Возбудители капельных инфекций (Haemophilus influenzae)

Род Haemophilus
Cем.Pasteurellaceae состоит из 16 видов
2 вида патогенны для человека:
H.influenzae(возбудитель воспалительных процессов дыхательных путей)
H.ducreyi(возбудитель мягкого шанкра)

Морфология Haemophilus
короткие палочки кокковидной формы размерами 0.3-0.4х1.0-1.5 мкм
Иногда располагаются короткими цепочками, чаще-поодиночке. Полиморфны, могут образовывать нити( в зависимости от условий культивирования), неподвижны, спор не имеют.

Haemophilus
Гемофильные бактерии образуют колонии, растущие на питательных средах с добавлением крови или её препаратов. Для нормального развития гемофилам нужны ростовые факторы X и V. Фактор X содержится в эритроцитах в виде термостабильной группы тетрапирролов, входящих в состав гематина и гемина.
Фактор V — термолабильный кофермент (включает НАД или НАДФ), продуцируемый многими бактериями, а также присутствующий в эукариотических клетках. Большинство видов гемофил относят к облигатным паразитам слизистых оболочек человека.

Дифференциальные признаки бактерий рода Haemophilus
Внутри рода гемофил дифференцируют по потребности в факторах роста и биохимическим свойствам . Фактор V синтезируют некоторые бактерии (например, сарцины, стафилококки и др.), поэтому для культивирования гемофилов часто используют так называемые «бактериальные кормилки», выполняя посев рядом с колониями бактерий, выделяющих фактор V.

Палочка инфлюэнцы. Haemophilus influenzae..

Haemophilus Influenzae Type b

История открытия
В 1889 г. М.И. Афанасьев и в 1892 г. Р. Пфейффер и С. Китасато при изучении этиологии гриппа из мокроты больных выделили мелкие палочковидные грамотрицательные микроорганизмы. Выделенные бактерии, которые впоследствии были включены в род Haemophilus, долгие годы считались возбудителем гриппа. При дальнейшем их изучении было установлено, что они не являются возбудителями гриппа, а способны вызывать различные воспалительные процессы.

Haemophilus influenzae
Палочка инфлюэнцы представлена небольшими (коккобациллами, располагающимися в мазках одиночно или короткими цепочками. Бактерии хорошо растут в аэробных условиях. Свежевыделенные бактерии имеют капсулу. Haemophilus influenzae способны образовывать капсулу в организме человека и на питательных средах. (Выявляется при окрашивании фуксином Пфейфера 5-15 минут) Спор не образуют.

Эпидемиология палочки инфлюэнзы. Распространенность палочки Афанасьева-Пфайффера
Палочка инфлюэнцы патогенна только для человека. В большинстве случаев палочка инфлюэнцы локализуется в носоглотке. Среди здоровых лиц носительство может достигать 90%-локализация на слиз.обол.верхних дых.путей,в полости рта, среднего уха,слиз. оболочка влагалища.; у 3-5% отмечают носительство капсулированных штаммов, преимущественно типа b.
Заболевания, вызываемые Haemophilus influenzae, регистрируют повсеместно, а во многих странах они эндемичны.
Ежегодно (с частотой 1:2000) регистрируют менингиты, вызванные палочкой инфлюэнцы типа b. Наиболее восприимчивая группа — дети в возрасте от 3 мес до 6 лет. Для детей от 3 мес до 3 лет вероятность развития системных форм, вызванных сероваром b, после контакта с первичным больным в 6000 раз вышe, чем для других возрастных групп.
Основные пути передачи палочки инфлюэнцы — воздушно-капельный и контактный.
При снижении реактивности организма на фоне других заболеваний-гриппа развивается аутоинфекция.

Haemophilus influenzae
Среда обитания
Слизистые оболочки верхних дыхательных путей здорового человека.
Заболевания:
При ослаблении устойчивости организма она может вызвать менингит( также у ослабленных детей),бронхит,пневмонию,гнойный плеврит,трахеит, ларингит,конъюктивит, отит….

Культуральные свойства
Haemophilus influenzae
Факультативные анаэробы, оптимальная температура для их роста +37С
Содержание Г+Ц в ДНК 39-42мол%
Самостоятельно лизировать эритроциты палочка инфлюэнцы не способна.
Обязательное условие роста палочки инфлюэнцы — присутствие в питательной среде свежей крови. Перед внесением в среду кровь прогревают при 80 °С в течение 15 мин, что способствует высвобождению факторов из эритроцитов и разрушению сывороточных ингибиторов, инактивирующих фактор V.

