Применение Клеточной Хемилюминесценции

План лекции “Клеточная хемилюминесценция”
Примеры применения
Активность фагоцитов
Действие токсических веществ
Действие света (лазера)
Лекарственная несовместимость
Заключение
Физико-химические стимулы
Латекс
Сульфат бария
Электропорация
Химические стимулы
Ca2+ ионофоры
Иммунные комплексы
fMLP
FMA
Поверхность апоптотических клеток
Введение
История
Установка
Пример кривых ХЛ
Принцип метода
Реакции при стимуляции клеток
Активаторы свечения

Robert Allen and Yury Vladimirov

Photometric set of the chemiluminometer
Motor
Tube
Thermostated
Cuvette
Shutter
Photo multiplier
1
2
3
4
5

Выделение активных форм кислорода нейтрофилами
При взаимодействии со стимулом, например бактериями, фагоциты выделяют супероксидные радикалы и другие активные формы кислорода.
2 мин
ХЛ-ответ клеток меняется после лазерного облучения.
Дозы облучения
0
0.05
0.1
0.15
0.2

Time course of liniimol-dependent chemiluminescence from human neutrophils
Fig. 6.15. Time course of liniimol-dependent chemiluminescence from human neutrophils,. Cells were exposed to fMet—Leu—Phe (left-hand graph) or to phorbol myristate acetate (right-hand graph) at 37oC. (A) 105 cells, (B) 5 x 105 cells; (C) 106 cells. Diagram adapted from Agents and Actions, 21, 104 (1987) by courtesy of Dr C. Dahlgren and the publishers. In the left-hand curve, the first peak is probably related to extracellular events (such as HOCI production by myeloperoxidase) and the second to intracellular events.

Хемилюминесценция при окислении люминола

Люцигенин дает свечение при взаимодействии с супероксидом
(blue-green luminescence)
+ ROOH
or R=O
+ photon
N
X
R
CH
N
H
2
Lucigenin
-
N
X
O
CH
-
3
3

Стимулы
Физические
Электрические импульсы
Адгезия
Химические
Ca2+-ионофор
fMLP
FMP
Физико-химические
Опсонизированный зимозан
НИЛИ

ХЛ нейтрофилов стимулированных латесом

Измерение ХЛ цельной крови с BaSO4

ХЛ ответ осажденных лейкоцитов

Измерение электро-стимулированной ХЛ

Электростимулированная ХЛ крови
А
Б
Влияние амплитуды импульсов, В

Электро-стимулированная хемилюминесценция крови
Vladimirov et al. 1994
До и после УФ-облучения крови (УФОК)
Клиника Гумбольдского университета, Берлин
Гиперхолестеринемия
Доноры
После УФ-ОК
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
Амплитуда ХЛ-ответа
До
УФ-ОК