ВЛИЯНИЕ АКТИВНЫХ ФОРМ АЗОТА НА СВОЙСТВА НЕЙТРОФИЛОВ

Активные формы азота, кислорода, галогенов и т.д. играют важное значение в функционировании биологических систем в норме и при патологиях. К настоящему времени выявлен широкий круг заболеваний (более 100), связанных с окислительным или нитрозативным стрессом.
Среди них сердечно-сосудистые, аутоиммунные, опухолевые, нейродегенеративные заболевания, как например, атеросклероз, ревматоидный артрит, коллагенозы, дерматит, бронхиальная астма, болезни Альцгеймера и Паркинсона, цирроз печени, нефропатии и так далее

Формирование соединений кислорода и азота, обладающих высокой химической активностью, является проявлением нормального функционирования организма. Образование в организме активных форм азота, как и активных кислородных форм, строго контролируется и возникновение патологии связывают именно со срывом регуляции.

Нейтрофилы - клетки иммунной системы, выполняющие фагоцитарные, стимулирующие и секреторные функции с участием ферментов, генерирующих активные формы кислорода и хлора (АФКХ).
В ходе воспаления клетки моноцитарно-макрофагального ряда, эндотелия и другие могут продуцировать оксид азота. NO, взаимодействуя с супероксид анион- радикалом, приводит к формированию активных форм азота.
Таким образом, в ходе воспаления нейтрофилы могут подвергаться модулирующему действию пероксинитрита.

Цель работы и задачи исследования
изучить влияние пероксинитрита на генерацию активных форм кислорода и хлора нейтрофилами и повреждение этих клеток.
изучить влияние пероксинитрита на процессы генерации активных форм кислорода и хлора в нейрофилах с участием ферментов НАДФН-оксидазы и миелопероксидазы;
изучить действие пероксинитрита на секрецию миелопероксидазы из азурофильных гранул нейтрофилов.
изучить влияние пероксинитрита на процессы гибели клеток;
исследовать участие ферментов метаболизма липидов, а именно, фосфолипазы А2, липоксигеназ и циклооксигеназ в регуляции функционирования нейтрофилов при модулирующем воздействии пероксинитрита.

Рис. 2.1. Влияние SIN-1 в концентрациях 1мкмоль/л, 10 мкмоль/л на высвобождение ЛДГ из нейтрофилов.

Рис 2.2. Влияние SIN-1 в концентрациях 1мкмоль/л, 5 мкмоль/л, 10 мкмоль/л на секрецию МПО.

Рис. 2.3. Кинетические зависимости люминол-опосредованной ХЛ нейтрофилов при внесении SIN-1 в процессе адгезии клеток к стеклу
1
2
3
SIN-1

Рис. 2.4. Кинетические зависимости люминол-опосредованной ХЛ нейтрофилов при стимуляции клеток добавлением fMLP после внесения SIN-1
1
2
3
fMLP

Рис. 2.5. Кинетические зависимости люцигенин-опосредованной ХЛ нейтрофилов при внесении SIN-1 в процессе адгезии клеток к стеклу
3
1
2
SIN-1

Рис. 2.6. Кинетические зависимости люцигенин-опосредованной ХЛ нейтрофилов при стимуляции клеток добавлением fMLP после внесения SIN-1
2
3
1
fMLP

Рис 2.7. Влияние SIN-1 в концентрации 10 мкмоль/л на интенсивность хемилюминесценции в присутствии люминола нейтрофилами при адгезии клеток на стекло, при действии латекса и fMLP

Рис 2.8. Влияние SIN-1 в концентрации 10 мкмоль/л на секрецию МПО при действии ингибиторов.

Рис. 2.9. Влияние SIN-1 на интенсивность генерации АФКХ нейтрофилами при адгезии в присутствии и отсутствие ингибиторов

Выводы
SIN-1 (донор активных форм азота) в концентрациях 10-7 ÷ 10-5 моль/л не оказывает цитотоксического действия в отношении нейтрофилов.
В концентрации 10 мкмоль/л SIN-1 приводит к снижению генерации супероксидных анион-радикалов нейтрофилами и повышению генерации активных форм кислорода и хлора с участием миелопероксидазы в этих клетках в случае стимуляции клеток в процессе адгезии. При этом SIN-1 стимулирует усиление секреции миелопероксидазы из нейтрофилов в окружающую среду.

Выводы
Показано, что действие SIN-1 на способность нейтрофилов генерировать активные формы кислорода и хлора может быть связано с участием внутриклеточных ферментов, осуществляющих метаболизм арахидоновой кислоты и других липидов.