Алгоритм обследования при подозрения на гемолитическую анемию (осмотическая резистентность эритроцитов, кривая Прайс Джонса)

ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ

В норме минимальная осмотическая резистентность эритроцитов у взрослых людей колеблется между 0,48—0,46 %, максимальная — между 0,34—0,32 % физиологического раствора.
Отмечается снижение максимальной и минимальной осмотической стойкости эритроцитов . При наследственной микросфероцитарной анемии очень характерно, при аутоиммунной гемолитической анемии – мало характерно, а при наследственной дефиците Г-6-ФД- не характерно.

КРИВАЯ ПРАЙСА-ДЖОНСА
Измерение диаметра эритроцитов. Измерение диаметра эритроцитов и графическая регистрация распределения их по величине (кривая Прайс—Джонса) наиболее точно отражают вариации диаметра эритроцитов.
С этой целью в мазке крови с помощью окуляра- микрометра определяют диаметр 200 различных эритроцитов. Результаты распределяют по группам в зависимости от диаметра эритроцитов, выражают в процентах и наносят на координатную сетку. На оси абсцисс откладывают диаметры эритроцитов в микрометрах, а на оси ординат — найденные проценты эритроцитов того или иного диаметра.

Смещение вершины кривой влево свидетельствует о микроцитозе, вправо — о макроцитозе. Ширина основания кривой в норме 3—4 мкм.
Морфология эритроцитов. Для клинических целей морфологию эритроцитов лучше исследовать в мазках крови, окрашенных по Романовскому—Гимзе. Зрелые эритроциты при такой окраске представляют собой безъядерные округлые клетки розового цвета с центральным просветом, не содержащие включений. Поперечный диаметр их 7,2—7,5 мкм, толщина около 2 мкм.
При морфологическом исследовании эритроцитов в мазках крови нужно иметь в виду четыре основных морфологических признака: величину, форму, окраску, включения

Кривая Прайс — Джонса сдвинута влево.

ПРОБА ХЕМА
ХЕМА ПРОБА – основана на повышенной чувствительности эритроцитов больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией к кислой среде. Проба заключается в том, что к сыворотке донора, сопоставимой с сывороткой больного по АВО – системе антигенов, добавляют 0,2 нормальный раствор НСL (соотношение 9:1) . Далее десять объемов подкисленной сыворотки смешивают с одной объемом 50% суспензии отмытых эритроцитов. При ПНГ наступает гемолиз эритроцитов, в то время как нормальные эритроциты в этих же условиях не гемолизируются.

ПРОБА КУМБСА
Кумбса — антиглобулиновый тест для определения неполных антиэритроцитарных антител. Тест Кумбса используется для выявления антител к резус-фактору у беременных женщин и определения гемолитической анемии у новорождённых детей с резус-несовместимостью, влекущей разрушение эритроцитов.
Антитела, находящиеся на поверхности эритроцитов, могут быть как в статичном, так и в свободном состоянии в плазме крови. В зависимости от состояния антител проводится прямая или непрямая реакция Кумбса. Если есть основания для предположения, что антитела зафиксированы на поверхности эритроцитов, проводится прямой тест Кумбса. В этом случае тест проходит в один этап — добавляется антиглобулиновая сыворотка Если на поверхности эритроцитов присутствуют неполные антитела, происходит агглютинация эритроцитов
Непрямая реакция Кумбса протекает в 2 этапа. Сначала необходимо искусственно осуществить сенсибилизацию эритроцитов. Для этого эритроциты и исследуемую сыворотку крови инкубируют, что вызывает фиксацию антител на поверхности эритроцитов. После чего проводится второй этап теста Кумбса — добавление антиглобулиновой сыворотки.
Прямая реакция Кумбса
Непрямая реакция Кумбса

До настоящего времени проба Кумбса широко применяется в лабораторной практике для диагностики иммунопатологических состояний, в частности при аутоиммунных гемолитических анемиях, характеризующихся деструкцией эритроцитов вследствие связывания клеточной мембраны с антителами и (или) компонентами системы комплемента. С его помощью выявляют присутствие на эритроцитарной мембране Ig G (обычно Ig G1 и Ig G3), которые могут активировать комплемент, а иногда и комплемента (С3d). Однако в остром периоде заболевания в связи с разрушением эритроцитов, на которых фиксировалось большое количество антител, при гемолитическом кризе, а также при недостаточном количестве антител при хроническом течении болезни может отмечаться отрицательная прямая проба Кумбса