты; стимулирует освобождение лизосомальных ферментов; не иммуногенен.
Стрептолизин О - разрушает лейкоциты, тромбоциты и эритроциты; стимулирует освобождение лизосомальных ферментов; иммуногенен
Стрептокиназа - разрушает кровяные сгустки (тромбы), облегчает распространение бактерий в тканях
ДНК-аза- деполимеризует внеклеточную ДНК в гное

Лабораторная диагностика стрептококков
Биоптат: слизь с рото- и носоглотки, гной, раневое содержимое, кровь, мокрота, моча.
Посевы на сахарный бульон и кровяной агар.
Выделенные чистые культуры идентифицируют по их морфологическим признакам, характеру гемолиза, биохимической активности, что дает возможность определить отдельные виды.
Обязательно исследуют чувствительность к антибиотикам.

Питательные среды для посева крови
Двухфазная среда
(МПБ+глюкоза+МПА)
Сахарный бульен
(МПБ+глюкоза)
Среды для посева облигатно анаэробных бактерий
Тиогликолевая среда

Схема исследования отделяемого из раны
1 этап.
А) Микроскопия мазка по Граму
Б) Посев на питательные среды
2 этап.
Выделение чистой культуры
3 этап.
Определение антииотикорезистентности

Диагностика пневмококковой инфекции
Пневмококк в мокроте .
Окраска по Граму
Рост пневмококка
на кровяном агаре
Пневмококк в органах мыши

Микробиологическая характеристика грамотрицательных кокков
Цель занятия: Изучить микробиологические особенности возбудителей менингококковой и гонококковой инфекций, а также методы их диагностики.

Семейство Neisseriaceae
Род Neisseria
Вид Neisseria meningitidis
Менингококки - мелкие до 1мкм диплококки, располагающиеся в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Неподвижны, грамотрицательны, спор не образуют, имеют пили, микрокапсулу; капсула непостоянна.
Аэробы. Повышенная концентрация CO2 стимулирует рост менингококков.
По капсульным полисахаридным антигенам менингококки делят на основные серогруппы A, B, C, D и дополнительные X, Y, Z, W-135, 129 и др. (всего 13 серогрупп).
По антигенам клеточной стенки менингококки разделяются на серовары 1, 2, 3 и так далее.
Наиболее частыми возбудителями менингококковых инфекций являются представители серогрупп A, B, C, X, Y и W-135.

Биохимические свойства
Глюкозу, мальтозу ферментируют до кислоты
Индол, сероводород не выделяют
Желатин не разжижают
Neisseria вызывают менингококковую инфекцию, характеризующуюся поражением слизистой оболочки носоглотки, оболочек головного мозга, септицемией, бактерионосительством.
Человек - единственный природный хозяин менингококков.
Путь передачи - воздушно-капельный.
Необходимо дифференцировать патогенные менингококки от других видов нейссерий (N. sicca и N. mycosa), являющихся комменсалами ротоглотки

Лабораторная диагностика менингококкового менингита
Исследуемы материал – носоглоточная слизь
БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД
Чистая культура
Neisseria meningitidis.
Окраска по Граму
Мазок из спиномозговой жидкости при эпидемическом цереброспинальном менингите. Окраска метиленовым синим.

N. мeningitidis рост на шоколадном агаре

Чистая культура Neisseria meningitidis. Рост на сывороточном агаре.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕКИЙ МЕТОД
Посев на сывороточный агар с мальтозой, кровяной агар.
Инкубация посевов в атмосфере СО2
Выделение чистой культуры
Биохимические свойства:

Лабораторная диагностика менингококкового бактерионосительства
Исследуемый материал: носоглоточная слизь, ликвор, кровь, гной с мозговых оболочек, экссудат геморрагической сыпи на коже.
Посев исследуемого материала на сывороточный агар с мальтозой и ристомицетином, с последующим выделением чистой культуры.

Лабораторная диагностика гонореи
Семейство Neisseriacea
Род Neisseria
Вид N. gonorrhoea
Биохимические свойства:
Слабо выражены ферментируют глюкозу.
Культуральные свойства:
Аэробы, рост на воздухе в обогащённом СО2, с добавлением крови, асцитической жидкости.

Исследуемый материал (гной из уретры) красят по Граму и Леффлеру.
При положительном результате в поле зрения препарата видны многочисленные лейкоциты и диплококки бобовидной формы, расположенные преимущественно внутри лейкоцитов.
При свежей острой гонореи этот метод является окончательным.

Бактериологический метод
1. Исследуемый материал засевают на элективные питательными средами в чашки Петри, инкубируют при 37 С в атмосфере 10% СО2 2-5 суток. Выросшие колонии напоминают капли росы (вирулентные штаммы).
2. Далее получают чистую культуру, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, определяют чувствительность к антибиотикам.
Гонококки (окраска по Грамму)

Набор реагентов для выявления возбудителя Neisseria Gonorrhoeae в моче, соскобах со слизистых человека.
Метод: твердофазный непрямой иммуноферментный анализ.
Индикация гоноантигена

Реакция Борде-Жангу
В РСК участвуют 2 системы: основная система — испытуемая сыворотка, антиген, комплемент и вспомогательная, индикаторная или гемолитическая система — гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.
Если в первой системе образуются специфический комплекс антиген + антитело, то комплемент адсорбируется (соединяется с этим комплексом) и гемолиза во второй системе не происходит.