Диагностические сыворотки

Серологическая идентификация бактерий рода Бордетелла в реакции агглютинации на предметном стекле и в развернутой реакции агглютинации, дифференциация культур коклюшных и паракоклюшных микробов по видам и сероварам.

Серологическая диагностика коклюша и паракоклюша заключается в обнаружении в исследуемой сыворотке специфических антител. Исследования производят на 2 - 3 неделе заболевания, когда в крови больных появляются специфические антитела. В связи с широкой иммунизацией против коклюша результаты серологических реакций могут иметь диагностическое значение только при изучении их в динамике, исследуя парные сыворотки больного не менее чем 2 - 3 раза с интервалом 1 - 2 недели. Серологические реакции следует ставить параллельно с коклюшным и паракоклюшным диагностикумами.
Кровь для исследования можно взять из пальца (0,8 - 1,0 мл) с соблюдением обычных правил асептики. Вытекающую кровь собирают, приложив к месту укола оттянутый (не слишком тонко) конец короткой пастеровской пипетки. Кровь из пипетки выдувают в центрифужную пробирку, которую затем помещают на 10 - 15 минут в термостат. Образовавшийся сгусток отделяют от стенки пробирки и помещают ее в холодильник до отделения сыворотки. Сыворотку отсасывают пастеровской пипеткой, разводят физиологическим раствором 1:5 или 1:10, плотно закрывают пробкой и хранят в холодильнике.
В случае когда удается взять кровь в лишь небольшом количестве, ее набирают в количестве 0,2 или 0,5 мл и вносят в пробирку, куда предварительно наливают 1,8 мл стерильного физиологического раствора. После центрифугирования смесь сыворотки с физиологическим раствором (разведение сыворотки соответственно 1:20 или 1:10) переносят в стерильную пробирку и из нее делают последующие 2-кратные разведения (1:20, 1:40 и т.д.).
Наиболее доступна в условиях практических лабораторий реакция агглютинации.
Из исследуемой сыворотки готовят 9 - 10 последующих разведений: 1:5, 1:10 и т.д. до 1:1280 или 1:2560. В 10-ю (или 11-ю) пробирку наливают вместо сыворотки 0,25 мл физиологического раствора (контроль). Реакцию агглютинации ставят в объеме 0,5 мл: к 0,25 мл соответствующего разведения сыворотки добавляют 0,5 мл диагностикума. Пробирки помещают в термостат при 37° на 2 часа и оставляют затем при комнатной температуре. Результаты учитывают на следующий день с помощью агглютиноскопа. Конечным титром считают разведение, при котором отмечается четкая агглютинация на два креста (++), однако реакция учитывается как положительная лишь при наличии в предыдущих пробирках четкой агглютинации на четыре или три креста (4+ или 3+).
Диагностическим титром реакции агглютинации у непривитых и неболевших детей считают разведение 1:80. У иммунизированных детей и взрослых положительные результаты реакции учитывают только при исследовании парных сывороток крови, взятых с интервалом в 1 - 2 недели при нарастании титра не менее чем в 4 раза.
Существуют и другие серологические реакции (РПГА, РСК и люминесцентно-серологический метод), не применяемые из-за отсутствия коммерческих препаратов

Определение токсигенности возбудителя дифтерии в реакции иммунопреципитации в геле плотной питательной среды (Элек-тест).

