ПЦР-диагностика в АО СЗЦДМ: спектр исследований, преаналитика, особенности выполнения

ПЦР – полимеразная цепная реакция, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

Виды биологического материала для исследования методом ПЦР:
Кровь;
Моча;
Фекалии;
Соскобы из цервикального канала, уретры, отделяемое влагалища;
Мазки из ротоглотки, носоглотки, отделяемое конъюктивы;
Клещи;
Другое: ликвор, синовиальная жидкость, БАЛ, соскобы с эрозивно-язвенных элементов, мокрота, слюна.

Соблюдение правил преаналитики – залог достоверного результата.
Корректный вид материала;
Корректный сбор материала;
Корректная трактовка результата.

Спектр исследований методом ПЦР в АО «СЗЦДМ».
ИППП;
Гепатиты;
ВПЧ;
Герпес-вирусные инфекции; Туберкулез;
Токсоплазмоз;
ОКИ;
Инфекции, передающиеся иксодовыми клещами;
ОРВИ.

ИППП
Тип клинического материала определяется диагностической задачей.
Соскобное отделяемое цервикального канала: цервикальный скрининг с использованием ВПЧ-теста, этиологическая диагностика цервицита, мониторинг антибиотикотерапии цервицита.
Отделяемое или мазок из влагалища: скрининг на ВПЧ высокого онкогенного риска (женщины старше 25-30 лет), скрининг на ИППП, диагностика бактериального вагиноза, кандидоза, вагинита.
Моча: дифференциальная диагностика уретрита, цистита.

Соскобное отделяемое цервикального канала
Взятие материала производят с помощью цервикальной цитощетки в пробирку со специальной транспортной средой с муколитиком «ТСМ». Для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток, т.к. вирус является внутриклеточным агентом. В ряде случаев возможно взятие материала с помощью универсального гинекологического зонда, однако при этом объем соскобного отделяемого будет меньше, а количество клеток может быть недостаточным.
Удаляют слизь и отделяемое влагалища с поверхности шейки матки стерильным марлевым тампоном, вводят рабочую часть цитощетки в цервикальный канал и делают два-три полных оборота по часовой стрелке. Извлекают цитощетку и помещают ее рабочую часть, содержащую взятый материал, в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть цитощетки обламывают не более 1 см пластиковой основы цитощетки и оставляют в пробирке с транспортной средой. В случае невозможности обломить рабочую часть цитощетки или универсального зонда, следует максимально полно смыть клинический материал с их рабочей части в пробирку с транспортной средой, прижав ее к внутренней стороне пробирки и вращая по 5–10 раз по часовой и против часовой стрелки.

Взятие материала производят с помощью зонда-тампона или
универсального зонда в пробирку с транспортной средой. Материал из влагалища берут в достаточном количестве.
Рабочей частью зонда-тампона вращательным движением
проводят по поверхности боковых стенок влагалища, максимально полно собирая отделяемое.
Переносят зонд-тампон в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть зонда-тампона, содержащую исследуемый материал, обламывают и оставляют в пробирке с транспортной средой.
Недопустимо использование ножниц для обрезания рабочей части зонда-тампона!
В случае использования транспортной среды с муколитиком («ТСМ») ее цвет может измениться за счет изменения pH (при кислом рН отделяемого влагалища).
Пробирку плотно закрывают крышкой, не допуская зазора и
смятия внутренней части крышки, и маркируют.
Соскобное отделяемое или мазок из влагалища

Наши возможности
Условные патогены и абсолютные (качественные и количественные методики);
Оценка микробиоценоза влагалища (фемофлор, баквагиноз).
Конечная точка и Real-time.

ВПЧ
ВПЧ скрининг;
ВПЧ генотипирование;
ВПЧ 16/18 типы, с вирусной нагрузкой;
ВПЧ 6/11 типы (низкого онкогенного риска).

Вирусные гепатиты
HCV
качественно (чувствительность 50 МЕ/мл);
количественно (чувствительность 150 МЕ/мл);
HBV
качественно (чувствительность 50 МЕ/мл);
количественно (чувствительность 75 МЕ/мл);
HDV
качественно (чувствительность 50 МЕ/мл).

Герпес-вирусные инфекции
Качественные (CMV, HSV)
Детекция по конечной точке;
2. Количественные (EBV, CMV, HHV6)
Чувствительность тест-системы: 5копий/10^5 клеток и 400 копий/мл;
Выдача результата зависит от вида материала: копий на 10^5 клеток (кровь) или копий на мл (моча, ликвор, слюна, мазки).

Инфекции, передающиеся иксодовыми клещами
Принципиально весь биоматериал можно разделить на две группы
Иксодовые клещи Биологический материал
от укушенного человека
Кровь – мало информативна в сравнении с самим клещом.