Микробиологическая диагностика дифтерии

Цель
Научится применять полученные знания по общей микробиологии в частной на примере возбудителей анаэробной инфекции, используя знание механизма развития данных инфекций в организме человека и основных методов микробиологического исследования.

I. Вопросы для обсуждения
1.Обсуждение теоретических и практических вопросов по теме занятия по общепринятой схеме.
II.Практическая работа:
1. Демонстрационный материал:
а) наглядные пособия: стенд-информация по теме: «Возбудитель дифтерии».
б) морфология дифтерийных палочек в мазках, окрашенных по Леффлеру
и Нейссеру;
в) характер колоний дифтерийных палочек на средах Леффлера,
теллуритовой среде Клауберга;
г) ферментативные свойства дифтерийных палочек (демонстрация);
д) определение токсигенности методом Оухтерлони;

2. Этапы бактериологического метода исследования при дифтерии:
-ознакомление с бланками анализа;
-приготовление мазка с тампона, окраска по методу Нейссера,
микроскопия;
- посев исследуемого материала на теллуритовый агар.
3. Дать заключение о способах приготовления и использования АД, ДС, АДС, АКДС, токсина Шика, противодифтерийной сыворотки.

III. Вопросы для самоподготовки:
а) Какие микробиологические методы применяются для диагностики дифтерии?
б) Какой материал берется для исследования при подозрении на дифтерию и при
обследовании на бактерионосительство?
в) Какие морфологические признаки присущи дифтерийной палочке?
г) По каким признакам дифференцируют типы гравис, митис и интермедиус?
д) По каким биохимическим признакам отличают дифтерийную палочку от
дифтериоидов?
е) Какими методами и как определяют токсигенность возбудителя дифтерии?
ж) Каковы пути и способы заражения дифтерией?
з) Как и с какой целью ставят пробу Шика?
и) Почему для микробиологической диагностики дифтерии необходимо
выделение чистой культуры возбудителя и изучение его свойств?
к) Какие медикобиологические преппараты применяют для специфической
профилактики дифтерии?
л) Какими факторами патогенности обладает возбудитель дифтерии?
м) Что поражает (какие органы и системы органов) дифтерийный токсин?
н) Каковы природа и структура дифтерийного токсина?
о) Каким образом возможно превращение нетоксигенной дифтерийной бактерии
и токсикогенную?

Историческая справка
Впервые возбудитель был обнаружен на срезах пленок, полученных из ротоглотки больных в 1883 г. Эдвином Клебсом.
Через год Фридрихом Лёффлером была
выделена чистая культура.
Дифтерийный токсин получили Э. Ру и А. Иерсен .
Анатоксин обнаружил Рамон Гастон в 1923 г. и предложил использовать его для активной иммунизации

Дифтирия
Острое инфекционное заболевание, которое характеризуется фибринозным воспалением местах входных ворот, чаще в зеве и гортани, а также токсическим поражением сердечно-сосудистой и нервной системы.

Таксономия
Семейство: Сorynebacteriaceae
Род: Сorynebacterium
Вид: C. diphteriae

Морфология и тинкториальные свойства

Культуральные свойства
Условия оптимального роста
Наличие О2
Питательная среда МПБ
Длительность культивирования 24 часа
Равномерное помутнение или на поверхности нежная пленка, постепенно утолщаясь крошится оседает на дно
Ру, Леффлера-колонии мелкие выпуклые серовато-беловатые или желтовато-кремовые гладкие или слегка зернистые
Характер роста
35-37⁰С
pH 7-7,8
Пит.среда –Ру, Леффлера, кровяной агар с теллуритом

Биохимические свойства
Ферментация
Углеводов
(до кислот)
Индол
Выделяют
Не разжижают
Не разлагают
Не выделяют
Желатину
Сероводород
Мочевины
Белка
Свободных аминокислот
Азотсодержащих соединений
Глюкозы
Мальтозы
Крахмала
Гликогена

Резистентность
К 60⁰С- через 15-20 минут
К дез. раствору- через 10-15 минут
В высушенном состоянии- длительное время
В мелкодисперсном аэрозоле- 24-48 часов
В пыли до 5 месяцев
К 100⁰С через 2-3 минуты
Устойчивы
Чувствительны

Факторы патогенности
Факторы
Адгезия
Колонизация
Гиалуронидаза, нейроминидаза, протеаза
Токсический гликолипид в клеточной стенке
Экзотоксин
Прикрепление к слизистой
Размножение на поверхности слизистой
Обеспечивают инвазию
Проникновение через слизистую в ткань
Инвазия
Выделение экзотоксинов в кровь
Действие- в местах размножения возбудителя
Поражение клеток тканей в различных органах
Ингибирует белковый синтез
Демиелинизация нервных волокон

Эпидемиология
Дифтерия-это антропонозное заболевание.
Источники инфекции: -больной(острая, стертая, атипичная форма);
-здоровый бактерионоситель.
Пути передачи: -воздушно-капельный
-контактно-бытовой(игрушки, белье и др.)
-алиментарный(молоко и т.д.)

Патогенез
Клинические формы
Локализованная
(местная)
Распространенная
(генерализованная)
Зев, нос, глаза
Высокая
Низкая
Медленное
Поступление токсина в ткани из мест локализации
Способность фиксировать токсин клетками в местах локализации
Активность факторов распространения(гиалуронидаза, нейраминидаза)
Сердце, почки, печень, ЦНС
Быстрое
Низкая
Высокая

Иммунитет
После перенесенного заболевания формируется длительный и напряженный гуморальный антитоксический иммунитет.
В отличии от него, антибактериальный иммунитет при дифтерии ненапряженный и серовароспецифичный.
Наличие антитоксического иммунитета не препятствует формированию носительства токсигенных штаммов C.diphtheria.

Лабараторные методы диагностики
Показания
Наличие острых воспалительных явлений в носоглотке, при подозрении на дифтерию- обследуют взрослых и детей.
Эпидемиологические- обследуют взрослых и детей бывших в контакте с больными.
Профилактические- обследуют вновь поступающих в школы, детские дома, интернаты и т.д.
Тампон № 1 Тампон № 2
Забор материала Забор материала
Мазок, микроскопия 3-5 часов в термостате (37⁰)
Мазок, микроскопия
Тампоны со свернутой лошадиной сывороткой

Материал для исследования
Слизь из зева и носа, пленки миндалин и носоглотки и др.
Бактериоскопический метод
Бактериологический метод
Люминесцентная, иммунофлюоресц. микроскопия
Микроскопия формы ,цвета при окраске по Грамму, Леффлеру, Нейссеру, взаимного расположения бактерий
Микроскопия
Свернутая сыворотка
По биохимическим свойствам
По токсигенным свойствам
Характер колоний
Идентификацияя
Свернутый сывор. кровяной агар, среда Клауберга