Определение токсигенности in vitro (Элек-тест)
В его основе лежит взаимодействие токсина с антитоксином в агаровом геле. В местах оптимального количественного соотношения токсина и антитоксина в толще агара выпадает преципитат в виде тонких нежных белых линий ("стрелы", "усики"). Этот тест во многих странах за рубежом называют Элек-тестом. Пробу на токсигенность, как правило, проводят с чистыми культурами. Можно определить его и с культурами, загрязненными посторонней микрофлорой, в сутки ускоряет лабораторную диагностику дифтерии. Но при отрицательной пробе ее повторяют с выделенной чистой культурой.Для постановки этой пробы микробиологическая промышленность выпускает специальное сухое стандартное среду для определения токсигенности дифтерийных микробов (ВТДМ) и стандартные бумажные диски, пропитанные антитоксической противодифтерийной сывороткой и высушены.На поверхность свежеизготовленного среды ВТДМ накладывают бумажные диски с антитоксином (не более четырех на одну чашку). На расстоянии 0,5 см от диска вокруг него засевают культуры в виде "бляшек" диаметром 7-8 мм, чередуя "бляшки" изучаемой культуры и контрольного штамма Результаты учитывают через 18-24 и 48 год. Критерием специфичности преципитатов является слияние линий преципитации исследуемой культуры с линиями токсигенного штамма. В таком случае выделенную культуру считают токсигенных.
При отсутствии стандартных бумажных дисков можно использовать полоски фильтровальной бумаги, пропитанные дифтерийными антитоксином. их изготавливают непосредственно в лаборатории. Нарезанные по указанным размерам и простерилизованные в автоклаве при 121 ° С в течение 30 мин бумажные полоски смачивают 0,25 мл очищенного дифтерийного антитоксина, который содержит 500 МЕ в 1 мл. В таком случае на чашку с соответствующим средой накладывают смоченную антитоксином полоску бумаги, подсушивают, открыв чашку на 15-20 мин в термостате и перевернув ее вверх дном. После этого с обеих сторон полоски засевают культуры "бляшками", чередуя исследуемые и контрольные штаммы. На протяжении многих лет токсигенность дифтерийных бактерий определяли подкожно или внутрикожно введением культуры двум гвинейским свинкам, одной из которых накануне вводят 100-1000 МЕ антитоксической противодифтерийной сыворотки. Теперь этот метод бактериологические лаборатории практически почти не используют из-за дороговизны и значительную задержку ответа.

Сыворотка применяется для постановки реакции агглютинации на стекле и в пробирках.
Реакцию оценивают как положительную при просветлении жидкости и образовании мелкозернистого агглютината.
Исследуемую культуру относят к той О-группе, с сывороткой которой она вступает в реакцию до титра или не ниже половины титра сыворотки, указанного на этикетке.

Комплемент представляет собой сыворотку крови морских свинок, стабилизированную сернокислым магнием и высушенную методом лиофилизации.
Биологические свойства
Комплемент обладает способностью связываться с комплексом ан­тиген-антитело (бактериолитическая система) без видимых проявлений этой связи. При постановке РСК для визуализации реакции используется гемоли­тическая система, состоящая из эритроцитов барана (антиген) и гемолизина (антитела к эритроцитам барана), взаимодействующих в присутствии ком­племента с феноменом гемолиза эритроцитов, но только при отсутствии в бактериолитической системе комплекса антиген-антитело.
Комплемент не обладает гемолитической активностью, т.е. не вызывает гемолиза эритроцитов барана в отсутствии гемолитической сыворотки.
Применение
Комплемент титруют каждый раз в день постановки РСК в гемолитической системе в соответствии с наставлениями по постановке РСК при диагностике той или иной болезни. Для титрования комплемента из основного раствора готовят разведение 1:20 в количестве 2,0 см3 (0,01 см3 основного разведения комплемента + 0,19 см3 физиологического раствора).
Для приготовления гемолитической системы 2,5 %-ную взвесь эрит­роцитов барана в физиологическом растворе и раствор гемолитической сы­воротки, взятой в удвоенном титре, смешивают в равных объемах.
Подробнее см. наставление.

