Энтеробактерии. Эшерихии, шигеллы, сальмонеллы

Общая характеристика энтеробактерий
Семейства энтеробактерий:
- небольшие, грамотрицательные, неспороносные палочки, подвижные или неподвижные, способны образовывать капсулу.
-Обладают свойством полиморфизма.
- Факультативные анаэробы, хемоорганотрофы, обладают дыхательным и бродильным типами метаболизма

-Хорошо растут на простых питательных средах, при температуре +37 оС.
Метаболически активны. Быстро ферментируют глюкозу с образованием кислоты или кислоты и газа.
Оксидазо-отрицательны, каталазо-положительны,
Восстанавливают нитраты до нитритов.

Способны вызывать:
заболевания желудочно-кишечного тракта, инфекции мочевыводящих, дыхательных путей, оппортунистические инфекции, а также раневые, внутрибольничные,
гнойно-воспалительные заболевания.

Патогенные эшерихии
Род Escherichia
E. coli
E.blattae
E.fergusonii
E.hermanii
E.vulneris

Морфология
прямые палочки размером
от 2 до 6 мкм.
В мазках располагаются одиночно или парами,
в старых культурах могут выглядеть как коккобактерии. Имеют пили, могут быть как подвижны, так и неподвижны.

Антигенная структура
Кишечные палочки различают по структуре поверхностных АГ.
Выделяют:
О- соматический (липополисахаридный),
Н- жгутиковый,
CFA- антиген колонизации
Ведущим является тестирование по О-АГ.

О-АГ
Термостабилен;
Липополисахарид;
Более 173 разновидностей (О1, О2, …);
Факторный состав:
‘а’ - общий фактор;
‘в’, ‘с’… - дополнительные
(О111 ав, O111ас, О128а, О128 ав, 128ас)

Н - антиген
жгутиковый антиген, белковый;
Термолабильный, 56 разновидностей (Н1, Н2…);
Свежевыделенные штаммы обычно слабо подвижны и обладают малым количеством Н-антигена.
CFA- антиген колонизации белковой природы,
связан с фимбриями

Классификация патогенных КП
по Аг свойствам и клиническим
проявлениям вызываемых ими заболеваний

Культуральные свойства
Хорошо растут на простых питательных средах, рН 7,0-7,4.
На плотных средах образуют плоские, выпуклые колонии, чаще S-формы серо-белого цвета.
На среде Эндо- яркие малиновые колонии с характерным металлическим блеском.
На среде Левина образуют темно-синие колонии с металлическим блеском,
на среде Плоскирева- бледно розовые.
На кровяном агаре могут образовывать зоны гемолиза.
В МПБ вызывают помутнение среды с образованием осадка.

Факторы вирулентности

Группы веротоксинов
веротоксины 1 (VT1, SLT1, Stx1)
веротоксины 2 (VT2, SLT2, Stx2).
Штаммы EHEC способны продуцировать либо только токсины первой (VT1) или второй группы (VT2), либо обе группы токсинов (VT1) и (VT2) одновременно.

Формы инфекционного процесса, обусловленного ЭГКП
Носительство
Неосложненная диарея
Геморрагический колит
Гемолитико-уремический синдром
Тромботическая тромбоцитопеническая пурпура

03:Н2; О15:Н18; О44:Н18; О111:Н21; О127:Н2;

Лабораторная диагностика
осуществляется
бактериологическим методом.
Материал для исследования:
Испражнения, рвотные массы, желчь, кровь, раневое отделяемое и др.

МУК 4.2.992-00 «Методы выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки E.coli O157:Н7»

Выделение и идентификация EГКП
Исследуемый материал засевают на дифференциально-диагностические плотные питательные среды:
МакКонки и Левина с антибиотиками: цефотаксимом (25 мкг/мл) и налидиксовой кислотой (4 мкг/мл),
- селективный агар с сорбитолом,
- а также на жидкие питательные среды для выделения и идентификации энтеробактерий
При исследовании классическим способом невозможно дифференцировать ЭГКП по культурально-ферментатив-ным признакам.

Выделение E.coli O157:H7
- Посев на дифференциальную среду с сорбитом
О157:Н7 не способна
ферментировать сорбитол.

Детальному исследованию на принадлежность к ЭГКП подлежат
Лактозоположительные и
Сорбитолотрицательные колонии.
Сорбитол- агар, обладает селективными и дифференциально- диагностическими свойствами в отношении ЭГКП.

Экспресс-диагностика
Автоматизированные системы:
API-20E, Enterotube, Laxema или отечественные «микроген» и др.
ИФА- обнаружение типа энтеротоксина
ПЦР для обнаружения генов вирулентности.

РЛА с применением антительной латексной тест-системы для индикации эшерихий (серогруппы O104).
РОПЛА (реакция обращенной пассивной латексной агглютинации), давшие положительную реакцию агглютинации, изоляты анализируют с помощью мультиплексной ПЦР-тест-системы

Специфическое лечение
биопрепаратами: бифидумбактерин, лактобактерин, коли-протейный бактериофаги др.
Перед их приемом необходимо снижать кислотность желудочного сока
( минерально-гидрокарбонатная вода)

Лечебные фаги: коли-протейный бактериофаг, колифаг, интести-фаг, сальмонеллезный бактериофаг, дизентерийный и др.
Препараты для коррекции микрофлоры кишечника: бифидумбактерин форте, пробиформ, бифиформ и др.

