Кишечные бактерии. Сальмонеллы. Шигеллы

Возбудители бактериальной дизентерии – группа бактерий, объединенная в род шигеллы.
Роль этих микробов при дизентерии была установлена русским ученым А.В. Григорьевым (1891 год) и японским исследователем Шига (1898 год.)

Шигеллы подразделяются на 4 серогруппы на основании биохимических свойств и структуры соматического полисахаридного О-антигена. Каждая серогруппа соответствует виду: Sh. dysenteriae (серогруппа A), Sh. flexneri (серогруппа B), Sh. boydii ( серогруппа C) и Sh. sonnei (серогруппа D ). Внутри каждой серогруппы шигеллы подразделяются на О-серотипы, кроме Sh. sonnei (включает единственный серотип). У Sh. dysenteriae и Sh. boydii может присутствовать термолабильный К-антиген, маскирующий соматический антиген.

Небольшие нежные палочки размером 2 -3 мкм. Грамотрицательные, не образуют спор и капсул. Жгутиков не имеют. факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых питательных средах при температуре 37°С и pH 6,8 – 7,2. Колонии на плотных средах полупрозрачные, нежные, по характеру роста не отличаются от колоний сальмонелл.

По биохимическим свойствам отдельные виды возбудителей дизентерии различны. Углеводы они ферментируют с образованием кислоты без газа (за исключением бактерий Ньюкастл). Расщепляют глюкозу и не ферментируют лактозу (кроме шигелл Зоне). По отношению к манниту все шигеллы делят на две группы: маннит-положительные и маннит-отрицательные. Шигеллы редуцируют нитраты в нитриты, не разжижают желатин, не расщепляют мочевину.

Сильный экзотоксин белковой природы, обладающий нейротропным свойством, обнаружен только у шигелл дизентерии Григорьева – Шига.
Остальные возбудители дизентерии содержат термостабильный эндотоксин, представляющий липополисахаридно – протеиновый комплекс.

Возбудители бактериальной дизентерии сохраняются в течение 5 – 10 суток в воде, почве, на различных продуктах и предметах. При низкой температуре остаются жизнеспособными до 2 мес. Температура 60°С убивает их в течение 10 – 20 мин. Под действием 1% карболовой кислоты, хлорамина, хлорной извести шигеллы погибают за 30 мин. Быстро приобретают устойчивость к антибиотикам и сульфаниламидным препаратам.

Пестрый ряд

Биохимические признаки рода Shigella

Сальмонеллы – грамотрицательные короткие палочки с закругленными концами, размером 0,65 – 1 мкм. Подвижны за счет перитрихально расположенных жгутиков. Спор и капсул не образуют. Факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых питательных средах при температуре 20 - 40° С и pH от 5,0 – 8,0. на жидких средах дают равномерное помутнение. На МПА колонии мельче, чем у кишечных палочек, нежные, полупрозрачные. На дифференциально - диагностических средах Эндо, Плоскирева колонии мелкие, бесцветные. Ферментативные свойства постоянны: Не ферментируют лактозу и сахарозу, ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа. Сальмонелла тифа, однако, ферментирует их только до кислоты. Большинство сальмонелл белки расщепляет до сероводорода, не образует индола, не разжижает желатин, восстанавливает нитраты в нитриты. Сальмонеллы содержат эндотоксин.

В пыли, во льду, в чистой воде сохраняются до 3 мес. При температуре 70°С гибнут в течение 5 мин, при 100 °С – мгновенно. В соленом и копченом мясе они жизнеспособны 2,5 мес. В молоке могут размножаться. Под действием 1% раствора сулемы, 3 – 5% карболки и хлорамина гибнут за несколько минут.

Антигенная структура и классификация. Типов на основании О- (липополисахарид внешней мембраны) и Н- (жгутикового) антигенов (см. таблицу Кауфмана-Уайта). Капсульные серотипы (S. typhi) обладают Vi- антигеном (антиген вирулентности). Наиболее значимыми в клинической практике являются следующие серотипы (серовары): S. typhi, S. paratyphi A, S. schottmuelleri (S. paratyphi В) (возбудители брюшного тифа и паратифов), S. typhimurium, S enteritidis (возбудители сальмонеллеза)

Этапы исследования.
1-й день. Материал засевают во флаконы с 10-20% желчным бульоном (варианты: среда Рапопорт, селенитовый бульон, магниевая среда, среда Мюллера) для подавления роста сопутствующей микрофлоры.
2-й день. Пересевают на среды Эндо, Плоскирева или висмут-сульфитный агар. На среде Эндо сальмонеллы образуют бесцветные, иногда розоватые прозрачные колонии, на среде Плоскирева – бесцветные, мутноватые. На висмут-сульфит агаре S. typhi и S. paratyphi В образуют черные колонии с металлическим блеском, окруженные черным ободком (гало), S. paratyphi A - коричневато-зеленые колонии.
3-й день. Пересев колоний на скошенный агар со средой Олькеницкого или Ресселя для накопления чистой культуры. Сальмонеллы вызывают изменение только цвета столбика агара (разлагается только глюкоза). Паратифозные бактерии, в отличие от брюшнотифозных, разлагают углеводы с образованием газа, что приводит к разрывам в столбике агара.
4-й день. Идентификация культур, выросших на скошенном агаре. С этой целью проводят агглютинацию на стекле с групповыми и моно- ( О и Н ) сальмонеллезными сыворотками, что позволяет определить родовую, О-групповую и видовую (по комплексу О- и Н-антигенов) принадлежность возбудителя.

Реакция Видаля ставится в 6-ти рядах пробирок. Каждый ряд включает серию последовательных двукратных разведений сыворотки больного (от 1:50 до 1:600). В последнюю пробирку вносится физиологический раствор (контроль). Затем в пробирки, принадлежащие к одному ряду, вносят О- или Н-диагностикум, содержащий соответственно О- или Н- антигены палочек тифа и паратифов.
Пробирки термостатируют (37°С, 2 ч), затем сутки выдерживают при комнатной температуре. Результат учитывают на следующий день. Отмечают пробирки, где произошла агглютинация. На основании обнаружения антител к О- и H-антигенам сальмонелл, определяют серотип возбудителя по таблице Кауфмана-Уайта.

Наличие антигенов

Висмут-сульфит агар. Черные колонии - сальмонеллы

Домашнее задание
1. выучить схему исследования
2. виды ДДПС на шигеллы и сальмонеллы
3. знать отличия кишечной палочки от сальмонеллы и шигеллы
4. роль БГКП в физиологии человека