Основы иммуногематологии: группы крови системы Резус

Нормативные документы
Приказ от 25.11.2002 №363 «Об утверждении инструкции по применению компонентов крови».
Приказ №2 МЗ РФ от 09.01.1998г. «Об утверждении инструкций по иммуносерологии» (прил. №1 – «инструкция по предупреждению несовместимости при переливании крови»)
Приказ МЗ РФ от 02.04. 2013 г. № 183 н «Об
утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) её компонентов».

Основу современной науки о переливании компонентов крови
заложил К. Landsteiner, открыв в 1901 г. систему группы крови
АВО, а спустя еще четыре десятилетия - систему Резус.
К. Landsteiner, A. Wiener в 1940 г. установили, что при
иммунизации кроликов эритроцитами обезьян Macacus rhesus
сыворотка кроликов приобрела способность агглютинировать
эритроциты не только этих обезьян, но и большинства людей.
Так было открыто существование в эритроцитах агглютиногена,
получившего название резус – фактор.
Резус – фактор находится в эритроцитах людей, независимо от возраста и пола, и не связан с агглютиногенами А, В и О.

При помощи стандартных сывороток антирезус
было установлено наличие резус фактора в
эритроцитах около 85% людей, кровь которых
названа резус – положительной (Rh+),
и отсутствие резус – фактора у 15% человек, кровь
которых названа резус - отрицательной (rh-).

Определение резус–принадлежности.
Прежде чем приступить к исследованию, необходимо произвести
макроскопическую оценку диагностических стандартов:
- реактивы должны быть прозрачными, без осадка и других
признаков загрязнения,
- вскрытые флаконы должны быть закрытыми для
предотвращения подсыхания содержимого,
- проверить срок годности реактивов с даты изготовления,
указанной на этикетке,
- со дня вскрытия реактива (срок годности флакона).
Перед работой иммунологические стандарты выдержать при
комнатной температуре не менее 1 часа.

Реакция гемагглютинации на плоскости с помощью анти-D IgМ (полные антитела) моноклонального реагента
Определение производят в нативной крови,
стабилизированной с помощью консервантов;
в крови без антикоагулянта, в т. ч. взятой из пальца.
Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается
при использовании высокой концентрации эритроцитов
и температуре около +37°С, поэтому желательно
использовать подогретую пластинку.

Ход определения:
на пластинку со смачиваемой поверхностью наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента;
рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови;
смешивают кровь с реагентом стеклянной палочкой;
через 10-15 с покачивают пластинку в течение 20-30 с;
реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 с, четко выраженная крупнолепестковая агглютинация наступает через 30-60 с.
Результат агглютинации следует учитывать через 3 мин.

Резус-принадлежность крови устанавливают по наличию или отсутствию антигена D.
Rh0(D) + положительная Rh0(D) – отрицательная

Все отрицательные при первичном определении
Резус – принадлежности (D) результаты должны
подтверждаться в непрямой реакции Кумбса или
с использованием цоликлона «Анти-D».
Если при ёё выполнении определяется положительный
результат, то Резус-принадлежность трактуется как Du
(D weak + D vi partial).

АНТИГЕННАЯ СИСТЕМА РЕЗУС
Вариант антигена D со всеми эпитопами – нормальный, стандартный, полный D
Вариант, в структуре которого отсутствует один или несколько эпитопов – частичный (парциальный) D (Dpartial)
Антиген D только с двумя-тремя эпитопами – DVI
Вариант со всеми эпитопами, но выражены слабо (низкая экспрессия) – Dweak
Du

Для удобства в повседневной работе иммуногематологических лабораторий слабые варианты антигена D объединяют в группу Du, частота которой в популяции составляет около 1%.
Dcлабый (Dweak)
Dчастичный (Dpartial)
Du

Все варианты антигена Du должны быть обнаружены
в тех случаях, когда его присутствие может вызвать
иммунологическую угрозу:
- у доноров гемокомпонентов;
- у беременных женщин;
- у новорожденных Rh (D) – отрицательных матерей.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ
D u реципиент всегда Rh(D)-отрицательный
D u донор всегда Rh(D)-положительный
D u важно определять у беременных и новорожденных Rh(D)- отрицательных матерей

Система резус – одна из самых полиморфных антигенных систем эритроцитов крови человека.