Культуральные свойства
На шоколадном агаре колонии Haemophilus influenzae вырастают через 36-48 часов и достигают диаметра 1 мм.
На кровяном агаре с добавлением сердечно-мозгового экстракта через сутки вырастают мелкие,округлые, выпуклые колонии с радужными переливами.
На жидких средах с добавлением крови наблюдается диффузный рост.Иногда образуются белесые хлопья и осадок на дне.
Особенность колоний –сателлитный рост вблизи стафилококков
Пневмококки-ингибиторы роста палочки инфлюэнцы.
На ША капсулосодержащие штаммы И. influenzae формируют слизистые М-колонии (сочные, сероватые, с радужными переливами) либо полупрозрачные блестящие S-колонии диаметром 3-4 мм.
Некапсулированные штаммы палочек инфлюэнцы на твёрдых питательных средах формируют более мелкие зернистые R-колонии, с неровным краем, серовато-белого цвета.

Биохимические свойства
Haemophilus influenzae
Сахаролитические свойства выражены слабо и непостоянно.
Обычно ферментируют с образованием кислоты рибозу, галактозу, глюкозу, обладают уреазной активностью, имеют щелочную фосфатазу, восстанавливают нитраты в нитриты.
По способности образовывать уреазу, индол, орнитиндекарбоксилазу Haemophilus influenzae подразделяют на 6 биоваров (I-VI)

Антигены Haemophilus influenzae
У палочки инфлюэнзы выделяют К- и О-антигены. Видовая антигенная специфичность обусловливается капсульным полисахаридом. Капсульные штаммы на основании различия в капсульном полисахариде разделяются на несколько сероваров: а, b, с и т.д. Некапсульные штаммы имеют только термостабильный соматический антиген. Наиболее часто из организма выделяются штаммы серовара b.
Основную эпидемическую опасность представляет палочка инфлюэнцы типа b. Некапсулированные штаммы неоднородны по набору антигенов; один из них, антиген М, имеет белковую природу и присутствует у всех штаммов.
AT к капсульным антигенам оказывают защитное действие, а их недостаток увеличивает риск развития менингита, особенно у детей в возрасте 3-24 мес (для них характерен дефицит AT), а также у более старших детей и подростков после спленэктомии.

Факторы патогенности Haemophilus influenzae
Основные факторы патогенности палочки инфлюэнцы — капсула и пили, затрудняющие поглощение бактерий фагоцитами и облегчающие адгезию к слизистой оболочке верхних отделов дыхательных путей.
Позднее бактерии инфлюэнцы проникают в подслизистую оболочку, вызывая воспалительную реакцию. Штаммы инфлюэнцы, обладающие высокой вирулентностью, могут мигрировать в лимфо- и кровоток.
Патогенность проявляется при разрушении бактер.клетки, когда выделяется термостабильный эндотоксин.Экзотоксин не продуцируют.

Устойчивость возбудителя
Haemophilus influenzae
Возбудитель малоустойчив во внешней среде. Погибает под действием солнечных лучей, УФ, дезинфицирующих средств.
При 60 С погибает через 5-10 минут.

Иммунитет
Дети первых 3 мес.жизни мало восприимчивы к возбудителю инфлюэнцы, у них в сыворотке присутствуют АТ, переданные через плаценту от матери. Впоследствии они исчезают, ребенок становится восприимчив к возбудителю. Инфекция может протекать бессимптомно или с поражением респираторного тракта. Менингиты развиваются чаще у детей в возрасте от 6 мес.-до 3 лет. К 3-5 годам у многих детей появляются бактерицидные АТ к капсульному полисахаридному АГ (полирибозофосфату)

Лабораторная диагностика палочки инфлюэнцы.
Основу диагностики палочки инфлюэнцы составляют выделение и идентификация возбудителя.
Материалом служит слизь из зева, гнойное отделяемое, мокрота и др. Посевы обычно проводят на среду с сердечно-мозговой вытяжкой. Типичные колонии пересевают, выявляют наличие капсул (в реакции иммунного набухания Найфельда) и исследуют биохимические свойства. АГ бактерий выявляют при помощи РП в агаре. Важную информацию может дать анализ потребности в факторах X и V.
Прямой метод диагностики палочки инфлюэнцы. Выполняют газонный посев культуры на твёрдую питательную среду. Полоски бумаги, пропитанные факторами X и V, накладывают на поверхность агара. Рост бактерий вокруг полосок, а не на других участках среды, подтверждает предположение об их принадлежности к виду палочки инфлюэнцы.
Для идентификации палочки инфлюэнцы также применяют тест сателлитных колоний («бактериальная кормилка»). На КА засевают исследуемую культуру, а через центр чашки (по диаметру — штрихом) засевают золотистый стафилококк. Последний синтезирует фактор V, а также высвобождает фактор X, разрушая эритроциты. Около зоны роста стафилококка палочка инфлюэнзы образует более крупные колонии.