Пробиотики

Для изготовления препарата во флаконах и ампулах используют микробную массу живых бифидобактерий, лиофильно высушенную в защитной сахаро-желатино-молочной среде со средой выращивания. Одна доза препарата Бифидумбактерин во флаконах, ампулах, содержит 10^7.
Пробиотики
Бифидумбактерин применяется с целью нормализации микробиоценоза желудочно-кишечного тракта (коррекции микрофлоры кишечника), повышения неспецифической резистентности организма, стимуляции функциональной деятельности пищеварительной системы, для профилактики внутригоспитальных инфекций в родильных домах и больницах, обладает детоксикационными свойствами.
Перед употреблением препарат смешивают с жидкой частью пищи, желательно кисломолочной и дают перед едой. Можно смешать препарат с 30-50 мл кипяченой воды комнатной температуры и полученную взвесь выпить, не добиваясь полного растворения лактозы.

Лактобактерин - порошок для приготовления раствора для приема внутрь и местного применения:1 флакон содержит лактобактерии ацидофильные не менее 4 млрд КОЕ;
Пробиотики
Фармакологическое действие
Лактобактерин оказывает антибактериальное действие широкого спектра.
Показания
При заболеваниях желудочно-кишечного тракта:
- Реконвалесценты, перенесшие острые кишечные инфекции, при наличии дисфункций кишечника или выделении патогенных и условнопатогенных бактерий.
- Соматические заболевания, осложненные дисбактериозами, возникшими в результате применения антибиотиков, химиотерапии и других причин.
- Комплексное лечение ослабленных детей с заболеваниями инфекционной и неинфекционной этиологии, сопровождающимися дисбактериозами и атопическим дерматитом.
- Хронические колиты различной этиологии, в том числе неспецифические язвенные колиты
При заболеваниях женской половой сферы:
- Для санации половых путей при неспецифических воспалительных заболеваниях гениталий и предродовой подготовке беременных группы «риска» с нарушениями чистоты вагинального секрета до III-IV степени.
Противопоказания
Гиперчувствительность;
Кандидоз.
Побочные действия
Аллергические реакции.
Способ применения и дозы
Лактобактерин назначают внутрь за 30 — 40 минут до еды по 2 — 5 доз 2 раза в день. Длительность курса при острых заболеваниях 2 — 4 недели, при хронических — 4 — 6 недель и дольше. Препарат можно сочетать с антибиотиками! Перед применением препарат разводят кипяченой водой (1 доза в 1 чайной ложке).

Аллергены
Препарат представляет собой взвесь туляремийных микробов вакцинного штамма Fr tularensis, 15 линий НИИЭГ, убитых нагреванием в растворе натрия хлорида изотонического 0,9 % для инъекций.
Консервант-глицерин (3%). Выпускают в жидком виде.
Препарат содержит в 1,0 мл (10±1) млрд туляремийных микробных клеток, составляет 20 накожных доз.
Препарат не может быть использован для подкожного или внутрикожного введения, так как может вызвать бурную местную и общую реакции. Перед применением ампулу с препаратом необходимо несколько раз встряхнуть, пока содержащаяся в ней жидкость не станет равномерно мутной. Одну каплю препарата наносят на тщательно протертую спиртом кожу средней трети наружной поверхности левого плеча и оспопрививательным пером через нанесенную каплю делают на коже две параллельных насечки длиной 8-10 мм. Затем каплю препарата непродолжительное время втирают в насечки плоской стороной оспопрививательного пера.
Учет результатов накожной пробы производят врачи.
Через 24 часа проявляется краснота и отечность вокруг насечек, достигая максимума через 48-72 ч. После этого она постепенно угасает, исчезая полностью к 7-10-12 дню. На месте насечек к этому времени остаются лишь малозаметные следы. В редких случаях по линии насечек появляются везикулы, исчезающие через 2-3 дня.
Реакцию учитывают через 48 часов. Для оценки ее интенсивности реагирующий участок кожи, определяемый по границе красноты измеряют в сантиметрах поперек сделанных насечек. Реакцию считают положительной при величине реагирующего участка в 0,5 см и более или наличии вдоль насечек ясного покраснения и небольшой отечности (валика).