Современная серологическая диагностика сифилиса

Автор:
Попов В.Е.
У 2000
Анимация:
Хруслов М.В.
Г.

Ингредиенты реакции:
Антигены
Испытуемая сыворотка
Эритроциты барана
Гемолитическая сыворотка
Комплемент

Антигены делятся на:
* специфические
и
* неспецифические

К специфическим антигенам относят:

Взвесь патогенной тканевой бледной трепонемы из пораженного яичка кролика, зараженного сифилисом.

В реакции Вассермана набольшее распространение получила культуральная трепонема штамма Рейтер, обработанная ультразвуком (соникат).

К неспецифическим антигенам относят кардиолипиновый антиген.

Кардиолипин –
очищенный экстракт из мышц бычьего сердца; антиген отличается высокой чувствительностью, особенно при скрытых формах сифилиса; широко применяется во всем мире в серодиагностике сифилиса.

Антигены для реакции Вассермана должны удовлетворять следующим требованиям:

- не вызывать гемолиза эритроцитов;

- не инактивировать и не адсорбировать комплемент;

- не образовывать с сывороткой здоровых лиц комплекса, способного адсорбировать комплемент;

- при добавлении антигена в оптимальной дозе к сыворотке больных сифилисом образовывать комплекс, адсорбирующий комплемент.

Схема RW
Аг + Сыворотка
Гем. сыв. + Эритр. барана
C3
C3
C3
C3
Комплемент
Опыт
Индикаторная система

Положительная RW
Аг + Сыворотка
Гем. сыв. + Эритр. барана
C3
C3
C3
C3
Комплемент связался сывороткой больного и антигеном
Опыт
Индикаторная система
+
+
+
+

Отрицательная RW
Аг + Сыворотка
Гем. сыв. + Эритр. барана
C3
C3
C3
C3
Комплемент не связался сывороткой больного и антигеном
Опыт
Индикаторная система
+
+
+
+

Механизм
положительной
RW

(Ig)
(Treponema pallidum)
Антиген
Антитело

Ig
Образование иммунного комплекса

Присоединение к иммунному комплексу комплемента

Не разрушает эритроциты барана
Связавшийся комплемент

Гемолиз отсутствует,
RW (+) положительная

Положительная реакция Вассермана
2+
3+
4+
4+
4+

Резко положительная реакция Вассермана
4+
4+
4+

Механизм
отрицательной
RW

Эритроцит барана
Гемолитические Ig
Не связавшийся исследуемой сывороткой комплемент

Комплемент соединяется с гемолитической системой

Наступает гемолиз эритроцитов

Наступает гемолиз эритроцитов

Наступает гемолиз эритроцитов

Наступает гемолиз эритроцитов

Гемолиз эритроцитов,
RW (-) отрицательная

RW ( - )
отрицательная
Гемолиз

Методика постановки реакции.

Испытуемая сыворотка по классической методике реакции Вассермана предварительно прогревается 30 минут при t0 560 для инактивирования комплемента и стабилизации глобулиновых фракций.

Перед постановкой основного опыта минимальная доза комплемента, вызывающая гемолиз при добавлении гемолитической системы, оттитровывается в присутствии антигена и сыворотки здорового человека

Каждый из пяти ингредиентов реакции добавляется в одинаковом объеме.

Точность разливки ингредиентов реакции имеет первостепенное значение.

Для этих целей используется аппарат Флоринского, с помощью которого за 20 минут можно осуществить строго дозированную разливку 200 сывороток.

Для обеспечения оптимальных условий фиксации комплемента на образующемся комплексе (в случае взаимодействия исследуемой сыворотки с антигеном) смесь сыворотки, антигена и комплемента выдерживают в термостате в течение 45-60 минут.
[1-я фаза реакции]

После чего добавляют гемолитическую систему, и пробирки вновь помещают в термостат.

2-я фаза реакции

Учет реакции производят при наступлении гемолиза в контрольных пробирках основного опыта.

Для уточнения диагноза проводят специфические серологические реакции.

Специфические серологические реакции:

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Противотрепонемные антитела выявляются с помощью меченных флуоресцеином антител против глобулинов человека

Люминисцентная микроскопия
(РИФ)

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Противотреонемные антитела выявляются с помощью цветной реакции, которая проявляется в присутствии пероксидазы хрена