Микробиологическая-диагностика эшерихиозов

Эшерихиозы – заболевания, вызываемые E. coli – кишечной палочкой. Кишечная палочка – Escherichia coli – является основным представителем рода Escherichia, относящегося к семейству Enterobacteriaceae.

орально-фекальный – после контакта с зараженными фекалиями водой и почвой, а также с овощами, которые на ней выросли;
контактно-бытовой – от больного человека через предметы общего пользования (такой способ менее распространен, нежели первый);
из воспаленных органов мочеполовой системы;
передача E. coli от матери ребенку во время родов.
Вспышки кишечной палочки имеют сезонный характер. Чаще эпидемии встречаются в летние месяцы. Основные пути инфицирования:

Морфология
Е. coli — мелкие грамотрицательные палочки длиной 2—3 мкм, шириной 0,5—0,7 мкм с закругленными концами, в мазках располагаются беспорядочно; не образуют спор, некоторые штаммы имеют микрокапсулу; перитрихи; кроме жгутиков, иногда обнаруживаются пили.

Бактериологическое исследование
Является ведущим в диагностике эшерихиозов.
Фекалии засевают на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний.

Из последних порций испражнений тампоном берут часть фекалий в пробирку с транспортной средой (30 % глицерина и 70 % фосфатного буфера) или непосредственно возле кровати больного делают посев на среду Эндо. При этом небольшое количество фекалий эмульгируют в 0,85 % растворе хлорида натрия в соотношении 1 : 10. Через несколько минут после оседания грубых остатков 1-2 капли жидкости вносят на поверхность среды и стеклянным шпателем растирают ее на небольшом участке. Оторвав шпатель от агара делают посев на остальную поверхность среды. Если возникает потребность посеять на вторую и третью чашки, материал наносят повторно. После инкубации в термостате при 37 0С в течение суток изучают характер роста на элективно-дифференциальных средах. На агаре Эндо колонии имеют дисковидную форму, слегка выпуклые с ровными краями, малиново-красного цвета.

Для отбора подозрительных колоний применяют метод серотипирования.
Учитывают ферментацию лактозы и глюкозы (пожелтение и разрыв столбика и скошенной части агара), выделение Н2S (образование черного кольца на границе столбика и скошенной части).

Материал из лактозоположительных колоний используют для постановки реакции агглютинации на стекле со смесью ОВ-сывороток, содержащих антитела против наиболее распространенных сероваров патогенных эшерихий. Обычно проверяют на агглютинабельность не менее 10 колоний с каждой чашки. При положительном результате ставят реакцию с моноспецифическими сыворотками: О26:В6, О55:В5, О111:В4, О124: В 17 и др., после чего делают предварительное заключение. Затем пересевают несколько агглютинабельных колоний на скошенный питательный агар для получения чистых культур. На 3-й день проверяют агглютинабельность чистых культур в реакции на стекле с ОВ-сыворотками. При положительном результате ставят развернутую реакцию агглютинации с соответствующей ОВ-сывороткой.

На среде МакКонки колонии E.coli окрашиваются в розовато-красный цвет.

Колонии лактозонегативных бактерий, не изменяя цвета среды, растут бесцветными и прозрачными. Расщепляющие лактозу бактерии образуют ярко-красные колонии с зоной помутнения вокруг. Агар вокруг колонии мутнеет от взаимодействия желчной соли и кислоты, образовавшейся при сбраживании лактозы.

В ряде лабораторий применяют люминисцентно-серологический метод исследования с использованием иммунофлюоресцирующих сывороток, позволяющих получить предварительный ответ через 1-2 часа после начала исследования.
Экспресс-методы диагностики

Вспомогательный метод – серологический: ставят РНГА (реакцию непрямой гемагглютинации) с сывороткой больного, начиная с 3-5 дня болезни, изучают нарастание титра антител в динамике заболевания.
При молекулярно-биологических исследованиях материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.

Профилактика и лечение
Основное значение имеет соблюдение санитарно-гигиенических правил там, где имеется опасность распространения патогенных эшерихий.
Для лечения заболеваний, вызванных кишечными палочками, используют биологические препараты из микробов-антагонистов — бифидумбактерин, лактобактерин.
Кишечные палочки чувствительны к ряду антибиотиков (тетрациклин, левомицетин) к нитро-фурановым препаратам. Однако в последние годы увеличилось число устойчивых к антибиотикам штаммов эшерихий, выделяемых как от здоровых, так и больных людей. Приобретение резистентности обусловлено передачей R-плазмид.