ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ В СТОМАТОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ

Методические направления
Обнаружение вируса или его компонентов непосредственно в клиническом материале, взятом от больного (быстрая диагностика);
Выделение вируса из клинического материала и его идентификация;
Серодиагностика вирусных инфекций;

Выбор метода лабораторной диагностики зависит:
От характера заболевания;
Предполагаемого возбудителя;
От периода болезни;

Требования к сбору, хранению и доставке исследуемого материала
Оптимальные сроки взятия материала;
Выбор пробы зависит от патогенеза заболевания;
Обязательно в острой стадии болезни берется кровь;
Выбор пробы зависит от предварительного клинического диагноза;
Пробы берутся с соблюдением правил асептики в стерильные флаконы с завинчивающей пробкой;
Пробы сохраняют влажными и на холоду (не замораживают); можно использовать стабилизирующую среду (среда Хенкса и др.);
Доставку осуществляют в максимально короткие сроки. Если время доставки превышает 30-40 минут и не сразу будет проведено исследование, пробы замораживают при -80° С в сухом льду или помещают в жидкий азот при -180° С;
Пробы маркируются и на них оформляется сопроводительный документ;

Методы диагностики вирусных инфекций
Цитологический (быстрая диагностика);
Вирусологический
Серологический
Молекулярно-генетический

Методы быстрой диагностики
Экспресс-методы;
Ускоренные методы;

Экспресс-методы диагностики вирусных инфекций
Малоспецифические
♦ Тельца
• Пашена
• Арагана
♦ Внутриклеточные включения • ядерные (напр. при аденовирусной инфекции)
• цитоплазматические (напр. Бабеша-Негри)
♦ Выявление вириона в пробах
•ЭМ (дает ответ в течение 1 часа);
•ЭИМ (дает ответ в течение 2-3 часов);
Подходят для рота, адено, гепадна, парамиксо, ортомиксовирусов и др.
Тельца Бабеша-Негри

Экспресс-методы диагностики вирусных инфекций
Высокоспецифические
Выявление вирусного АГ в пробах: РИФ, ИФА, РНГА, РИА, реакция преципитации в геле (от 2 до 24 часов);
Выявление ранних противовирусных АТ IgM: РНГА, РОНГА, ИФА, РИА и др.;
Выявление вирусных ферментов в тесте МГ;
Выявление НК: ПЦР;

РИФ с патологическим материалом

Ускоренные методы
Выявление вирусного АГ в клеточной культуре через 24 после накопления.

Ретроспективные методы
Вирусологический метод;
Серодиагностика;

Вирусологический метод
Этапы:
Культивирование (накопление) вируса;
Индикация (обнаружение) вируса;
Типирование (идентификация вируса);

Использование для вирусологического метода куриного эмбриона
5-7-дневные, реже – 10-11-дневные
основные способы заражения:
на хорион-аллантоисную оболочку
в хорион-аллантоисную полость
в полость желточного мешка
в полость амниона
в тело эмбриона
индикация:
гибель эмбриона
морфологические изменения эмбриона/оболочек
РГА с жидкостью из полостей куриного эмбриона
идентификация:
РН (в т.ч. РТГА)
РСК

Использование для вирусологического метода культур клеток
Чаще – перевиваемые монослойные
индикация:
ЦПД (цитопатическое действие вирусов – любое изменение клеток монослоя, включая бляшкообразование и цветную пробу)
гемадсорбирующая активность монослоя (РГАдс)
РИФ (= идентификация)
идентификация:
РН (в т.ч. РТГАдс)
РСК
РИФ

ЦПД вирусов

РГАдс

ВИРУСЫ ГРИППА
Ортомиксовирусы –
греч. orthos – правильный,
myxa - слизь

Ортомиксовирусы: классификация
Orthomyxoviridae
Influenzavirus
вирус гриппа А
вирус гриппа В
Influenza
вирус гриппа С

Ортомиксовирусы: характеристика семейства
спиральный тип симметрии
цитоплазматические включения
наличие ядерной стадии репликации

Ортомиксовирусы: основной способ культивирования
куриный эмбрион
амнион
аллантоис
индикация
РГА
идентификация
РСК
РТГА