Выделяют 5 антигенов системы Резус (Rh), имеющих наибольшее клиническое значение: D, С, с, Е, е, из которых три условно обозначены прописными буквами D,C,E («большие» антигены или антигены Rh), а два – строчными с и e («малые» антигены или антигены rh).
Существование шестого антигена (d или Hr) не доказано, так как не получены антитела против него.
D пары в виде антигена d – нет.

Система Резус представлена 5 антигенами,
которые встречаются в эритроцитах в виде
одного из 28 возможных сочетаний:

Распределение по группам системы резус
в зависимости от фенотипа

Фенотип реципиента устанавливают посредством
определения резус – принадлежности (антигена D)
и минорных трансфузионно опасных антигенов
С с Е е К к, тем самым осуществляя переливание
реципиенту идентичных по трансфузионно опасным
антигенам эритроцитов.
Реципиенту следует переливать эритроциты,
содержащие имеющиеся у него антигены.

Подтверждающее определение группы крови по системе АВО и резус - принадлежности, а также фенотипирование по антигенам С, с, Е, е, Сw, К, к и определение антиэритроцитарных антител у реципиента осуществляется в клинико-диагностической лаборатории.
(Приказ МЗ РФ от 02.04. 2013 г. № 183 н).

Определение фенотипа при помощи цоликлонов

Шкала иммуногенности трансфузионно - опасных антигенов эритроцитов
D>K>c>E>Cw>C>e>Fy>Leβ>Jk>S>s>Leα>k>P>M>N
Для клинической практики шкала приоритета трансфузионно опасных антигенов важна, поскольку подчеркивает значение антигенов эритроцитов, в особенности D, K, с, Е, C W, как источника наиболее частой причины посттрансфузионных осложнений.
Если при переливании эритроцитов учитывать минорные
антигены: К > с > Е > Cw > С > е, то посттрансфузионные
осложнения можно профилактировать на 98%.

Из большого числа трансфузионно опасных
антигенов эритроцитов современными
нормативными документами выделены лишь
немногие, совместимость по которым является
обязательным условием при переливании.

«Фенотипирование по антигенам С, с, Е, е, C W, К, к
у реципиента осуществляется в клинико –
диагностической лаборатории».
(Приказ МЗ РФ от 02.04. 2013 г. № 183 н).

«Донорская кровь и эритроцитсодержащие
компоненты переливаются только той группы
системы АВО и той группы системы Резус- и Келл –
принадлежности, которая имеется у реципиента».
(Приказ МЗ РФ от 02.04. 2013 г. № 183 н).

«Определение антигенов эритроцитов С, с, Е, е, Cw, К, к
с использованием реагентов, содержащих соответствующие
антитела (у детей до 18 лет, женщин детородного
возраста и беременных, реципиентов с отягощенным
трансфузионным анамнезом, имеющих антитела к
эритроцитов, реципиентов, нуждающихся в
многократных (в том числе повторных) трансфузиях
донорской крови или ее компонентов (кардиохирургия,
трансплантология, ортопедия, онкология, онкогематология,
травматология, гематология)».
(Приказ МЗ РФ от 02.04. 2013 г. № 183 н)

Гелевая технология

Типирование эритроцитов по антигенам систем RH / Kell
КАРТОЧКИ СКАНГЕЛЬ
Моноклональные RH/Kell: микропробирки 1-5 содержат специфические моноклональные антитела: анти-А, анти-Е, анти-с, анти-е, анти-К, нейтральный гель (контроль).
ЭРИТРОЦИТЫ
Образец крови:
10 мкл эритроцитов + 1000 мкл (1 мл) СканЛисс
ВЫПОЛНЕНИЕ ТЕСТА
Добавьте в каждую микропробирку
по 50 мкл суспензии эритроцитов
в СканЛисс
Центрифугируйте
Считайте результаты

Категории пациентов, у которых встречаются затруднения
при определении резус–принадлежности.