Возбудители дизентерии
Морфология

Международная классификация шигелл

Серовар -шигелла Григорьева-Шига, (ИД- 10 микробных клеток), наиболее патогенен из всех известных дизентерийных микробов.
Shigella Flexneri - менее патогенный возбудитель. Для инфицирования требуется около 100 микробных клеток, но этот вид более устойчив во внешней среде

Shigella Sonnei - самая устойчивая из всех возбудителей дизентерии, размножается в продуктах питания ИД- 10 млн. клеток.

Культуральные свойства
Факультативные анаэробы. Температурный оптимум роста 37 градусов.
На плотных средах образуют гладкие и шероховатые колонии (R-формы), полупрозрачные.
Дифференциально-диагностическим является рост на средах Эндо, Плоскирева, среде Мак-Конки- образуют бесцветные колонии.

Лабораторная диагностика
Бактериологический метод диагностики - :
исследование фекалий с последующим выделением и идентификацией возбудителя.
Для ускоренной диагностики
РИФ , ИФА, иммуноадсорбцию
Серологическое исследование- дополнительное:
РНГА;
развернутая реакция агглютинации

Импортные среды
Слабая селективность
MacConkey
Eosin methylene blue agar
Tergitol- agar
Средняя селективность
Desoxycholate agar
Xylose-lisine-desoxycholate
agar
Высокая селективность
Salmonella-Shigella agar
Hektoen agar

На жидких средах
S- формы колоний дают равномерное помутнение,
R-формы- придонный осадок, при этом среда остается прозрачной.

Биохимические свойства
хемоорганотрофы с дыхательным и ферментативным метаболизмом. Оксидазо-отрицательны, каталазоположительны.
Углеводы разлагают с образованием кислоты. Не ферментируют лактозу, не образуют сероводорода.
Sh. dysenteriae –не ферментируют маннит,
Представители серогрупп В,С,Д- маннит-положительны.
Наиболее биохимически активны Sh.sonnae, которые медленно ( на 3-4 сутки)сбраживают лактозу

Дифференциация шигелл по биохимическим свойствам

Внутривидовое типирование шигелл
Биотипирование
Определение биохимической активности по отношению к отдельным углеводам
Колициногенотипирование
Определение спектра продуцируемых колицинов
Колицинотипирование
Определение спектра колицинов, к которым чувствительна данная культура

Лабораторная диагностика
Основной метод диагностики - бактериологический:
исследование фекалий с последующим выделением и идентификацией возбудителя по биохимическим и серологическим свойствам
(в РА с поли- и моновалентными сыворотками и определением чувствительности к бактериофагам.

Для ускоренной диагностики
Используют:
РИФ , ИФА, иммуноадсорбцию
Серологическое исследование- дополнительное, когда не удается выделить культуру возбудителя при наличии клинической картины или в тех случаях когда больной принимал антимикробные препараты.

Серологическая диагностика
РНГА (диагностический титр 1/200);
развернутая реакция агглютинации с моновалентными диагностикумами (дизентерийный Видаль). Кровь нужно брать с 5-го дня максимальные титры на 2-й неделе болезни.
Исследование проводится в динамике.

Этиотропная терапия
нитрофурановыми препаратами (фуразолидон),
Возможно применение других антимикробных препаратов (триметоприм).
К антибиотикам часто формируется резистентность.

Специфическая терапия
проводится поливалентными бактериофагами
( в сухом, жидком виде или свечей)

Сальмонеллы
Сем: Enterobacteriaceae
Род: Salmonella
Вид:
Salmonella enterica
subsp. choleraesuis
subsp. salamae
subsp. arizone
subsp. diarizonae
subsp. houtenae
subsp. Indica
Salmonella bongori

Морфология
Сальмонеллы -подвижные, грамотрицательные палочки размером 1-5 мкм, перитрихи, спор и капсул не образуют.
Могут образовывать атипичные, фильтрующиеся L-формы бактерий. В мазках располагаются одиночно, беспорядочно

Антигенная структура
О-антиген (соматический, термостабильный )
Разрушается под действием фенола.
О-АГ состоит из R-ядра и S- полисахаридной цепи. Глубинные АГ клеточной стенки:
Q- и T- белковые, R1 и R2- полисахаридные
Н-антиген (жгутиковый), белковый, термолабилен, (двухфазный) разрушается при кипячении.
поверхностные: Vi-антиген - и М-антиген
М-антиген- кислый полисахарид, разрушается кислотой и этанолом, не растворим в воде, слабый антиген.

Vi-антиген обладает иммуногенными свойствами.
B зависимости от его количественной выраженности выделяют V - или W- формы антигена.
Vi-антиген V- формы - не агглютинируется О- сыворотками
Vi-антиген W- формы- агглютинируется О- сыворотками

Классификация сальмонелл
предложена в 1934 г Ф.Кауфманом и Уайтом (основана на АГ- свойствах).
Внутри 6 подвидов сальмонеллы разделены по О-АГ на серологические группы, от 1 до 67 (от А до Z и цифрами ).
Групп С (подгруппы С1, С2,С3,С4).
В состав группы входит до нескольких десятков сероваров сальмонелл.