Ортомиксовирусы: структура вириона
сердцевина (нуклеокапсид)
РНК ( А и В – 8, С – 7)
структурный белок (нуклеокапсид) – А, В или С
ферменты
суперкапсид
М-белок
билипидный слой
шипы (гликопротеины – gp)
гемагглютинин (Н) – индукция вируснейтрализирующих Ig, адсорбция
нейраминидаза (N) – отрыв при отпочковывании

Ортомиксовирусы: антигенная структура

Серотипы вируса гриппа А
(по классификации ВОЗ 1980 г.)

Ортомиксовирусы: антигенная изменчивость и её следствия

Чувствительность к факторам внешней среды вируса гриппа А
56оС
УФ-лучи
дезинфектанты
детергенты

Отличительные особенности вируса гриппа С
РНК имеет 7 фрагментов
нет нейраминидазы (один тип шипов)
шипы располагаются на поверхности вириона не беспорядочно, а со строгой гексагональной ориентацией
для адсорбции на клетке используется другой тип рецепторов

Грипп: эпидемиология и характер заболеваемости

Грипп: патогенез

Грипп: иммунитет

Грипп: иммуно- и химиопрофилактика
Иммунопрофилактика
вакцины
живые
убитые
химические
иммуноглобулин
ИФН
Химиопрофилактика
ремантадин
грипп А
начальная стадия

Вирусологическая диагностика гриппа
Экспресс-диагностика
РИФ: Ag в эпителии
Вирусологический метод (первые дни)
носоглоточный смыв
⇓
куриный эмбрион
⇓
РГА – индикация
⇓
РСК – тип
РТГА - подтип
Серологический метод
антитела в «парных сыворотках» (ч/з 8-14 дней) – РСК, РТГА

ВИРУСЫ, ПЕРЕДАЮЩИЕСЯ ВОЗДУШНО-КАПЕЛЬНЫМ ПУТЕМ (ОРВИ)
ОРВИ
с. Paramyxoviridae
п/с Paramyxovirinae
р. Respirovirus (ВПГЧ -1,-3)
р. Rubulavirus (ВПГЧ -2, -4а, -4b)
п/с Pneumovirinae
р. Pneumovirus (RS – вирус);
с. Coronaviridae
р. Coronavirus (более 10 видов)
с. Reoviridae
р. Orthoreovirus (3 сротипа)
с. Picornaviridae
р. Rhinovirus (2 вида, 100 сероваров)
р. Enterovirus (вирусы Коксаки и ЕСНО);
с. Adenoviridae
р. Mastadenovirus (80 видов)
с. Paramyxoviridae
п/с Paramyxovirinae
р. Rubulavirus ( вирус паротита);
р. Morbillivirus (вирус кори);
с. Togaviridae
р. Rubivirus (вирус краснухи)

Проявления ОРВИ
ОРВИ
Верхнего отдела Нижнего отдела
респираторного тракта респираторного тракта
Ринит (рино и коронавирусы), Бронхит и бронхиолит
фарингит (корона, парамиксо, (РС –вирусы)
аденовирусы) пневмонии (гриппа,
парагриппа)

Семейство Paramyxoviridae

Морфология
Крупные оболочечные вирусы (150-300 нм)
Спиральный тип симметрии
Нуклеокапсид закручен в спираль
Однонитевая несегментированная минус - РНК

Парамиксовирусы: характеристика
гликопротеины (шипы суперкапсида):
HN – нейраминидазная и гемагглютинирующая активность
F – слияние мембран (симпласты, синцитий), гемолиз
репликация целиком осуществляется в цитоплазме
могут формировать цитоплазматические включения

Белки и гликопротеины
Гемагглютинины и нейраминидаза (у ВПГЧ и вируса паротита, у РС – отсутствуют)
Гликопротеин F (Fusion – слияние)
М-белок
Белки полимеразного комплекса (L, P)

Репродукция парамиксовирусов

Вирус парагриппа: свойства
5 серотипов (доминирует ВПГЧ-3)
гемагглютинирующая активность
ЦПД
зависит от серотипа

