Слайд 2Перед изучением свойств белка необходимо получить его чистый препарат
Первая стадия разрушения клеток
- грубый экстракт
Существуют различные виды фракционирования, одним из наиболее популярных является хроматография ( колоночная, ионообменная, афинная, эксклюзионная и др)
Слайд 3Что же такое хроматография?
Хроматогра́фия — метод разделения и анализа смесей веществ, а
также изучения физико-химических свойств веществ
Основан на распределении веществ между двумя фазами
В зависимости от используемого матрикса белки могут разделяться по заряду, гидрофобности, размеру и способности связывать конкретные химические группы
Слайд 4Ионообменная хроматография
Ионообменная хроматография основана на различии знака и величины заряда белков при
определенном значении ph
Носитель, которым заполняют колонку представляет собой синтетический полимер смолу, содержащий связанные заряженные группы.
Носитель с анионными группами называют катионообменником, а с катионными группами – анионообменниками.
При выборе ионообменной хроматографии руководствуются изоэлектрической точкой белка, при значении рн выше точки белок имеет отрицательный заряд, и при значении меньше положительный
Белок, несущий суммарный положительный заряд, движется в жидкой фазе медленнее, чем белок, несущий отрицательный заряд, поскольку продвижение первого белка тормозиться за счет взаимодействия с носителем.