По набору специфических Н-АГ сальмонеллы делят на фазы.
Первая фаза содержит Н-АГ специфичные для данного серовара. Она выделена строчными буквами латинского алфавита.
Вторая фаза- неспецифическая, обозначают буквами или цифрами.
У большинства сальмонелл обнаруживаются обе фазы Н-АГ. Сальмонеллы имеющие одну из фаз неподвижны.

Биохимические свойства
факультативные анаэробы, расщепляют глюкозу с образованием кислоты или кислоты и газа.
Дифференцируют по отношению к углеводам: манниту, мальтозе, арабинозе, сорбиту.
Утилизируют аммиак, образуют сероводород, содержат декарбоксилазы аминокислот: лизин-, орнитин-, аргинин- , оксидазо “-“.

Культивирование сальмонелл
Оптимум роста 35- 37 оС , рН 4,1-9,0.
Угнетают рост сальмонелл высокие концентрации соли и сахара. Хорошо растут на средах с добавлением желчи. На висмут-сульфит агаре сальмонеллы образуют черные колонии с характерным металлическим блеском.

Рост сальмонелл на XLD Medium и Hektoen Enteric Agar
XLD MEDIUM, S.enteritidis
HEKTOEN ENTERIC AGAR, S.typhimurium
THE OXOID MANUAL, 1995

Патогенез тифо-паратифозных заболеваний
Инкубационный период составляет от 10-14 дней до 3 нед.
Попадание микроба в рот, возможно внедрение в лимфатические образования глотки с развитием катарального воспаления.
Далее микробы попадают в желудок, частично гибнут и проходят в тонкую кишку, где есть все благоприятные условия для развития сальмонелл (щелочная среда и др.)

микробы проникают в лимфатические образования тонкой кишки (пейеровы бляшки), где активно размножаются.
Микробы накапливаются и лимфогенно проникают в мезентериальные лимфатические узлы.
Все это происходит в инкубационном периоде (от 10-14 дней до 3 недель), клинических проявлений нет.

В результате развивается гиперплазия лимфоузлов, образование гранулем с крупными тифозными клетками, а в последующем и других органах.
Накопление возбудителя и прорыв в ток крови с развитием бактериемии.
С этого момента появляются клинические признаки заболевания.

Под действием факторов крови микробы частично погибают и освобождаются эндотоксины.
Эндотоксинемия клинически проявляется симптомами интоксикации, лихорадкой, поражением ЦНС.
Эндотоксины действуют на сосуды приводя к микроциркуляторным нарушениям, перераспределению крови.

С током крови микроб разносится в различные ткани: поражается печень (наиболее часто), селезенка, костный мозг и кожа.
В этих органах образуются вторичные очаги воспаления и также образуются брюшнотифозные гранулемы.
Из этих очагов и из мест первичной локализации периодически микробы поступают в кровь, поддерживая бактериемию,

фаза выведения возбудителя из организма. Начинается примерно со 2 недели. Микроб выделяется в окружающую среду через почки, печень и желчевыводящие пути в кишечник.

Повторно попадая в кишечник, сальмонеллы проникают в ранее сенсибилизированные лимфоидные образования, что приводит к развитию аллергической реакции в тонкой кишке (феномен Артюса).
В кишечнике идет образование язв, возможна перфорация.

Лабораторная диагностика
Бактериологический метод - выделение чистой культуры возбудителя, ее идентификация до вида и последующее определение внутривидовых эпидемиологических маркеров

Лабораторная диагностика
Материал для бактериологического исследования
кровь
испражнения,
моча,
желчь (дуоденальное содержимое).

Получение гемокультуры и миелокультуры
С этой целью кровь или пунктат костного мозга засевают на среду Рапопорта в соотношении 1:10.
Посевы инкубируют при 37 оС в течение 8 дней, а с учетом выделения L-форм бактерий – до 3-х недель.

Серологические методы диагностики
Развернутая РА с моновалентными диагностикумами для обнаружения О-АТ и Н-АТ против возбудителя брюшного тифа и паратифов А и В.
РПГА с эритроцитарным диагностикумом.
Для ускоренной диагностики используют:
реакции ко-агглютинации, РИФ, ИФА, ДНК-зондирование.

Специфическая профилактика
В настоящее время применяется химическая сорбированная брюшнотифозная вакцина ( по эпидпоказаниям), спиртовая брюшнотифозная вакцина обогащенная Vi-АГ, брюшнотифозная ви-полисахаридная вакцина S.typhi:
ВИ-АНВАК(Россия) с 3-х лет,
ТИФИМ Ви (Франция) с 5 лет.
Продолжительность поствакцинального иммунитета -3 года.

Контактным лицам, при опасности возникновения заболевания назначают брюшнотифозный бактериофаг.
Этиотропная терапия применяют левомицетин (препарат выбора), ампициллин, фторхинолоны и др.