Парагрипп: патогенез
эпителий носоглотки
кровь
пневмонии
(дети до года)
ОРЗ

Парагрипп: иммунитет
типоспецифический
непродолжительный (возможна реинфекция тем же серотипом)

Парагрипп:
вирусологическая диагностика
1. Экспресс-диагностика
Ag в клетках носовых ходов (РИФ, ИФА)
2. Вирусологический метод
носоглоточный смыв
▼
культура клеток
▼
РГАдс, ЦПД
▼
РСК, РТГА, РН
3. Серологический метод
антитела в «парных сыворотках» (РТГА, РСК, РН)

Pneumovirus: свойства
характерно образования синцития
полное отсутствие:
гемагглютинирующей и гемадсорбирующей активности
нейраминидазной активности
поверхностные гликопротеины:
G – адсорбция
F – слияние мембран (проникновение) и образование синцития
2 серотипа (РН)

Респираторно-синцитиальный вирус: эпидемиология
Вызывает патологию нижних отделов респираторного тракта у детей до 3 лет.
Максимум тяжелых заболеваний приходится на возраст 6 нед – 6 мес (бронхиолиты, пневмонии)
При повторных заражениях теряет свою агрессивность
Основной путь – контактный, аэрогенный

Патогенез RSV-инфекции (респираторно-синцитиальной вирусной инфекции)

Семейство Coronaviridae

КОРОНАВИРУСЫ: классификация
ТОРС
(SARS)

Этимология
ТОРС – тяжелый острый респираторный синдром
(SARS – Severe Acute Respiratory Syndrome)

Коронавирусы: свойства
Сложноорганизованные размером 100-150 нм
Спиральный тип симметрии
Гликопротеины E2 – пепломер и E1 – трансмембранный
Однонитевая несегментированная плюс РНК
4 серогруппы (РН) – нет перекрёстного иммунитета
Практически не культивируются

Коронавирусы:
роль в патологии человека
Респираторные
б/симптомное
ОРЗ
бронхиты
пневмонии (дети до 2-х лет)
ТОРС (SARS)
Энтеральные
гастроэнтериты (дети)

Диагностика ОРВИ, вызванных коронавирусами
Экспресс-диагностика: (РИФ для обнаружения АГ в клетках эпителия ВДП)
Серологический (РСК, РТГА, РН с целью серодиагностики)
Молекулярно-генетический (ПЦР) для определения наличия вирусной РНК

Семейство Adenoviridae

Аденовирусы: состав семейства
Adenoviridae
Aviadenovirus – вирусы птиц
Mastadenovirus – вирусы млекопитающих
серотипы (РТГА)

Аденовирусы:
общая характеристика
Простые ДНК-овые вирионы
252 капсомера
от 12 вершин икосаэдра – фибры (нити)
антигены:
группоспецифический (нуклеокапсид) – РСК
типоспецифические (нити=гемагглютинины) – РТГА, РН

Аденовирусные инфекции: патогенез
первичная репродукция
эпителиоциты слизистой
дыхательных путей
кишечника
конъюнктива
лимфоидная ткань
миндалин
мезентеральных лимфоузлов
▼
кровь
▼
эндотелий сосудов
▼
экссудативное воспаление слизистых оболочек
▼
фибринозные плёнки, некроз

Аденовирусные инфекции: клинические формы
ОРЗ
фарингоконъюнктивальная лихорадка
пневмонии (дети, пожилые)
(керато-)конъюнктивиты
гастроэнтериты
редкие аденовирусные поражения
менингоэнцефалиты
геморрагические циститы

Аденовирусные инфекции: следствия трансплацентарного инфицирования
внутриутробные заболевания
аномалии развития плода
смертельные пневмонии новорождённых

Аденовирусные инфекции: вирусологическая диагностика
Обнаружение Ag в респираторном эпителии (РИФ).
Выделение вируса
отделяемое носа, зева, конъюнктивы, faeces
▼
культура клеток
▼
РСК
▼
РН, РТГА
Выявление нарастания титра антител (РСК, РТГА, РН)