Исследование n-метилольных производных аллантоина методом тонкослойной хроматографии

Актуальность
Аллантоин
Косметология
Медицина
Сельское хозяйство
Диазолидинилмочевина
Косметология
Медицина
Хлорметильное производное аллантоина
1-(хлорметил)-3-(1,3,4-трис(хлорметил)-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил)мочевина
[1] Doi, T. Kajimura K. , Taguchi S.,The different decomposition properties of diazolidinyl urea in cosmetics and patch test materials // Contact Dermatitis. 2011.Vol .65. P. 81-91.
[2] Liebert, M. A. Final Report on the Safety Assessment of Diazolidinyl Urea // International Journal of Toxicology . 1990. Vol. 9(2). P. 229-245.
[3] Thornfeldt , C. Cosmeceuticals containing herbs: fact, fiction, and future // Dermatol Surg. 2005. Vol. 31. P. 873-880.
[4] Патент РФ 2178290, опубл. 2002.
[5] Патент Германия 4137544, опубл. 1993.

Достоинства и недостатки метода ТСХ
Достоинства
Недостатки
Экспрессность
Доступность
Дешёвое оборудование
Наглядность и информативность
Трудоемкость
Использование токсичных растворителей
[6] ОФС.1.2.1.2.0003.15 «Тонкослойная хроматография», ГФ РФ изд. XIII

Цель и задачи
Цель – разработка метода контроля синтеза хлорметильных производных аллантоина путем детектирования диазолидинилмочевины методом тонкослойной хроматографии.
Задачи:
Анализ литературных данных в области ТСХ для гетероциклических азотсодержащих соединений
Подбор детектирующего агента
Подбор элюирующей системы
Подбор условий хроматографирования

Методики ТСХ для гетероциклических соединений
Методика ТСХ бикарэта
Элюирующая система: ацетон – хлороформ (1:2)
Проявитель: 10% раствор ФМК
Методика ТСХ аллантоина
Элюирующая система: ледяная уксусная кислота – вода – бутанол (15:25:60)
Проявитель: Реактив Эрлиха
Методика ТСХ имидазолидинилмочевины
Элюирующая система: хлороформ – метанол – уксусная кислота – вода (5:3:1:1)
Проявитель: Раствор нингидрина
[7] British Pharmacopoeia (BP), 2013.
[8] Казанцева, О.Н. Химико-фармацептическое и фармакокинетическое исследование нового биологически активного психотропного вещества 2,4,6,8-тетраэтил-2,4,6,8 – тетраазобицикло/3,3,0/октандиона-3,7/ бикарэта/: автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. фарм. наук: 15.00,.2/ Казанцева Ольга Николаевна.- Уфа, 1992. – С. 7.
[9] RYDER D. S. , The thin layer chromatographic detection and determination of an imidazolidinyl urea ß preservauve // J. Soc. Cosmet. Chem. 1974. Vol. 25. P. 535–544.

Универсальные проявители для ТСХ
Раствор 2,4‑динитрофенилгидразина в HCl 2М
1% раствор FeCl3
Раствор K2Cr2O7 в конц. H2SO4
Реактив Несслера

Реакция на пластине: Результат:
1. Раствор AgNO3 в NH3 (Реактив Толленса)
2. Раствор β-индолилуксусной кислоты в HCl (УФ 366 нм)
3. Раствор нингидрина в бутаноле и уксусной кислоте
Подбор специфического проявителя

Проверка выбранных методик
Методика ТСХ бикарэта
Элюирующая система: ацетон – хлороформ (1:2)
Проявитель : 10% раствор ФМК Реактив Толленса
Методика ТСХ аллантоина
Элюирующая система: ледяная уксусная кислота – вода – бутанол (15:25:60)
Проявитель : Реактив Эрлиха Реактив Толленса
Методика ТСХ имидазолидинилмочевины
Элюирующая система: хлороформ – метанол – уксусная кислота – вода (5:3:1:1)
Проявитель : Раствор нингидрина Реактив Толленса
[7] British Pharmacopoeia (BP), 2013.
[8] Казанцева, О.Н. Химико-фармацептическое и фармакокинетическое исследование нового биологически активного психотропного вещества 2,4,6,8-тетраэтил-2,4,6,8 – тетраазобицикло/3,3,0/октандиона-3,7/ бикарэта/: автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. фарм. наук: 15.00,.2/ Казанцева Ольга Николаевна.- Уфа, 1992. – С. 7.
[9] RYDER, D. S. The thin layer chromatographic detection and determination of an imidazolidinyl urea ß preservauve // J. Soc. Cosmet. Chem. 1974. Vol. 25. P. 535–544.

Двумерная хроматография
Элюирующая система: бутанол –вода – ледяная уксусная кислота (15:25:60)
Проявитель : Реактив Толленса
[10] Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии: пер. с англ. Изд. 1-е, под ред. профессора В.Г. Березкина, 1987.

Подбор элюента
[10] Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии: пер. с англ. Изд. 2-е, под ред. профессора В.Г. Березкина, 1987.
Увеличение полярности

Выбранные элюирующие системы
ТГФ-ДМФА-ЛУК
Ацетонитрил-метанол-ЛУК
Ацетон-метанол-ЛУК
Проявитель: реактив Толленса

Двумерная хроматография
1
2
3
Ацетон-метанол-ЛУК(7:2:0,5)
Ацетонитрил-метанол-ЛУК(7:2:0,5)
ТГФ-ДМФА-ЛУК(7:2:0,5)

Выводы
1. Проведен анализ литературных данных о применении ТСХ;
2. Подобрана хроматографическая система для анализа диазолидинилмочевины – ацетонитрил-метанол-ЛУК ;
3. Подобран проявитель – реактив Толленса.
4. Обнаружен факт гидролиза диазолидинилмочевины на кислом силикагеле при использовании некоторых элюентов.